Summary

المسلكة الفأرية العدوى : نموذج من الحصانة من النوع 2 والتهاب في القناة الهضمية

Published: May 24, 2011
doi:

Summary

المسلكة الفأرية العدوى المعوية هو نموذج الحصانة TH2 حيث توليد فئران مقاومة للاستجابة وقائية TH2 والفئران عرضة توليد المرضية TH1 الاستجابة.

Abstract

المسلكة الفأرية هو الممرض من الفئران الطبيعية والبيولوجية ومستضديا مشابهة نوعا من المسلكة التي تصيب البشر والحيوانات 1. تعطى البيض بالتزقيم المعدية عن طريق الفم ، يفقس في الأمعاء الصغيرة البعيدة ، غزو الخلايا الظهارية في الأمعاء (IECS) التي تبطن الخبايا من الأعور والقولون والداني على نضوج الديدان الإفراج البيض في البيئة 1. هذا النموذج هو أداة قوية لدراسة العوامل التي تحكم CD4 + T تنشيط الخلايا المساعد (ث) ، وكذلك تغييرات في ظهارة الأمعاء. وتتميز الاستجابة المناعية التي تحدث في سلالات مقاومة الفطرية ، مثل C57BL / 6 و BALB / ج ، من خلال الاستقطاب السيتوكينات TH2 (IL – 4 ، IL – 5 و IL – 13) وطرد الديدان بينما TH1 المرتبطة السيتوكينات (IL -12 ، IL – 18 ، IFN – γ) تعزيز الالتهابات المزمنة في عكر عرضة وراثيا / الفئران J 2-6. السيتوكينات TH2 تعزيز التغيرات الفسيولوجية في المكروية المعوية بما في ذلك سرعة دوران IECS ، القدح تمايز الخلايا ، والتوظيف ، والتغيرات في نفاذية الظهارية وسلس تقلص العضلات ، والتي تورطت في طرد الدودة 7-15. نحن هنا بالتفصيل بروتوكولا لنشر المسلكة الفأرية البيض والتي يمكن استخدامها في التجارب اللاحقة. ونحن نقدم أيضا عينة تجريبية الحصاد مع اقتراحات لمرحلة ما بعد الإصابة التحليل. عموما ، سوف توفر للباحثين هذا البروتوكول مع الأدوات الأساسية لتنفيذ ماوس الفأرية المسلكة نموذج العدوى التي يمكن استخدامها لمعالجة المسائل المتعلقة الميل ث في الجهاز الهضمي فضلا عن وظائف المناعة في IECS المستجيب.

Protocol

1. نشر المسلكة البيض الفأرية لتوليد دفعات جديدة من بيض الفأرية المسلكة ، 20-30 تصيب الفئران العوز المناعي (مثل NOD.Cg – Prkdc SCID Il2rg tm1Wjl / SzJ (NSG) أو 129S6/SvEvTac-Rag2 tm1Fwa (RAG2 — / –)) أو الفئران الم?…

Discussion

تفاصيل هذا البروتوكول معيار جرعة عالية العدوى الحادة الفأرية المسلكة التي يمكن تعديلها على النحو المطلوب من قبل المحقق. على سبيل المثال ، يمكن التضحية وأنسجة الفئران التي تحصد في أيام مختلفة. يمكن أن تقرر أن الفئران قد أنشأت بنجاح كامل عبء دودة يمكن التضحية أنه?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الكندية لأبحاث الصحة (MSH – 95368 ، 89773 وMOP – MOP – 106623 لتشيكوسلوفاكيا) ، والمؤسسة الكندية للإبداع. SCM هو المستفيد من جمعية CIHR / الكندي للزمالة أمراض الجهاز الهضمي ما بعد الدكتوراه. CZ هو محقق CIHR جديد.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Animal Feeding Needles (18 x 1½”) Popper 7912  
Smooth curved Forceps Roboz RS-5047  
DMEM Gibco 11965  
NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) Jackson Laboratories 005557 These are the mice we used, however, any immunodeficient mice or susceptible strain should work.
RNAlater Qiagen 76104  
2 ml tubes Axygen MCT-200-C  
15 ml tubes Falcon 352096  
6 well plates Falcon 353046  
Paraformaldehyde Electron Microscopy Science 15710  
α-RELMβ antibody PeproTech Inc 0694270Rb  

References

  1. Cliffe, L. J., Grencis, R. K. The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection. Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).
  2. Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. Cytokine-mediated regulation of chronic intestinal helminth infection. J. Exp. Med. 179, 347-351 (1994).
  3. Bancroft, A. J., Grencis, R. K. Th1 and Th2 cells and immunity to intestinal helminths. Chem. Immunol. 71, 192-208 (1998).
  4. Bancroft, A. J., McKenzie, A. N., Grencis, R. K. A critical role for IL-13 in resistance to intestinal nematode infection. J. Immunol. 160, 3453-3461 (1998).
  5. Helmby, H., Takeda, K., Akira, S., Grencis, R. K. Interleukin (IL)-18 promotes the development of chronic gastrointestinal helminth infection by downregulating IL-13. J. Exp. Med. 194, 355-364 (2001).
  6. Owyang, A. M. Interleukin 25 regulates type 2 cytokine-dependent immunity and limits chronic inflammation in the gastrointestinal tract. J. Exp. Med. 203, 843-849 (2006).
  7. Artis, D. RELMβ/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector molecule in the gastrointestinal tract. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 13596-13600 (2004).
  8. Datta, R. Identification of novel genes in intestinal tissue that are regulated after infection with an intestinal nematode parasite. Infect. Immun. 73, 4025-4033 (2005).
  9. Cliffe, L. J. Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite expulsion. Science. 308, 1463-1465 (2005).
  10. Artis, D. New weapons in the war on worms: identification of putative mechanisms of immune-mediated expulsion of gastrointestinal nematodes. Int. J. Parasitol. 36, 723-733 (2006).
  11. Finkelman, F. D. Cytokine regulation of host defense against parasitic gastrointestinal nematodes: lessons from studies with rodent models. Annu. Rev. Immunol. 15, 505-533 (1997).
  12. Grencis, R. K. Enteric helminth infection: immunopathology and resistance during intestinal nematode infection. Chem. Immunol. 66, 41-61 (1997).
  13. Khan, W. I. Modulation of intestinal muscle contraction by interleukin-9 (IL-9) or IL-9 neutralization: correlation with worm expulsion in murine nematode infections. Infect. Immun. 71, 2430-2438 (2003).
  14. Khan, W. I., Blennerhasset, P., Ma, C., Matthaei, K. I., Collins, S. M. Stat6 dependent goblet cell hyperplasia during intestinal nematode infection. Parasite Immunol. 23, 39-42 (2001).
  15. Akiho, H., Blennerhassett, P., Deng, Y., Collins, S. M. Role of IL-4, IL-13, and STAT6 in inflammation-induced hypercontractility of murine smooth muscle cells. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282, 226-2232 (2002).
  16. Kopper, J. J., Mansfield, L. S. Development of improved methods for delivery of Trichuris muris to the laboratory mouse. Parasitol. Res. 107, 1103-1113 (2010).
  17. Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response. Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).

Play Video

Cite This Article
Antignano, F., Mullaly, S. C., Burrows, K., Zaph, C. Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut. J. Vis. Exp. (51), e2774, doi:10.3791/2774 (2011).

View Video