Цифровой прижизненной микроскопии эпифлуоресцентной посткапиллярных венул в cremasteric микроциркуляция является удобным способом для получения понимание лейкоцитов эндотелия взаимодействия<em> В естественных условиях</em> При ишемии-реперфузии (IRI) из поперечно-полосатой мышечной ткани. Мы здесь представить подробный протокол безопасно выполнять технику и обсудить ее применения и ограничения.
Ишемии-реперфузии (ИРИ) был вовлечен в большое множество патологических состояний, таких как инсульт, инфаркт миокарда, кишечной ишемии, а также после трансплантации и сердечно-сосудистой хирургии 1. Реперфузии ранее ишемические ткани, в то время важное значение для предупреждения необратимых повреждение ткани, вызывает чрезмерное воспаление пораженной ткани. Рядом с производством реактивных форм кислорода, активации системы комплемента и повышенной проницаемости капилляров, активации лейкоцитов является одним из принципа актеров в патологический каскад воспалительных повреждений тканей при реперфузии. 2, 3 лейкоцитов активации многоступенчатый процесс, состоящий прокатки, сцепление фирмы и переселение и опосредуется сложным взаимодействием молекул адгезии, в ответ на хемоаттрактантов такие как дополнение факторов, хемокинов, или тромбоцитов, фактор активации 4.
<с классом = "jove_content"> В то время как лейкоциты прокатки в посткапиллярных венул преимущественно опосредовано взаимодействием селектины 5 их счетчик лигандов, фирма адгезии лейкоцитов к эндотелию является селектина контролируемые через связывание молекулы межклеточной адгезии (ICAM) и сосудистые сотовых молекул адгезии (VCAM). 6, 7Золотой стандарт в естественных условиях наблюдения лейкоцитов эндотелия взаимодействия является метод прижизненной микроскопии, впервые описанная в 1968 году 8.
Хотя различные модели IRI (ишемии-реперфузии) были описаны для различных органов, 9-12 мало подходит для прямой визуализации лейкоцитов набор в микроциркуляторного русла на высоком уровне качества изображения 8.
Мы здесь способствовать цифровой прижизненной микроскопии эпифлуоресцентной посткапиллярных венулы в cremasteric микроциркуляциюкрыс 13 как удобный способ для качественного и количественного анализа лейкоцитов набор для IRI-исследований в поперечно-полосатой мышечной ткани и обеспечивает детальное руководство для достижения техники. Мы также иллюстрируют распространенные ошибки и полезные советы, которые должны позволить читателю по-настоящему оценить и безопасно выполнять методом.
В шаг за шагом протокол изобразить, как начать работу с дыханием контролируемой анестезии при достаточном мониторинга держать животное твердо наркозом в течение длительного периода времени. Затем описываются cremasteric подготовка в виде тонкого плоского листа за выдающиеся оптическим разрешением и обеспечивают протокол лейкоцитов изображений в ИРИ, который был хорошо зарекомендовали себя в наших лабораториях.
Лейкоцитов-эндотелиальной взаимодействия, производство активных форм кислорода и активации системы комплемента являются ключевыми особенностями IRI-индуцированной дисфункции ткани. 26 микроциркуляции пораженной ткани рассматривается как неотъемлемый сайт воспалительные забо…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана грантом "Deutsche Forschungsgemeinschaft" в СУ Eisenhardt (EI 866/1-1).
Name of the equipment: | Company: | Catalogue No.: | Comments: |
Forene 100% (V/V) | Abbot | B506 | API isoflurane |
Terylene Suture | Serag Weissner | OC108000 | |
Portex Fine Bore Polythene Tubing | Smiths Medical | 800/100/100 | 0.28 mm inner Diameter |
0,9% saline solution | Fresinus Kabi | 808771 | |
Change-A-tip deluxe cautery kit | Bovie Medical | DEL1 | |
Abbocath -T 14G | Venisystems | G713 – A01 | used as lens tube |
Servo Ventilator 900C | Maquet | used as animal ventialtor | |
Logical pressure transducer | Smiths Medical | MX1960 | |
Sirecust 404 Monitor | Siemens | ||
ABL 700 Benchtop Analyzer | Radiometer | for blood gas measurement | |
Heating pad | Effenberger | 8319 | |
Aluminum stage | Alfun | AW7022 | |
Surgical microscope OPMI 6-SDFC | Carl Zeiss | ||
Microsurgical instruments lab set | S&T | 767 | |
Biemer vessel clip | Diener | 64.562 | |
Applying forceps | Diener | 64.568 | for Biemer vessel clip |
Rhodamine 6G | Sigma-Aldrich | R4127 | |
Vaseline white DAB | Winthrop | 2726853 | |
Cover glasses | 32×32 mm | ||
Intravital setup | |||
Zeis Axio Scope A-1 MAT | Carl Zeis | 490036 | epifluorescence microscope |
470 nm LED | Carl Zeis | 423052 | fluorescence light source |
Colibri 2 System | Carl Zeis | 423052 | |
W Plan-Apochromat 20x/1,0 DIC | Carl Zeis | 421452 | water immersion objective |
AxioCam MRm Rev. 3 FireWire | Carl Zeis | 426509 | high resolution digital camera |
Axio vision LE software | Carl Zeis | 410130 | use for offline analysis |