ثنائي الجزيء الإسفار التكملة (BiFC) الفحص عن البروتين البروتين في خلايا البصل التفاعل باستخدام مدفع الجينات هيليوس
Summary
هذه المقالة يوضح كيفية استخدام صحيح BioRad هيليوس غون جين لإدخال الحمض النووي في الخلايا البلازميد البصل البشرة وكيفية اختبار للبروتين تفاعلات البروتين في الخلايا البصل على أساس مبدأ التكملة الإسفار ثنائي الجزيء (BiFC)
Abstract
التحقيق في وظائف الجينات في الكائنات المتنوعة تعتمد على معرفة كيف يمكن للمنتجات الجينات تتفاعل مع بعضها البعض في بيئتها الطبيعية الخلوية. والتكملة الإسفار ثنائي الجزيء (BiFC) الفحص<sup> 1</sup> يسمح للباحثين لتصور التفاعلات البروتين البروتين في الخلايا الحية ، وأصبح أداة بحث أساسية. ويستند هذا الاختبار على اثنين من الجمعيات سهلت شظايا من بروتين فلوري (GFP) التي تنصهر فيها كل شريك إلى التفاعل البروتين المحتملة. فإن التفاعل بين الشركاء البروتين two تسهيل رابطة N – C – محطة ومحطة جزء من GFP ، مما أدى إلى مضان. مصنع للباحثين ، وخلايا البشرة البصل نظام مثالي التجريبية لإجراء فحص BiFC بسبب سهولة في الحصول على أنسجة وإعداد البصل ورؤية مباشرة من التألق مع مضان الخلفية ضئيلة. ويشيع استخدام المسدس جين هيليوس (BioRad) لقصف DNA البلازميد الى خلايا البصل. نحن لشرح استخدام هيليوس غون جين لإدخال البلازميد يبني لمدة التفاعل<em> thaliana Arabidopsis</emعوامل النسخ> ، سوس (SEU) وHOMOLOG LEUNIG (LUH)<sup> 2</sup> التصور وتفاعلاتها بوساطة BiFC في خلايا البشرة البصل.
Protocol
Discussion
- لأول مرة للمستخدمين ، نوصي ممارسة الإجراء بأكمله ، من إعداد خرطوشة للمراقبة ، مع مراسل واحد التأسيسية البلازميد مثل 35S : GFP أو 35S : : المكتب المركزي للاحصاءات. استخدمنا 35S : GFP البلازميد تم الحصول عليها من الدكاترة. ستيف وجبل تشانغ شياو نينغ 6 (الشكل 1A ، D)…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر الدكاترة. ستيف وتشانغ شياو نينغ جبل ل35S : معتمد GFP pGlowbug بناء والزمالة لأبحاث الدكتوراه Hokensen CH في مختبر Z. L' ق من قبل مؤسسة العلوم الوطنية الأميركية (وIOB0616096 MCB0744752). معتمد جزئيا ZL من جامعة ميريلاند محطة التجربة الزراعية.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Yellow onion | Any supermarket | |||
| Helios Gene Gun | BioRad | |||
| Fluorescent microscope with appropriate filters for GFP or YFP | Zeiss, Nikon, Olympus |
References
- Hu, C. D., Chinenov, Y., Kerppola, T. K. Visualization of interactions among bZIP and Rel family proteins in living cells using bimolecular fluorescence complementation. Mol Cell. 9 (4), 789-789 (2002).
- Sitaraman, J., Bui, M., Liu, Z. LEUNIG_HOMOLOG and LEUNIG perform partially redundant functions during Arabidopsis embryo and floral development. Plant Physiol. 147 (2), 672-672 (2008).
- Walter, M. Visualization of protein interactions in living plant cells using bimolecular fluorescence complementation. Plant J. 40 (3), 428-428 (2004).
- Woods, G., Zito, K. Preparation of gene gun bullets and biolistic transfection of neurons in slice culture. J Vis Exp. , (2008).
- Azhakanandam, S., Nole-Wilson, S., Bao, F., Franks, R. G. SEUSS and AINTEGUMENTA mediate patterning and ovule initiation during gynoecium medial domain development. Plant Physiol. 146 (3), 1165-1165 (2008).
- Zhang, X. N., Mount, S. M. Two alternatively spliced isoforms of the Arabidopsis SR45 protein have distinct roles during normal plant development. Plant Physiol. 150 (3), 1450-1450 (2009).
