Parning och tetrad Separation av Chlamydomonas reinhardtii För genetisk analys
Summary
Parning och tetrad separation krävs för genetisk analys<em> Chlamydomonas reinhardtii</em>. Här visar vi standardmetoder för gametogenes, parning, zygot groning och tetrad dissekering. Detta protokoll består av en enkel att följa serie steg som kommer att göra genetiska metoder som lämpar sig för forskare som är mindre bekanta med<em> Chlamydomonas</em>.
Abstract
Den encelliga grönalger<em> Chlamydomonas reinhardtii</em> (<em> Chlamydomonas</em>) Har blivit en populär organism för forskning inom skilda områden av cellbiologi och genetik på grund av dess enkla livscykel, enkel tillväxt och manipulation för genetisk analys, genresurser och transformability av kärnan och båda organeller. Parning stammar är en vanlig metod när genetiska metoder används i<em> Chlamydomonass</em> Att skapa vegetativ diploider för analys av dominans, eller efter tetrad dissektion att ta reda på kärnkraft kontra organellar arv, testa allelism, analysera epistasy, eller för att generera populationer för att kartbaserade kloning. Dessutom är genetiska kors rutinmässigt används för att kombinera organellar genotyper med särskild kärnkraft genotyper. Här visar vi standardmetoder för gametogenes, parning, zygot groning och tetrad separation. Detta protokoll består av en enkel att följa serie steg som kommer att göra genetiska metoder som lämpar sig för forskare som är mindre bekanta med<em> Chlamydomonas</em>. Viktiga parametrar och oroshärdar förklaras. Slutligen finns resurser för ytterligare information och alternativa metoder ges.
Protocol
Discussion
Genetisk analys är enkel i Chlamydomonas, men det kräver särskild teknik för att generera könsceller och separat tetrad avkomma. Med friska stammar, är de tekniker som lätt förvärvats. Med vissa muterade stammar, blir det mer av en konst, och läsare bör hänvisa volym 1 av den nyligen publicerade Chlamydomonas Sourcebook för historiska anteckningar och praktiska tips. Dessutom bör det noteras att det finns många variationer på det grundläggande temat beskrivs ovan, från den metod för …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta protokoll är baserat på tekniker lärt sig i laboratoriet av Francis-André Wollman vid Institut de Biologie fysikalisk-Chimique, Paris, Frankrike. Författarna är skyldig en skuld av tacksamhet till Jacqueline Girard-Bascou, som ursprungligen infördes DBS till Chlamydomonas genteknik. Chlamydomonas forskning i författarnas laboratoriet stöds av National Science Foundation Award MCB-0.646.350.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | Mating type plus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | Mating type minus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | Growth medium | |||
| N10 | Growth medium | |||
| Difco agar | Reagent | |||
| Fisherbrand Stainless-Steel Blades | Tools | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD Surgical Blade Handles | Tools | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand Metal Scalpels | Tools | Fisher Scientific | 08-920A |
References
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 119-273 (2005).
