单细胞转染鸡胚
Summary
使用精尖微量注入鸡体节或神经管的子域的质粒DNA。质粒的浓度调整，以产生单一的转染细胞。然后，我们允许的细胞发育成无性系种群。
Abstract
发育生物学的一个中心主题是多样化的谱系和澄清的分子机制。这需要一个正常和实验条件下的单细胞的命运的透彻分析。为此，目标单祖细胞的转染方法，是一个先决条件。我们在这里介绍一个简单的方法转染在OVO鸡组织中单个细胞，让可靠的谱系跟踪以及遗传操作技术。体节或神经管内，是针对特定的组织域的DNA直接注入利益的上皮细胞，导致零星的单细胞转染。记者，无性系种群可能因此被追踪长达三天，并与对照相比，无性系种群的基因操纵行为可以。此方法利用鸡胚无障碍的优势，以及与新兴的基因操纵的工具。我们比较，并讨论其优点被广泛使用的电击方法，以及可能的应用，还建议使用额外的体内模型。我们提倡使用这种方法的重要补充和补充现有的谱系追踪和基因干扰工具。
Protocol
1。准备的微量移液器我们Narishige PP – 83标准的吸管拉马拉我们的吸液管与热定型为13.5。精确的设置必须校准，目的是在枪头直径8至10微米。我们使用长丝含有硼硅玻璃管，外径1.0毫米，内径0.75-0.78毫米。移液器因此存储在一个塑料菜与菜的边缘接触保护提示。 2。 DNA的制备利益的质粒转染到大肠杆菌DH5α中使用标准程序的…
Discussion
上面介绍的方法是修改为先前所描述的技术，提供亲脂性染料的小细胞亚群或3个单祖。它有三个以上的标准电技术的主要优势。首先，它提供了一个标签在靶组织中的信心离散网站的手段，让远远大于电空间分辨率（例如图1B，C）。其次，它允许单一细胞的标签，从而使跟踪的血统，另有 1 2（图1C，D） 的正常条件下在体内。三，基因表达怀念在单细胞水平宗族隔离，…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢施洛米Krispin神经管形象。特别是，我们承认尤瓦肉桂启动GFP转染技术。这项工作得到了来自以色列科学基金会，协会法国反对LES肌病，德意志Forschungsgemeinshaft，合作研究中心488的赠款为CK
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Pipette tubes | Sutter Instrument | B100-75-10 | ||
| Capillaries | Drummond Scientific | 2-000-100 | ||
| Insect needles | Watkins & Doncaster | E6871 | ||
| Pen-Strep solution | Biological Industries | 03-031-1B |
References
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Tags
Single Cell TransfectionChick Embryos발생학Lineage DiversificationMolecular MechanismsTransfection MethodsSingle ProgenitorsIn-ovo TransfectionLineage TracingGenetic ManipulationSomiteNeural TubeEpitheliumSporadic TransfectionClonal PopulationsReportersGenetic Manipulation ToolsElectroporation MethodIn-vivo Models
Cite This Article
Ben-Yair, R., Kalcheim, C. Single Cell Transfection in Chick Embryos. J. Vis. Exp. (43), e2133, doi:10.3791/2133 (2010).