Oclusão bilateral artéria carótida comum como um estímulo pré-condicionamento adequados para induzir a tolerância isquêmica início da Isquemia Cerebral Focal
Summary
Existem evidências, que o pré-condicionamento isquêmico (PC) – um desafio isquêmico não-prejudicial ao cérebro – confere uma proteção transitória a um insulto isquêmico prejudicial subseqüente. Nós estabelecemos a oclusão da artéria carótida comum bilateral (BCCAO) como um estímulo pré-condicionamento isquémico para induzir tolerância precoce (TI) para a isquemia cerebral focal transiente (induzida pela oclusão da artéria cerebral média, MCAO) em C57BL6 / J mice.
Abstract
Existem evidências, que o pré-condicionamento isquêmico – um desafio isquêmico não-prejudicial ao cérebro – confere uma proteção transitória a um insulto isquêmico prejudicial subseqüente. Nós estabelecemos a oclusão da artéria carótida comum bilateral como um estímulo pré-condicionamento isquémico para induzir tolerância no início da isquemia cerebral focal transiente em ratos C57BL6 / J. Neste vídeo, vamos demonstrar a metodologia utilizada para este estudo.
Introduction
Acidente vascular cerebral isquêmico é uma doença com uma elevada taxa de mortalidade e um enorme fardo socioeconómico 1. Apesar experimentais e clínicos esforços científicos intensivos ao longo das últimas décadas, as opções de tratamento para pacientes com AVC isquêmico agudo permanece muito limitada 2. Em contraste com isso, aumento do percentual de idosos nos países desenvolvidos vai aumentar drasticamente a incidência e prevalência de pacientes com acidente vascular cerebral isquêmico nas próximas décadas 3. Portanto, existe uma necessidade premente de novas estratégias de tratamento em pacientes com acidente vascular cerebral isquêmico.
Uma abordagem é a de obter uma maior compreensão dos mecanismos de adaptação endógena de cérebro de lidar com um estímulo nocivo. Esta neuroprotecção derivado do cérebro, também conhecido como pré-condicionamento isquémico (PC) ou tolerância isquémica (TI) e descreve um fenómeno, no qual um estímulo nocivo não-nocivo aplicado ao cérebro, induz uma resistência transientecontra um subsequente insulto isquémico prejudicial 4. Ela ocorre em duas janelas de tempo diferentes: início de TI, o que ocorre dentro de minutos a algumas horas após o PC e atrasou TI, que precisa de uma latência de um par de horas para ocorrer 4.
Até agora, as pesquisas sobre TI no cérebro tem se concentrado em atraso TI. Muito menos se sabe sobre os mecanismos de início de TI. O objetivo deste estudo é estabelecer a oclusão bilateral da artéria carótida comum (BCCAO), que é um estímulo criado para induzir atrasou, como um estímulo PC adequado para induzir início de TI à isquemia cerebral focal transitória (induzida pela oclusão da artéria cerebral média, MCAO) em ratinhos C57BL6 / J.
Durante os dois procedimentos cirúrgicos (BCCAO e MCAO), foi realizado monitoramento do fluxo sanguíneo cerebral (CBF) pelo laser Doppler (LDF).
BCCAO foi realizada em ratos anestesiados e respirando espontaneamente. Ambas as artérias carótidas comuns (CCA) foram expostose tapada durante 60 seg seguido de 5 min de reperfusão. Esta sequência / reperfusão BCCAO foi repetido duas vezes. Após a cirurgia, os ratos recuperaram rapidamente e não mostrou sinais de comprometimento funcional. A fim de excluir, que o protocolo BCCAO descrito acima não resultou em morte celular atraso no cérebro, foi realizada uma TdT mediada dUTP-biotina nick rotulagem final (TUNEL) coloração 72 horas após BCCAO (ou cirurgia sham) em um grupo separado.
MCAO é um modelo amplamente estabelecida para a indução de isquemia cerebral focal em roedores 5-7. Os procedimentos cirúrgicos foram realizados com procedimentos operacionais padronizados (POP) 8. Depois de expor CCA esquerda, um monofilamento de silicone coberto foi introduzida no CCA distal, avançado através da artéria carótida interna (ICA) para o círculo de Willis até que a artéria cerebral anterior (ACA) e, desse modo, a origem da artéria cerebral média ( MCA) foi ocluído durante um período de tempo definido. No presente estudo, nósutilizado 45 min de MCAO, o que normalmente resulta em lesão isquémica no território MCA envolvendo as áreas do corpo estriado e corticais cerebrais.
Em nosso estudo, analisamos o perfil temporal do início de TI usando BCCAO como o estímulo PC. Nossos dados indicam que o intervalo de tempo ideal entre BCCAO e MCAO para induzir o início de TI é de 30 min.
Neste vídeo, vamos dar uma demonstração de ambos os procedimentos cirúrgicos, ou seja, BCCAO e MCAO.
Protocol
Representative Results
Discussion
Em nosso estudo, nós mostramos que três seqüências de BCCAO, cada um com duração de um minuto, seguida de reperfusão por cinco minutos, são um estímulo PC isquêmico adequado para induzir início de TI.
Além disso, demonstrámos que o protocolo utilizado é o pré-condicionamento de um procedimento invasivo e menor segurança sem morbidez pós-operatória digno de nota, não há sinais de apoptose no tecido cerebral e nenhuma mortalidade. Vários protocolos de pré-condicionamento …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of the instrument | Company | Catalogue number/model |
| Binocular surgical microscope | Zeiss | Stemi 2000 C |
| Light source for microscope | Zeiss | SteREO CL 1500 ECO |
| Heating pad with rectal probe | FST | 21061-10 |
| Stereotactic frame | David Kopf | Model 930 |
| Scissors | FST | 91460-11 |
| Dumont forceps #5 | FST | 11251-10 |
| Dumont forceps #7 | FST | 11271-30 |
| Mircovascular clamp | FST | 00398-02 |
| Clamp applicator | FST | 00072-14 |
| Springscissors | FST | 15372-62 |
| Needle holder | FST | 12010-14 |
| Needles | Feuerstein, Suprama | BER 562-20 |
| 5-0 silk suture | Feuerstein, Suprama | |
| 7-0 silk suture | Feuerstein,Suprama | |
| 8-0 silk suture | Feuerstein, Suprama |
References
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