칙 태아의 단일 세포 Transfection
Summary
좋은 팁을 사용하면 우리가 닭 somites이나 신경 튜브의 하위 도메인에 플라스미드 DNA를 주입 micropipettes. 플라스미드의 농도는 단일 transfected 세포를 생성하기 위해 조정됩니다. 우리는 다음 세포가 clonal 인구로 발전 수 있습니다.
Abstract
발달 생물학의 중심 주제는 lineages의 다변화 및 기본 분자 메커니즘의 해설입니다. 이것은 정상 및 실험 조건에서 단일 세포의 운명의 철저한 분석을 알아볼 수 있습니다. 이를 위해 하나의 progenitors를 대상으로 transfection 방법은 꼭 필요합니다. 우리는 여기에 유전자 조작뿐만 아니라 신뢰할 수있는 추적 혈통, – 비켜에서 닭 조직에서 단일 세포를 transfecting 수를위한 기술적 간단한 방법을 설명합니다. 특정 조직 도메인은 체절 또는 신경 튜브 내에 타겟으로하고 있으며, DNA가 단일 세포의 산발적 transfection 그 결과, 관심의 상피에 직접 주입합니다. 기자를 사용 clonal 인구는 따라서 3 일이에 추적될 수 있으며, 유전자 조작 clonal 인구의 동작은 컨트롤의와 비교할 수 있습니다. 이 방법은 유전자 조작을위한 새로운 도구와 함께 여자는 배아의 접근을 활용합니다. 우리는 비교하고 널리 사용되는 electroporation 방법을 통해 장점과 가능한 응용 프로그램을 토론하고 또한 제안 추가에서 – 생체내 모델에 사용합니다. 우리는 기존의 혈통 추적 및 유전자 간섭 도구 상당한 또한 및 보완이 방법의 사용을 옹호.
Protocol
Discussion
위에서 설명한 방법은 작은 세포 하위 집합 또는 단일 progenitors 3 lipophilic 염료를 전달하기위한 이전에 설명한 기법의 수정입니다. 이것은 표준 electroporation 기법을 통해 세 가지 주요 장점이 있습니다. 첫째, electroporation보다 훨씬 큰 공간 해상도 (C, 예를 들어 그림 1B에 대한 참조) 허용, 대상 조직에 대한 신뢰 개별 사이트로 라벨을위한 수단을 제공합니다. 둘째, 따라서 달리 정상적인 조?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 신경 튜브 이미지 Shlomi Krispin 감사합니다. 특히, 우리는 GFP의 transfection 기술을 시작을위한 Yuval 계피를 인정합니다. 이 작품은 CK하는 이스라엘 과학 재단, 협회 테크 프랑세즈 contre 레 Myopathies하고, 도이치의 Forschungsgemeinshaft, 공동 연구 센터 488에서 보조금에 의해 지원되었다
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Pipette tubes | Sutter Instrument | B100-75-10 | ||
| Capillaries | Drummond Scientific | 2-000-100 | ||
| Insect needles | Watkins & Doncaster | E6871 | ||
| Pen-Strep solution | Biological Industries | 03-031-1B |
References
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