Erken Basınç Gynogenetic Diployid Zebra balığı
Summary
Bu ultraviyole ışık inaktive sperm döllenme hemen sonra ikinci mayoz bölünme bloke ederek gynogenetic diploid zebrafish embriyolar (sadece genetik katkı anneden gelen embriyolar) üretmek için kullanılan bir yöntemdir. EP embriyolarının ilk mayoz bölünme sırasında rekombinasyon nedeniyle tamamen homozigot değildir, ancak onlar kendi sentromer ayrılmış rekombinasyon henüz tüm lokuslar homozigot.
Abstract
Diploid ökaryotlarda Heterozigosite genellikle genetik çalışmalar hantal yapar. Heterozigot kadınlarda doğrudan uygulanabilir homozigot diploid yavrular meydana Yöntemleri F1 mutagenized kadınlarda ileri genetik hızlandırılmış bir ekran doğrudan zararlı mutasyonlar için taranmalıdır izin verir. Streisinger et al.<sup> 1,2</sup> Gynogenetic (homozigot) diploid zebrafish yapmak için ultraviyole ışık inaktive sperm ile zebrafish yumurta ve fiziksel tedavileri (ısı ve basınç) deploymerize mikrotübül kullanarak aktive ikinci mayotik veya ilk Zigotik hücre bölünmesi ya önlenmesi yöntemleri açıklanmıştır. Döllenmeden hemen sonra ortaya çıkan "erken basıncı" (EP) yöntemi bloklar mayoz II. AP yöntemi, her iki cinsiyetten verimli yetişkin gelişebilir yüksek oranda canlı embriyo üretir. Bu yöntem, mayoz I. homozigot mutasyonlar sentromerik lokusların için% 50 ve% 1'den daha az telomerik lokuslar arasında EP kavramalar tespit sırasında rekombinasyon tarafından kendi sentromer ayrıldı dışında tüm lokuslar homozigot olan embriyolar üretir. Bu yöntem, Zebra balığı Kitap birebir çoğaltılamaz.<sup> 3</sup>.
Protocol
Discussion
Bu yöntemle üretilen embriyolar, gerçek gynogenetic diploitler olduğundan emin olmak için çok önemlidir. Kontrol grubu olarak normal diploid yumurta (UV inaktivasyon olmadan bazı sperm kenara tutmak) ve haploid embriyolar (AP prosedür yoluyla gitmeden UV sperm ile döllenmiş yumurta, bir debriyaj kenara tutarak) bir kavrama, bir debriyaj oluşturur. 1 gün sonrası döllenme haploid embriyolar azından kısa bir vücut ekseni, düzensiz beyin ve hücre gruplarının morfoloji var. Haploids 2-3 gün sonra canl?…
Acknowledgements
In vitro fertilizasyon ve gynogenetic diploitler Yöntemleri Charline Walker tarafından 1970'lerde ve 1980'lerde Oregon Üniversitesi'nden George Streisinger laboratuarında zebrafish için geliştirilmiştir. Burada anlatılan yöntemi Charline Zebra balığı Kitap 3 tam mevcuttur protokollerini değişmez.
In vitro fertilizasyon ve gynogenetic diploitler Yöntemleri Charline Walker tarafından 1970'lerde ve 1980'lerde Oregon Üniversitesi'nden George Streisinger laboratuarında zebrafish için geliştirilmiştir. Burada anlatılan yöntemi Charline Zebra balığı Kitap 3 tam mevcuttur protokollerini değişmez.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Tricaine | Sigma | |||
| Watch glass | ||||
| French Press | ||||
| Pressure cylinder | ||||
| Instant ocean | ||||
| Pasteur pipettes | Cut off the narrow end, fire polish | |||
| UV cross-linker | ||||
| microcapillaries |
References
- Streisinger, G. Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish. 유전학. 112 (2), 311-311 (1986).
- Streisinger, G. Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).
- Westerfield, M. . The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).
- Johnson, S. L., Africa, D., Horne, S., Postlethwait, J. H. Half-tetrad analysis in zebrafish: mapping the ros mutation and the centromere of linkage group I. 유전학. 139 (4), 1727-1727 (1995).
- Beattie, C. E., Raible, D. W., Henion, P. D., Eisen, J. S. Early pressure screens. Methods Cell Biol. 237 (71), 2575-25 (1999).
- Johnson, S. L. Centromere-linkage analysis and consolidation of the zebrafish genetic map. 유전학. 142 (4), 1277-1277 (1996).
- Trede, N. S. Zebrafish mutants with disrupted early T-cell and thymus development identified in early pressure screen. Dev Dyn. 237 (9), 2575-2575 (1999).
