Summary

Cultura organotipica di tutto spessore Retina suina adulti

Published: March 20, 2011
doi:

Summary

Qui si descrive una soluzione economica per la cultura tecnica organotipica di retina suini adulti per sette giorni. In breve, una carta sterile filtro è stato usato per sollevare la retina neurale fuori dal RPE e fotorecettori lato posto su un inserto sollevata da una misura stand.

Abstract

Vi è una domanda riconosciuto per modelli in vitro che può sostituire o ridurre gli esperimenti sugli animali. Retina suina ha una struttura simile a neuronale retina umana ed è quindi una specie preziosa per lo studio dei meccanismi di lesione della retina umana e le malattie degenerative. Qui si descrive una soluzione economica per la cultura tecnica organotipica di retina suini adulti isolati da occhi ottenuti da un mattatoio. Dopo aver rimosso il segmento anteriore, una lama trapano è stato utilizzato per creare più neurali retina-membrana di Bruch-RPE-coroide, sclera espianti dal segmento posteriore degli occhi suini adulti. Un pezzo di carta da filtro sterile è stato utilizzato per sollevare la retina neurale fuori da ogni espianto. Il filtro di carta retina complesso è stato colto (lato fotorecettori verso l'alto) in cima a un inserto, che si è tenuto lontano dal fondo del piatto la cultura da una misura stand. Il supporto permette una buona circolazione del terreno di coltura su entrambi i lati della retina. Nel complesso, questa procedura è semplice, riproducibile, e permette la conservazione dei nativi struttura della retina per almeno sette giorni, che lo rende un modello utile per una varietà di studi morfologici, farmacologico, biochimico e sulla retina dei mammiferi.

Protocol

1. Fare una misura stand per inserti in colture cellulari La base di una pipetta da 5 ml di punta (ISC BioExpress, # P-3250-19) ha un diametro interno di 13 mm, che corrisponde perfettamente alla dimensione inferiore (12,6 mm, diametro esterno) di mm 10 (diametro interno) di cellule NUNC inserto cultura (8 micron, membrana in policarbonato, termica, # 137443). Per rendere lo stand, la pipetta è stata tagliata vicino alla base per la produzione da 6 mm lungo cilindro cavo. Poi, i pezzi sono st…

Discussion

I ricercatori hanno stabilito una visione varietà di sistemi di coltura della retina, compresi i sistemi organotipica, per studiare una serie di questioni, come il trapianto di cellule staminali della retina 1, la rigenerazione della retina 2, e l'espressione genica esogeni 3-5. Tuttavia, retina dei mammiferi adulti è difficile da mantenere in vitro, principalmente a causa della alte energie richieste dei fotorecettori 6. Koizumi et al. Descritto un con…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato sostenuto da NIH concedere EY 012.031 (ET-A), un premio dalla Fondazione FM Kirby (ET-A), ricerca per la Prevenzione della Cecità, Inc. (MAZ), il New Jersey Lions Eye Research Foundation (MAZ), L'Istituto Eye of New Jersey (MAZ), il J. Giuseppe e Margherita DiSepio Retina Research Fund (MAZ), ed il Janice Mitchell Vassar e Ashby Mitchell Fellowship (AMK).

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
MEM Invitrogen-Gibco 10370-021  
5 mL pipette tip ISC BioExpress P-3250-19  
NUNC cell culture insert Thermal 137443 8μm, Polycarbonate
Whatman 4M Filter paper Whatman 1004  
DMEM Cellgro-mediatech Inc 10-013-CV  
Agar Fluka 05040  
Fungizone Amphotericin B Invitrogen-Gibco 15290018  
Trephine blades Bausch and Lomb T3096 6.00mm
O.C.T. Compound Electron Microscopy Sciences 62550-01 4583
  Sciences    
Cryostat Leica CM1900  
Vibratome Leica Series 1000  
Confocal microscopy; Carl Zeiss LSM510  
Anti-Synaptic Vesicle Protein 2 (SV2) mouse monoclonal antibody DSHB N/A  
Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) polyclonal rabbit antibody DAKO DAKO  
Propidium Iodide (PI) Sigma P4170  

References

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Cite This Article
Wang, J., Kolomeyer, A. M., Zarbin, M. A., Townes-Anderson, E. Organotypic Culture of Full-thickness Adult Porcine Retina. J. Vis. Exp. (49), e2655, doi:10.3791/2655 (2011).

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