Создание данио рерио гиногенетических диплоидных на ранних давления
Summary
Это метод генерации гиногенетических диплоидных эмбрионов данио рерио (эмбрионы, единственный генетический вклад происходит от матери), блокируя второго деления мейоза сразу после оплодотворения ультрафиолетовым светом инактивированная сперма. EP эмбрионы не являются полностью гомозиготных из-за рекомбинации во время первого деления мейоза, однако они гомозиготных по всем локусам, которые не были отделены от их центромеры рекомбинации.
Abstract
Гетерозиготности диплоидных эукариот часто делает генетические исследования громоздким. Методы, которые производят жизнеспособные диплоидные гомозиготные потомства непосредственно от гетерозиготных женщин позволяют F1 мутагенизированных женщин пройти обследование непосредственно для вредных мутаций в ускоренном вперед генетические экране. Streisinger и соавт.<sup> 1,2</sup> Описаны методы изготовления гиногенетических (гомозиготные) диплоидный данио, активизируя данио яйца с ультрафиолетовым светом инактивированная сперма и предотвращение либо второй мейоза или первый зиготических деление клеток с помощью физических методов лечения (тепла или давления), что deploymerize микротрубочек. "Раннее давление" (EP) метод блокирует мейоз II, которая происходит вскоре после оплодотворения. Метод ЕР производит высокий процент жизнеспособных эмбрионов, которые могут развиваться в плодородной взрослых обоего пола. Метод генерирует эмбрионов, которые гомозиготных по всем локусам кроме тех, которые были разлучены со своими центромеры рекомбинации в мейозе И. гомозиготные мутации обнаружены в муфтами ЕР в пределах от 50% для центромерным локусов и менее 1% для теломерных локусов. Этот метод воспроизводится дословно из данио рерио книга<sup> 3</sup>.
Protocol
Discussion
Важно, чтобы убедиться, что эмбрион, полученный с помощью этого метода верны диплоиды гиногенетических. В качестве контроля генерировать сцепление нормальных диплоидных яиц (в сторону, сохраняя некоторые из спермы без УФ-инактивации) и сцепление гаплоидных эмбрионов (в сторону, сохран…
Acknowledgements
Методы искусственного оплодотворения и гиногенетических диплоиды были разработаны для рыбок данио по Charline Уокер в лаборатории Джорджа Streisinger в Университете штата Орегон в 1970-х и 1980-х. Метод, описанный здесь не претерпела изменений с протоколами Charline, которые доступны в полном объеме в Книгу данио рерио 3.
Методы искусственного оплодотворения и гиногенетических диплоиды были разработаны для рыбок данио по Charline Уокер в лаборатории Джорджа Streisinger в Университете штата Орегон в 1970-х и 1980-х. Метод, описанный здесь не претерпела изменений с протоколами Charline, которые доступны в полном объеме в Книгу данио рерио 3.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Tricaine | Sigma | |||
| Watch glass | ||||
| French Press | ||||
| Pressure cylinder | ||||
| Instant ocean | ||||
| Pasteur pipettes | Cut off the narrow end, fire polish | |||
| UV cross-linker | ||||
| microcapillaries |
References
- Streisinger, G. Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish. 유전학. 112 (2), 311-311 (1986).
- Streisinger, G. Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).
- Westerfield, M. . The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).
- Johnson, S. L., Africa, D., Horne, S., Postlethwait, J. H. Half-tetrad analysis in zebrafish: mapping the ros mutation and the centromere of linkage group I. 유전학. 139 (4), 1727-1727 (1995).
- Beattie, C. E., Raible, D. W., Henion, P. D., Eisen, J. S. Early pressure screens. Methods Cell Biol. 237 (71), 2575-25 (1999).
- Johnson, S. L. Centromere-linkage analysis and consolidation of the zebrafish genetic map. 유전학. 142 (4), 1277-1277 (1996).
- Trede, N. S. Zebrafish mutants with disrupted early T-cell and thymus development identified in early pressure screen. Dev Dyn. 237 (9), 2575-2575 (1999).
