L'accouplement et la séparation des Tétrade Chlamydomonas reinhardtii Pour l'analyse génétique
Summary
L'accouplement et la séparation des tétrades sont nécessaires pour l'analyse génétique dans<em> Chlamydomonas reinhardtii</em>. Ici nous démontrons des méthodes standard pour la gamétogenèse, l'accouplement, la germination et la dissection de tétrade zygote. Ce protocole consiste en une série facile à suivre des étapes qui feront des approches génétiques se prêtent à des scientifiques qui sont moins familiers avec<em> Chlamydomonas</em>.
Abstract
L'algue verte unicellulaire<em> Chlamydomonas reinhardtii</em> (<em> Chlamydomonas</em>) Est devenu un organisme populaire pour la recherche dans divers domaines de la biologie cellulaire et la génétique en raison de son cycle de vie simple, la facilité de croissance et de manipulation pour l'analyse génétique, les ressources génomiques et transformabilité du noyau et les deux organites. Souches accouplement est une pratique courante lors des approches génétiques sont utilisés dans<em> Chlamydomonass</em>, De créer des diploïdes végétative pour l'analyse de la domination, ou suite à une dissection de tétrade d'héritage nucléaire vs organelles vérifier, de tester allélisme, d'analyser epistasy, ou de générer des populations dans le but d'une carte basée sur le clonage. En outre, les croisements génétiques sont couramment utilisés pour combiner les génotypes organelles avec notamment des génotypes nucléaires. Ici nous démontrons des méthodes standard pour la gamétogenèse, l'accouplement, la germination et la séparation zygote tétrade. Ce protocole consiste en une série facile à suivre des étapes qui feront des approches génétiques se prêtent à des scientifiques qui sont moins familiers avec<em> Chlamydomonas</em>. Les paramètres clés et les points chauds sont expliquées. Enfin, les ressources pour plus d'informations et les méthodes alternatives sont fournies.
Protocol
Discussion
L'analyse génétique est simple chez Chlamydomonas, mais elle nécessite des techniques particulières pour générer des gamètes et la progéniture tétrade séparé. Avec les souches saines, les techniques sont facilement acquises. Avec certaines souches mutantes, il devient de plus d'un art, et les lecteurs doivent se reporter tome 1 du Sourcebook publié récemment des Chlamydomonas notes historiques et des conseils pratiques. Par ailleurs, il convient de noter qu'il ya beauc…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce protocole est basé sur les techniques apprises dans le laboratoire de Francis-André Wollman à la France Institut de Biologie Physico-Chimique, Paris,. Les auteurs ont une dette de gratitude à Jacqueline Girard-Bascou, qui avait initialement introduit DBS aux techniques de Chlamydomonas génétique. Chlamydomonas la recherche dans le laboratoire de l'auteur »est soutenu par la National Science Foundation récompense MCB-0646350.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | Mating type plus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | Mating type minus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | Growth medium | |||
| N10 | Growth medium | |||
| Difco agar | Reagent | |||
| Fisherbrand Stainless-Steel Blades | Tools | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD Surgical Blade Handles | Tools | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand Metal Scalpels | Tools | Fisher Scientific | 08-920A |
References
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 119-273 (2005).
