Summary

Direkte Instillation von gelösten Stoffen in Mauslunge

Published: August 29, 2010
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Summary

Intratracheale Instillationen liefern Solute direkt in die Lunge. Dieses Verfahren zielt auf die Lieferung der instillate in den distalen Regionen der Lunge, und wird daher oft in Studien am Studium Alveolen gerichtet eingebaut. Wir bieten Ihnen eine detaillierte Überleben Protokoll für die Durchführung intratracheale Instillationen in Mäusen.

Abstract

Intratracheale Instillationen liefern Solute direkt in die Lunge. Dieses Verfahren zielt auf die Lieferung der instillate in den distalen Regionen der Lunge, und wird daher oft in Studien am Studium Alveolen gerichtet eingebaut. Wir bieten Ihnen eine detaillierte Überleben Protokoll für die Durchführung intratracheale Instillationen in Mäusen. Mit diesem Ansatz kann eine Lieferung von Test-Solute oder festen Stoffen (wie Lungen-Therapeutika, Tenside, Viren und kleine Oligonukleotide) in den distalen Lunge Ziel. Tracheal Instillationen kann die bevorzugte Methode sein, über Inhalation Protokolle, die in erster Linie an der oberen Atemwege und möglicherweise aussetzen Ermittler potentiell gefährlicher Stoffe. Zusätzlich bei der Verwendung der Instillation Protokoll, können Tiere in vollem Umfang aus dem nicht-invasive Verfahren zu erholen. Dies ermöglicht für die Herstellung anschließenden physiologischen Messungen an Versuchstieren oder Neuinstallation mit dem gleichen Tier. Die Höhe der instillate in die Lunge eingeführt sorgfältig bestimmt werden und osmotisch ausbalanciert, um Tier-Erholung zu gewährleisten. In der Regel können 30-75 ul instillate Volumen in Mauslunge eingeführt werden.

Protocol

1. Anästhesie Betäubende Mäuse mit Isofluran kann die Behandlung der Tiere und Zurückhaltung vor Erleichterung auf die Verwaltung Anästhesie intraperitaneally. Mit einem inhalativen Narkosemittel kann oder auch nicht geeignet für eine bestimmte Studie: bestimmen zunächst die Auswirkungen der Verwendung von Isofluran oder andere Betäubungsmittel, über die vorgeschlagenen Lunge zu studieren. Anesthetize Tiere mit Isofluran. Das Video zeigt den Einsatz eines Isofluran Verdampferkammer bei 2% I…

Discussion

Intratracheale Instillationen in mehreren verschiedenen Studien wurden verwendet, um die Toxizität von Testsubstanzen (6) zu bewerten, zu induzieren alveolären Lungenschädigung (4, 7), ersetzen Tenside (8), sowie alter Genexpression über Lieferung von kleinen Oligonukleotide direkt in die Lunge (5). Wir prüfen derzeit den Einsatz von Einträufeln 1) fluoreszierenden Redox-sensitive Material in die Lunge, um oxidativen Stress in vivo Messung unter normalen und pathophysiologischen Bedingungen, sowie 2) einzuflößen…

Acknowledgements

Diese Arbeit wurde vom NIH K99 HL09222601 und der S & R Foundation Ryaji Uneo Award ausgezeichnet zu MNH unterstützt.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Isoflurane   Webster Veterinary Sterling , MA 14043-220-05  
Xylazine   Lloyd Laboratories Shenandoah, IA   New Animal Drug Application #139-236
Ketamine   Bioniche Pharma Lake Forest, IL 67457-001-10  
Nair       Available at drug stores
1mL SubQ Syringe   BD Syringe Franklin Lakes, NJ 309597 26 5/8 G
4-0 Nylon Suture   Ethicon San Lorenzo, Puerto Rico 1894G.S30  

References

  1. Driscoll, K. E., Costa, D. L., Hatch, G., Henderson, R., Oberdorster, G., Salem, H., Schlesinger, R. B. Intratracheal instillation as an exposure technique for the evaluation of respiratory tract toxicity: uses and limitations. Toxicol Sci. 55, 24-35 (2000).
  2. Helms, M. N., Jain, L., Self, J. L., Eaton, D. C. Redox regulation of epithelial sodium channels examined in alveolar type 1 and 2 cells patch-clamped in lung slice tissue. J Biol Chem. 283, 22875-22883 (2008).
  3. Helms, M. N., Self, J., Bao, H. F., Job, L. C., Jain, L., Eaton, D. C. Dopamine activates amiloride-sensitive sodium channels in alveolar type I cells in lung slice preparations. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 291, L610-L618 (2006).
  4. Iyer, S. S., Ramirez, A. M., Ritzenthaler, J. D., Torres-Gonzalez, E., Roser-Page, S., Mora, A. L., Brigham, K. L., Jones, D. P., Roman, J., Rojas, M. Oxidation of extracellular cysteine/cystine redox state in bleomycin-induced lung fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 296, L37-L45 (2009).
  5. Li, T., Folkesson, H. G. RNA interference for alpha-ENaC inhibits rat lung fluid absorption in vivo. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 290, L649-L660 (2006).
  6. Sager, T., Porter, D., Robinson, V., Lindsley, W., Schwegler-Berry, D., Castranova, V. An improved method to disperse nanoparticles for in vitro and in vivo investigation of toxicity. Nanotoxicol. 1, 118-129 (2007).
  7. Xu, J., Gonzalez, E. T., Iyer, S. S., Mac, V., Mora, A. L., Sutliff, R. L., Reed, A., Brigham, K. L., Kelly, P., Rojas, M. Use of senescence-accelerated mouse model in bleomycin-induced lung injury suggests that bone marrow-derived cells can alter the outcome of lung injury in aged mice. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 64, 731-739 (2009).
  8. Yeh, T. F., Lin, H. C., Chang, C. H., Wu, T. S., Su, B. H., Li, T. C., Pyati, S., Tsai, C. H. Early intratracheal instillation of budesonide using surfactant as a vehicle to prevent chronic lung disease in preterm infants: a pilot study. Pediatrics. 121, e1310-e1318 (2008).

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Cite This Article
Helms, M. N., Torres-Gonzalez, E., Goodson, P., Rojas, M. Direct Tracheal Instillation of Solutes into Mouse Lung. J. Vis. Exp. (42), e1941, doi:10.3791/1941 (2010).

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