Bloedafname voor biochemische analyse bij volwassen zebravis
Summary
Dit artikel presenteert een techniek voor de inzameling van bloed uit de dorsale aorta van de zebravis. Het geeft ook instructies voor het verkrijgen van serum voor gebruik in biochemische analyses, zoals tests voor het bepalen van cholesterol en triglyceriden.
Abstract
De zebravis is gebruikt als diermodel voor onderzoek naar verschillende ziekten bij de mens. Het kan dienen als een krachtig preklinische platform voor onderzoek van moleculaire gebeurtenissen en therapeutische strategieën alsook de evaluatie van de fysiologische mechanismen van bepaalde pathologieën 1.
Er zijn relatief weinig publicaties die bij volwassen zebravis fysiologie van organen en systemen 2, wat kan leiden onderzoekers af te leiden dat de basistechnieken die nodig zijn om de exploratie van de zebravis systemen mogelijk te maken zijn 3 ontbreken. Hematologische biochemische waarden van de zebravis werden voor het eerst gerapporteerd in 2003 door Murtha en collega's 4 die gebruik van een techniek tijdens de bloedafname voor het eerst beschreven door Jagadeeswaran en collega's in 1999. In het kort werd bloed afgenomen via een micropipet uiteinde via een zijdelingse insnijding ongeveer 0,3 cm in lengte in het gebied van de dorsale aorta 5. Omdat er geringe afmetingen, datis een zeer nauwkeurige techniek die een zeer bekwame arts. Dezelfde techniek werd gebruikt door de dezelfde groep in een andere publicatie in datzelfde jaar 6. In 2010, Eames en collega's heel bloedsuikerspiegel bepaald in zebravis 7. Ze kreeg toegang tot het bloed door het uitvoeren van onthoofdingen met een schaar en dan het plaatsen van een gehepariniseerde microcapillaire collectie pijp in de borstspier articulatie. Zij vermelden problemen met hemolyse die werden opgelost met een geschikte bewaartemperatuur gebaseerd op het werk Kilpatrick et al.. 8. Als u probeert de Jagadeeswaran de techniek in ons laboratorium te gebruiken, vonden we dat het moeilijk was om de incisie te maken in precies de juiste plaats als niet tot een significante hoeveelheid bloed verloren te gaan voordat collectie kon worden gestart mogelijk te maken.
Onlangs Gupta et al.. 9 beschreven hoe tot volwassen zebravis organen, Kinkle et al. ontleden. 10 beschreven hoe intraperiton uit te voerenpaling injecties en Pugach et al.. 11 beschreven hoe retro-orbitale injecties uit te voeren. Er is echter meer werk nodig om meer volledig te verkennen basistechnieken voor onderzoek in de zebravis.
De geringe omvang van de zebravis biedt uitdagingen voor onderzoekers met behulp van het als een experimenteel model. Bovendien gaven deze kleinschaligheid, is het belangrijk dat simpele technieken worden ontwikkeld om onderzoekers in staat om de voordelen van de zebravis model te verkennen.
Protocol
Discussion
Dit artikel presenteert een eenvoudige techniek die meer bloed en serum analyse in zebravis experimenten mogelijk maakt. Deze techniek heeft de potentie om bij te dragen aan toekomstige zebravis hematologische onderzoeken waarbij bloed parameter gegevens. Het moet ook grotere toepassingen van de zebravis als een experimenteel model.
Deze techniek vereist geen speciale vaardigheden of implementatie van een nauwkeurige techniek. Bovendien maakt van de dubbele hoeveelheid bloed worden verzameld…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Fipe / HCPA – Fundo de Incentivo een Pesquisa e Eventos
CAPES – Coordenação de Aperfeiçoamento de pessoal de Nivel Superior
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Low retention tips | Applied Biosystems | 022493020 | |
| Eppendorf Centrifuge 5415D | Eppendorf | Discontinued |
References
- Schneider, A. C. R., dos Santo, J. L., Porawski, M., Schaefer, P. G., Maurer, R. L., Matte, U., da Silveira, T. R. Implementação de um novo modelo de experimentação animal Zebrafish. Rev. HCPA. 29, 100-103 (2009).
- Briggs, J. P. The zebrafish: a new model organism for integrative physiology. Am. J. Physiol. Regulatory Integrative Comp. Physiol. 282, 3-9 (2002).
- Menke, A. L., Sptsbergen, J. M., Wolterbeek, A. P. M., Woutersen, R. A. Normal anatomy and histology of adult Zebrafish. Toxicologic Pathology. 000, 1-16 (2011).
- Murtha, J. M., Qi, W., Keller, E. T. Hematologic and serum biochemical values for Zebrafish. Comp. Med. 53, 37-41 (2003).
- Jagadeeswaran, P., Sheehan, J. P., Craig, F. E., Troyer, D. Identification and characterization of zebrafish thrombocytes. Br. J. Haematol. 107, 731-738 (1999).
- Jagadeeswaran, P., Sheehan, J. P. Analysis of blood coagulation in the zebrafish. Blood Cells Mol. Dis. 25, 239-249 (1999).
- Eames, S. C., Philipson, L. H., Prince, V. E., Kinkel, M. D. Blood sugar measurement in zebrafish reveals dynamics of glucose homeostasis. Zebrafish. 7, 205-213 (2010).
- Kilpatrick, E. S., Rumley, A. G., Rumley, C. N. The effect of haemolysis on blood glucose meter measurement. Diabet. Med. 12, 341-343 (1995).
- Gupta, T., Mullins, M. C. Dissection of Organs from the Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (37), e1717 (2010).
- Kinkel, M. D., Eames, S. C., Philipson, L. H., Prince, V. E. Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (42), e2126 (2010).
- Pugach, E. K., Li, P., White, R., Zon, L. Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (34), e1645 (2009).
