我々は、心臓弁内皮細胞(VEC)の純粋な集団を分離して培養する方法を提供する。 VECがカスプやリーフレットのいずれかの側から分離し、直ちに以下のことができる、基本的な間質細胞(VIC)の分離は簡単です。
心臓弁は、心臓血管系を介して単方向の血流を維持する責任を持つことになります。彼らは寿命にわたって数十億回も開いたり閉じたりするように、これらの薄い、繊維状の組織が重要な機械的ストレスにさらされる。これらの組織の驚くべき耐久性は、内皮常駐弁膜(VEC)と間質細胞によるものである(VIC)は、常に地元の機械的および生物学的信号に応答して、修理および改造。ごく最近我々 は in vitro の実験において重要な役割を果たしているため、これらの細胞のユニークな行動を、理解し始めている。特に困難は、VECの分離と文化です。特別な注意を払ってその組織が、最終的なメッキを介してホストから削除された瞬間から使用する必要があります。ここでは直接分離、側面の特定のアイソレーション、文化、およびVECの純粋な集団の検証のためのプロトコルを提示する。我々は表面の細胞を取り除くために穏やかな綿棒スクレイピング技術に続いて酵素消化を使用してください。これらの細胞をチューブに回収し、ペレットに遠心分離されています。ペレットを再懸濁し、コラーゲンI、マトリックスをプレコート培養フラスコに播種しています。 VECの表現型は、接触によって確認され成長し、血管内皮特異的などPECAM1(CD31)のようなマーカー、フォンヴィレブランド因子(vWF)、及びα-平滑筋アクチン(α- SMA)の負の発現の発現を阻害した。 VECの機能的特性は、アセチル化LDLの高レベルに関連付けられています。血管内皮細胞とは異なり、VECは通常、胚弁形成1の間に発生する間充織、に変換するユニークな能力を持っている。これはまた、in vitro培養における有意に延長後の合流時に発生する可能性がありますので、注意が合流点付近で通過するためになされるべきである。 VECの単離後、VICの純粋な集団は、簡単に取得することができます。
弁膜生物学の理解は、弁内皮細胞の純粋な集団を分離して培養する技術的な問題によって損なわれている。典型的な分離方法は、基礎となる基礎行列または内皮接着剤の結合2,3の化学的解離の酵素消化を伴う。予備分離実験を定性的に解離剤と潜伏期間を変化させることによって評価した。これらの実験の結果は、最大60分の場合とEDTA(またはトリプシン- EDTA)インキュベーション?…
The authors have nothing to disclose.
この研究は、NSFのキャリア賞、ハートウェル財団、米国心臓協会(#0830384N)によってサポートされています。