Summary

Voorbereiding van de muis hypofyse Immunogeen voor de inductie van experimentele auto-immune Hypophysitis

Published: December 17, 2010
doi:

Summary

Auto-immune hypophysitis kan worden gereproduceerd bij muizen door het injecteren van een uittreksel van de muis hypofyse eiwitten.

Abstract

Auto-immuun hypophysitis is een chronische ontsteking van de hypofyse veroorzaakt of vergezeld door auto-immuniteit 1. Het is van oudsher beschouwd als een zeldzame ziekte, maar de verslaglegging is sterk toegenomen in de afgelopen jaren. Hypophysitis, in feite, ontwikkelt zich niet zelden als een "side-effect" bij patiënten met kanker die behandeld worden met antilichamen die remmende receptoren tot expressie gebracht op T-lymfocyten, zoals CTLA-4 2 en PD-1-receptoren te blokkeren. Auto-immune hypophysitis kan experimenteel worden veroorzaakt door het injecteren van muizen met hypofyse eiwitten gemengd met een adjuvans 3. In deze video artikel zullen we laten zien hoe eiwitten uit de muis hypofyse en hoe u hen voor te bereiden in een vorm die geschikt is voor het induceren van auto-immune hypophysitis in SJL muizen extract.

Protocol

Experimentele Protocol De eerste stap in deze experimentele protocol is het verzamelen van een groot aantal van de muis hypofyse. De tweede stap is om de klieren homogeniseren om een ​​proteïne-extract te bereiden. De derde stap is om deze eiwitten emulgeren met een vette mix. Stap 1: Verzameling en opslag van de muis hypofyse klieren De muis hypofyse zit aan de basis van de schedel in een depressie van het sphenoïd bot genaamd de s…

Discussion

Ondanks het feit dat de eerste patiënt met een auto-hypophysitis werd gemeld in 1962 vier, de pathogene hypofyse autoantigenen nog moeten worden geïdentificeerd 5. Diermodellen kan heel nuttig zijn om deze autoantigenen identificeren, medeplichtigheid aan de ontdekking van biomarkers die vertaalbaar zijn naar de patiëntenzorg. Dit artikel heeft aangetoond een eenvoudige procedure voor het bereiden van hypofyse eiwitten in een vorm die geschikt is voor het induceren van auto-immune hypophysitis b…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dit werk werd ondersteund door NIH subsidie ​​DK080351 naar de PC.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
15-ml Falcon tubes        
homogenization buffer        
phosphate buffered saline        
protease inhibitor cocktail        
Polytron homogenizer        
BCA assay   Pierce 23225  
Complete Freund’s Adjuvant (CFA)   Sigma F-5881  
Mycobacterium tuberculosis   Becton Dickinson 231141  
2.5 mL Hamilton gastight syringe        
22-gauge micro-emulsifying needle        

References

  1. Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. . Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).
  2. Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophysitis in patients with metastatic melanoma and renal cancer. J Immunother. 28, 593-598 (2005).
  3. Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model. Endocrinology. 149, 3461-3469 (2008).
  4. Goudie, R. B., Pinkerton, P. H. Anterior hypophysitis and Hashimoto’s disease in a woman. J Pathol Bacteriol. 83, 584-585 (1962).
  5. Caturegli, P. Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s). J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).

Play Video

Cite This Article
Tzou, S., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis. J. Vis. Exp. (46), e2181, doi:10.3791/2181 (2010).

View Video