全層の大人のブタの網膜の器官培養
Summary
ここでは、七日のための大人のブタの網膜の器官培養のための費用対効果の高い手法を説明します。簡単に言えば、滅菌濾紙は、カスタムメイドのスタンドで発生したインサートにRPEと場所光受容体の側から神経網膜をリフトオフ使用されていました。
Abstract
動物実験を取り替えるか、または減らすことができるin vitroモデルのための認識が求められています。ブタの網膜は、人間の網膜に似た神経細胞の構造を有し、したがって、人間の網膜損傷や変性疾患のメカニズムを研究するための貴重な種です。ここでは、食肉処理場から得られる目から分離された大人のブタの網膜の器官培養のための費用対効果の高い手法を説明します。前眼部を除去した後、トレパンのブレードは、大人のブタの眼の後部から複数の神経網膜-ブルッフの膜RPE -脈絡-強膜の外植片を作成するために使用されました。滅菌ろ紙片は、それぞれの外植片から神経網膜をリフトオフ使用されていました。ろ紙 – 網膜の複合体は、カスタムメイドのスタンドで培養皿の底部から離れて開催された挿入、上に（最大光受容体の側）培養した。スタンドは、網膜の両側に培地の良い循環が可能になります。全体として、この手順では再現性、シンプルであり、そして少なくとも7日間にネイティブ網膜構造の保存を許可し、それ哺乳類網膜上に、形態学的薬理学的、および生化学的研究の様々な有用なモデルとなっています。
Protocol
Discussion
ビジョンの研究者は、網膜幹細胞移植1、網膜再生2、および外来遺伝子発現3月5日などの問題、様々な勉強する器官系、を含む、網膜培養システムのさまざまなを確立している。しかし、成体哺乳類の網膜は、in vitroで光受容体6の高エネルギーの需要が主な要因を維持することは困難です。小泉らは、光受容体のための酸素供給が培養インサート?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、NIHの助成金EY 012031（ET -）、FM星のカービィ財団（ET -）、失明、株式会社（MAZ）、ニュージャージー州ライオンズアイ研究財団（MAZ）を、防止するための研究から、賞によって支えられてニュージャージー州（MAZ）、ジョセフJ.とマルグリットDiSepio網膜研究基金（MAZ）、そしてジャニスミッチェルヴァッサーとアシュビーミッチェルフェローシップ（AMK）の眼科研究所。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| MEM | Invitrogen-Gibco | 10370-021 | |
| 5 mL pipette tip | ISC BioExpress | P-3250-19 | |
| NUNC cell culture insert | Thermal | 137443 | 8μm, Polycarbonate |
| Whatman 4M Filter paper | Whatman | 1004 | |
| DMEM | Cellgro-mediatech Inc | 10-013-CV | |
| Agar | Fluka | 05040 | |
| Fungizone Amphotericin B | Invitrogen-Gibco | 15290018 | |
| Trephine blades | Bausch and Lomb | T3096 | 6.00mm |
| O.C.T. Compound | Electron Microscopy Sciences | 62550-01 | 4583 |
| Sciences | |||
| Cryostat | Leica | CM1900 | |
| Vibratome | Leica | Series 1000 | |
| Confocal microscopy; | Carl Zeiss | LSM510 | |
| Anti-Synaptic Vesicle Protein 2 (SV2) mouse monoclonal antibody | DSHB | N/A | |
| Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) polyclonal rabbit antibody | DAKO | DAKO | |
| Propidium Iodide (PI) | Sigma | P4170 |
References
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