הזדווגות והפרדה של הטטרדה Chlamydomonas reinhardtii עבור ניתוח גנטי
Summary
הזדווגות והפרדה הטטרדה נדרשים לניתוח גנטי<em> Chlamydomonas reinhardtii</em>. כאן אנו מדגימים שיטות תקן, נביטה gametogenesis, הזדווגות הזיגוטה ו לנתיחה הטטרדה. פרוטוקול זה מורכב מסדרה קל לעקוב אחר צעדים שיהפכו גישות גנטיות מקובל מדענים שמכירים פחות<em> Chlamydomonas</em>.
Abstract
Unicellular אצה ירוקה<em> Chlamydomonas reinhardtii</em> (<em> Chlamydomonas</em>) הפך פופולרי אורגניזם למחקר בתחומים מגוונים של ביולוגיה של התא וגנטיקה בגלל מחזור החיים הפשוטים שלה, קלות צמיחה מניפולציה לצורך ניתוח גנטי משאבים גנטי, ו transformability הגרעין ושניהם האברונים. זנים הזדווגות היא מנהג נפוץ כאשר גישות גנטי משמשים<em> Chlamydomonass</em>, ליצור diploids וגטטיבי לניתוח של דומיננטיות, או לאחר דיסקציה הטטרדה לירושה גרעיני לעומת organellar לברר, לבדוק allelism, לנתח epistasy, או ליצור אוכלוסיות לצורך שיבוט המפה מבוססת. בנוסף, חוצה גנטי משמשים באופן שגרתי לשלב גנוטיפים organellar עם גנוטיפים גרעיני בפרט. כאן אנו מדגימים שיטות תקן, נביטה gametogenesis, הזדווגות הזיגוטה והפרדה הטטרדה. פרוטוקול זה מורכב מסדרה קל לעקוב אחר צעדים שיהפכו גישות גנטיות מקובל מדענים שמכירים פחות<em> Chlamydomonas</em>. פרמטרים מרכזיים מועדים לפורענות מוסברים. לבסוף, מקורות מידע נוספים חלופה שיטות מסופקים.
Protocol
Discussion
אנליזה גנטית פשוטה Chlamydomonas, אבל זה דורש טכניקות מסוים כדי לייצר גמטות והצאצאים הטטרדה נפרד. עם זנים בריא, טכניקות נרכשות בקלות. עם כמה זנים מוטנטים, הוא הופך להיות יותר אמנות, וקוראים צריך להפנות כרך 1 של Sourcebook Chlamydomonas לאחרונה פרסם הערות היסטוריות רמזים מעשית….
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
פרוטוקול זה מבוסס על הטכניקות שנלמדו במעבדה של פרנסיס, אנדרה וולמן על צרפת Institut de Biologie פיסיקלי Chimique, פריז. המחברים חבים חוב של הכרת תודה ז'קלין Girard-Bascou, אשר במקור הציג DBS טכניקות Chlamydomonas גנטית. Chlamydomonas מחקר במעבדה של המחברים הוא נתמך על ידי הקרן הלאומית למדע פרס MCB-0646350.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | Mating type plus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | Mating type minus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | Growth medium | |||
| N10 | Growth medium | |||
| Difco agar | Reagent | |||
| Fisherbrand Stainless-Steel Blades | Tools | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD Surgical Blade Handles | Tools | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand Metal Scalpels | Tools | Fisher Scientific | 08-920A |
References
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 119-273 (2005).
