वाल्वुलर endothelial कोशिकाओं के अलगाव
Summary
हम अलग और हृदय वाल्व endothelial कोशिकाओं (ग्राम शिक्षा समिति) के संवर्धन शुद्ध आबादी के लिए एक तरीका प्रदान करते हैं. ग्राम शिक्षा समिति के cusp या पत्रक के दोनों ओर से अलग किया जा सकता है है और तुरंत निम्नलिखित, अंतर्निहित बीचवाला सेल अलगाव (विक) सीधा है.
Abstract
हार्ट वाल्व हृदय प्रणाली के माध्यम से यूनिडायरेक्शनल रक्त के प्रवाह को बनाए रखने के लिए पूरी तरह जिम्मेदार हैं. ये पतली, तंतुमय ऊतक महत्वपूर्ण यांत्रिक तनाव के रूप में वे खुले और एक जीवन पर कई अरब बार बंद करने के लिए अधीन हैं. इन ऊतकों की अविश्वसनीय धीरज निवासी endothelial वाल्वुलर (ग्राम शिक्षा समिति) और बीचवाला कोशिकाओं के कारण है (विक) है कि लगातार मरम्मत और स्थानीय यांत्रिक और जैविक संकेतों के जवाब में फिर से तैयार है. हाल ही में हम इन कोशिकाओं की अद्वितीय व्यवहार, जिसके लिए इन विट्रो प्रयोगों में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है समझ करने के लिए शुरू कर दिया है. विशेष रूप से चुनौतीपूर्ण और ग्राम शिक्षा समिति के के अलगाव और संस्कृति है. विशेष देखभाल इस्तेमाल किया जा पल से ऊतक अंतिम चढ़ाना के माध्यम से मेजबान से निकाल दिया जाता है चाहिए. यहाँ हम प्रत्यक्ष अलगाव, ओर विशिष्ट अलगाव, संस्कृति, और ग्राम शिक्षा समिति के शुद्ध आबादी के सत्यापन के लिए प्रोटोकॉल उपस्थित थे. हम एक कोमल झाड़ू scraping तकनीक केवल सतह कोशिकाओं बेदखल द्वारा पीछा एंजाइमी पाचन का उपयोग करें. इन कोशिकाओं तो एक ट्यूब में एकत्र कर रहे हैं और एक गोली में centrifuged. गोली तो resuspended और संस्कृति बोतल में चढ़ाया मैट्रिक्स कोलेजन मैं के साथ पूर्व में लिपटे. ग्राम शिक्षा समिति के phenotype संपर्क द्वारा की पुष्टि की है विकास और PECAM1 (CD31) जैसे endothelial विशिष्ट मार्करों की अभिव्यक्ति हिचकते हैं, वॉन Willebrand (vWF) फैक्टर, और अल्फा चिकनी पेशी actin (α-SMA) के नकारात्मक अभिव्यक्ति. ग्राम शिक्षा समिति के कार्यात्मक विशेषताओं acetylated एलडीएल के उच्च स्तर के साथ जुड़े रहे हैं. संवहनी endothelial कोशिकाओं के विपरीत, ग्राम शिक्षा समिति के अद्वितीय क्षमता mesenchyme, जो सामान्य रूप से भ्रूण वाल्व एक गठन के दौरान होता है में बदलना है. यह भी इन विट्रो संस्कृति में काफी लंबे समय तक पद मिला हुआ के दौरान पाए जाते हैं, कर सकते हैं ताकि देखभाल पर या संगम के निकट पारित होने के लिए किया जाना चाहिए. ग्राम शिक्षा समिति के अलगाव के बाद, विक के शुद्ध आबादी तो आसानी से हासिल किया जा सकता है.
Protocol
Discussion
वाल्वुलर जीव विज्ञान की समझ तकनीकी अलग कठिनाइयों और वाल्वुलर endothelial कोशिकाओं के संवर्धन शुद्ध आबादी द्वारा किया गया बिगड़ा है. ठेठ अलगाव तकनीक अंतर्निहित बेसल मैट्रिक्स या endothelial चिपकने वाला 2,3 बांड ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस शोध NSF कैरियर पुरस्कार, Hartwell फाउंडेशन, और अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन (# 0830384N) द्वारा समर्थित है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium | Mediatech | 50-103-PB | ||
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26140 | ||
| Penicillin Streptomycin | Gibco | 15140-122 | ||
| 0.25% Trypsin-EDTA | Gibco | 25200 | ||
| Heparin Sodium Salt | Sigma-Aldrich | H4784-1G | ||
| Collagenase Type 2 | Worthington Biochemical | LS004176 | ||
| DPBS | Gibco | 21300-058 | ||
| Rat Tail Collagen | BD Biosciences | 354236 | ||
| Critical Swabs | VWR | 89031-270 | ||
| Sodium Bicarbonate | Sigma-Aldrich | 55761 | ||
| T25 Flasks | BD Biosciences | 353018 | ||
| T75 Flasks | BD Biosciences | 353136 | ||
| 24 Well Plate | Falcon | 353047 | ||
| 60×15 mm Dishes | VWR | 25384-092 | ||
| 60×15 Glass Dishes | VWR | 89000-310 | ||
| Paraffin Embedding Wax | Electron Microscopy Sciences | 19304-01 | ||
| Precision Glide Needles | BD Biosciences | 305165 | ||
| 500 mL Nalgene Filters | VWR | 73520-985 | ||
| 1L Nalgene Filters | VWR | 73520-986 | ||
| Tissue Forceps | Fine Science Tools | 11023-15 | ||
| FSC Tweezers #5 | Fine Science Tools | 11295-00 |
References
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