移植筋前駆細胞を標的とする分子イメージング
Summary
筋芽細胞移植の成功を評価するための非侵襲的な手段が記載されている。この方法は、その発現が異なる撮像モダリティで撮影することができる遺伝子を統合的融合レポーター遺伝子を利用しています。ここでは、利用すること<em> fluc</em生物発光イメージングを介して細胞を標的とする>レポーター遺伝子配列。
Abstract
デュシェンヌ型筋ジストロフィー（DMD）は3500男子 で1に影響を及ぼす重篤な遺伝性神経筋疾患であり、進行性筋変性1,2によって特徴づけられる。患者では、損傷した筋線維を再生させる常駐筋衛星細胞の能力（SCS）は4ますます効率が悪くなる。したがって、健常者の筋前駆細胞（MPCは）/筋芽細胞の移植は、DMDに対する有望な治療アプローチである。幹細胞療法の使用への主要な制限は、しかし、移植細胞の長期的なモニタリングのため、その有効性を評価するための信頼性の高い画像処理技術の欠如である。ここでは、筋芽細胞移植の成功を評価するための非侵襲、リアルタイムのアプローチについて説明します。この方法は、（ホタルルシフェラーゼ[fluc]、単量体赤色蛍光タンパク質[MRFP]とSR39チミジンキナーゼ[sr39tk]）expre遺伝子から成る統一融合レポーター遺伝子を利用していますssionは異なる撮像モダリティ9、10に結像させることができる。陽電子放射断層撮影（PET）、単光子放出コンピュータ断層撮影（SPECT）、磁気共鳴イメージング（MRI）、光学イメージング、および高周波3次元超音波を含むイメージングモダリティ、様々なユニークな長所、短所がそれぞれ、利用可能になりました11。生物発光イメージング（BLI）の研究では、例えば、比較的低コスト、高スループットであるという利点を持っています。これは、本研究では、我々はマウスに移植後の生存能力のあるC2C12筋芽細胞の短期のローカリゼーションのための融合遺伝子と生物発光イメージング（BLI）内に含まれるホタルルシフェラーゼ（fluc）レポーター遺伝子配列を利用して、このような理由からですDMDのモデル12-14（X染色体[MDX]マウスの筋ジストロフィー）。重要なのは、BLIは、標識されたMPCは、移植後の体内動態を検討するための手段を提供してくれますし、tで繰り返し細胞を追跡するために有用であろうIMEとは、次の移行。私たちのレポーター遺伝子アプローチはさらに、私たちは、単一の生体内で複数の画像診断法をマージすることができ、断層の性質、空間分解能と大きな動物とヒト10,11にスケールアップする能力を考えると、PETは、私たちが将来の仕事の基礎を形成します前臨床モデルへと臨床応用への細胞内で開発された方法の迅速な翻訳を促進することが示唆された。
Protocol
Representative Results
Discussion
そこで本研究では、移植後の非侵襲的に標的筋芽細胞/ MPCのための高速かつ信頼性の高い分子イメージング、レポーター遺伝子アプローチを説明してきました。この研究はbioluminescenseイメージング（BLI）を介して移植されたMPCの短期的な局在を示しているが、細胞が標的とされる方法は 、実際には、簡単に安定して発現していることが細胞の移植による細胞移植の長期的評価に?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者はfluc/mrfp/sr39tkレポーター遺伝子の贈り物をSanjivガンビールに感謝したいと思います。この作品は、カナダの幹細胞ネットワーク（SCN）とジェシーの旅財団によって資金を供給された。
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| C2C12 myoblasts | ATCC | ||
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium | Life Technologies | 12800-017 | |
| fetal bovine serum | Life Technologies | 12483020 | |
| 0.25% Trypsin-EDTA | Life Technologies | 25200-72 | |
| Hanks Balanced Salt Solution | Sigma Aldrich | H6648 | |
| Lipofectamine 2000 | Life Technologies | 11668-019 | |
| Nikon Eclipse TE2000-5 | Nikon Instruments Inc. | ||
| Xenolight D-luciferin | PerkinElmer | 122796 | 40 mg/ml in PBS |
References
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