Summary

マウス肺への溶質の直接気管点眼

Published: August 29, 2010
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Summary

気管内点滴は直接肺に溶質を提供します。この手順では、肺の遠位領域にinstillateの配信をターゲットとし、従って多くの場合、肺胞の勉強を目的とした研究に組み込まれています。我々は、マウスで気管内点滴を行うための詳細な生存のプロトコルを提供しています。

Abstract

気管内点滴は直接肺に溶質を提供します。この手順では、肺の遠位領域にinstillateの配信をターゲットとし、従って多くの場合、肺胞の勉強を目的とした研究に組み込まれています。我々は、マウスで気管内点滴を行うための詳細な生存のプロトコルを提供しています。このアプローチを使用して、一つは遠位肺に(例えば、肺の治療薬、界面活性剤、ウイルス、および小規模なオリゴヌクレオチドとして)テストの溶質または固体の配信をターゲットにすることができます。気管点滴は、主に上気道を対象に、おそらく潜在的に有害物質への捜査官を公開することができる吸入プロトコルを介して、好みの方法論があります。さらに、気管注入プロトコルを使用して、動物は完全に非侵襲的な手順から回復することができます。これは、同じ動物を用いた試験の動物、または再インストール時にも、その後の生理的な測定をすることが可能になる。肺に導入instillateの量は、慎重に決定され、動物の回復を確実にするために浸透圧バランスする必要があります。通常は、30から75μLinstillateのボリュームは、マウスの肺に導入することができる。

Protocol

1。麻酔イソフルランでマウスを麻酔するintraperitaneally麻酔を投与する前に、動物取扱と自制を促進することができる。吸入麻酔薬を使用すると、または特定の研究に適していない場合があります。提案された肺の研究の最初のイソフルランを使用しての衝撃、またはその他の麻酔薬を、決定する。 イソフルランで動物を麻酔。ビデオでは、酸素と混合イソフルラン2%で設定さ…

Discussion

気管内点滴が試験化合物(6)の毒性を評価するためにいくつかの様々な研究で使用されている、肺胞肺傷害(4、7)を誘導、界面活性剤(8)を置き換えるだけでなく、直接に小さなオリゴヌクレオチドの配信を介して遺伝子発現を変化させる肺(5)。我々は現在、肺への蛍光レドックス感受性材料は薬理学的化合物、DNAベクター、ウイルス、およびで蛍光指示薬を浸透させる)だけでなく?…

Acknowledgements

この作品は、NIH K99 HL09222601とMNHに贈られるS&R財団Ryaji Uneo賞によってサポートされていました。

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Isoflurane   Webster Veterinary Sterling , MA 14043-220-05  
Xylazine   Lloyd Laboratories Shenandoah, IA   New Animal Drug Application #139-236
Ketamine   Bioniche Pharma Lake Forest, IL 67457-001-10  
Nair       Available at drug stores
1mL SubQ Syringe   BD Syringe Franklin Lakes, NJ 309597 26 5/8 G
4-0 Nylon Suture   Ethicon San Lorenzo, Puerto Rico 1894G.S30  

References

  1. Driscoll, K. E., Costa, D. L., Hatch, G., Henderson, R., Oberdorster, G., Salem, H., Schlesinger, R. B. Intratracheal instillation as an exposure technique for the evaluation of respiratory tract toxicity: uses and limitations. Toxicol Sci. 55, 24-35 (2000).
  2. Helms, M. N., Jain, L., Self, J. L., Eaton, D. C. Redox regulation of epithelial sodium channels examined in alveolar type 1 and 2 cells patch-clamped in lung slice tissue. J Biol Chem. 283, 22875-22883 (2008).
  3. Helms, M. N., Self, J., Bao, H. F., Job, L. C., Jain, L., Eaton, D. C. Dopamine activates amiloride-sensitive sodium channels in alveolar type I cells in lung slice preparations. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 291, L610-L618 (2006).
  4. Iyer, S. S., Ramirez, A. M., Ritzenthaler, J. D., Torres-Gonzalez, E., Roser-Page, S., Mora, A. L., Brigham, K. L., Jones, D. P., Roman, J., Rojas, M. Oxidation of extracellular cysteine/cystine redox state in bleomycin-induced lung fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 296, L37-L45 (2009).
  5. Li, T., Folkesson, H. G. RNA interference for alpha-ENaC inhibits rat lung fluid absorption in vivo. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 290, L649-L660 (2006).
  6. Sager, T., Porter, D., Robinson, V., Lindsley, W., Schwegler-Berry, D., Castranova, V. An improved method to disperse nanoparticles for in vitro and in vivo investigation of toxicity. Nanotoxicol. 1, 118-129 (2007).
  7. Xu, J., Gonzalez, E. T., Iyer, S. S., Mac, V., Mora, A. L., Sutliff, R. L., Reed, A., Brigham, K. L., Kelly, P., Rojas, M. Use of senescence-accelerated mouse model in bleomycin-induced lung injury suggests that bone marrow-derived cells can alter the outcome of lung injury in aged mice. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 64, 731-739 (2009).
  8. Yeh, T. F., Lin, H. C., Chang, C. H., Wu, T. S., Su, B. H., Li, T. C., Pyati, S., Tsai, C. H. Early intratracheal instillation of budesonide using surfactant as a vehicle to prevent chronic lung disease in preterm infants: a pilot study. Pediatrics. 121, e1310-e1318 (2008).

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Cite This Article
Helms, M. N., Torres-Gonzalez, E., Goodson, P., Rojas, M. Direct Tracheal Instillation of Solutes into Mouse Lung. J. Vis. Exp. (42), e1941, doi:10.3791/1941 (2010).

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