Paarung und Tetrad Trennung von Chlamydomonas reinhardtii Für genetische Analysen
Summary
Paarung und Tetrade Trennung sind für die genetische Analyse benötigt<em> Chlamydomonas reinhardtii</em>. Hier zeigen wir Standard-Methoden zur Gametogenese, Paarung, Zygote Keimung und Tetrade Dissektion. Dieses Protokoll besteht aus einem einfach zu folgen Reihe von Schritten, um genetische Ansätze zugänglich Wissenschaftler, die weniger vertraut sind werden<em> Chlamydomonas</em>.
Abstract
Die einzellige Grünalge<em> Chlamydomonas reinhardtii</em> (<em> Chlamydomonas</em>) Hat sich zu einem beliebten Organismus für die Forschung in den verschiedensten Bereichen der Zellbiologie und Genetik wegen seiner einfachen Lebenszyklus, Leichtigkeit des Wachstums und der Manipulation der genetischen Analyse genomischer Ressourcen und Wandelbarkeit des Kerns und beide Organellen. Mating-Stämme ist eine gängige Praxis, wenn genetische Ansätze in werden<em> Chlamydomonass</em>, Um vegetative Diploiden für die Analyse von Dominanz zu erstellen, oder folgende Tetrade Dissektion feststellen nuklearen vs Organellen Erbe, auf Allelietest, um epistasy analysieren, oder die Bevölkerung zum Zwecke der map-basierte Klonen zu erzeugen. Darüber hinaus sind genetische Kreuze routinemäßig verwendet, um Organellen Genotypen mit bestimmten nuklearen Genotypen zu kombinieren. Hier zeigen wir Standard-Methoden zur Gametogenese, Paarung, Zygote Keimung und Tetrade Trennung. Dieses Protokoll besteht aus einem einfach zu folgen Reihe von Schritten, um genetische Ansätze zugänglich Wissenschaftler, die weniger vertraut sind werden<em> Chlamydomonas</em>. Key-Parameter und Krisenherde sind erläutert. Schließlich werden die Ressourcen für weitere Informationen und alternative Methoden zur Verfügung gestellt.
Protocol
Discussion
Genetische Analyse ist einfach in Chlamydomonas, aber es erfordert spezielle Techniken, um Gameten und separate Tetrade Nachkommen zu erzeugen. Mit gesunder Stämme sind die Techniken leicht erworben. Bei einigen Mutanten, wird es eher eine Kunst, und der Leser sollte Band 1 der kürzlich veröffentlichten Chlamydomonas Sourcebook für historische Anmerkungen und praktische Hinweise beziehen. Darüber hinaus ist anzumerken, dass es viele Variationen über das Grundthema oben beschrieben, von der Method…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dieses Protokoll basiert auf Techniken, die in dem Labor von Francis-André Wollman am Institut de Biologie Physikalisch-Chimique, Paris, Frankreich gelernt basiert. Die Autoren schulden Dank Jacqueline Girard-Bascou, die ursprünglich eingeführt DBS zu Chlamydomonas genetischen Techniken. Chlamydomonas Forschung in der Autoren-Labor von der National Science Foundation Award MCB-0646350 wird unterstützt.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | Mating type plus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | Mating type minus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | Growth medium | |||
| N10 | Growth medium | |||
| Difco agar | Reagent | |||
| Fisherbrand Stainless-Steel Blades | Tools | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD Surgical Blade Handles | Tools | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand Metal Scalpels | Tools | Fisher Scientific | 08-920A |
References
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 119-273 (2005).
