培養細胞からの染色体の準備
Summary
染色体は、例えば、リンパ球または皮膚線維芽細胞等の生細胞から、ヒトまたはマウスを含む生物から単離することができる。これらの染色体調製物は、さらに、ルーチンG-バンディングなどsituハイブリダイゼーション （FISH）、 蛍光 、比較ゲノムハイブリダイゼーション（CGH）、スペクトル核型分析（SKY）のような分子細胞遺伝学手順のために利用することができる。
Abstract
染色体（細胞遺伝学的）分析は、染色体不安定性の検出のために広く使用されている。 G-バンディングや、in situハイブリダイゼーション（FISH）蛍光として分子技術が続く場合には、このアッセイは、1つ以上の染色体が関与するゲノム再配列の部分の損益を伴う収差を個々の細胞を分析するための強力な能力を持っています。ヒトでは、染色体異常は約1 160あたりの出生1,2、すべての流産の60から80パーセントで発生する3,4、死産の10％の2,5、先天性心疾患6、3から6パーセントを持つ個人の13％不妊のケース2の、そして発達遅滞と先天性欠損7と多くの患者において。クローン性染色体異常の観察は、診断および予後的意義8,9の両方を有することが示されているように、悪性腫瘍の細胞遺伝学的分析は、日常的に、研究者や臨床医によって使用される。60、染色体の分離は、遺伝子治療のための非常に貴重であり、ヒト以外の霊長類とげっ歯類10月13日を含む生物の幹細胞研究。
染色体は、血液リンパ球、皮膚線維芽細胞、羊膜細胞、胎盤、骨髄、および腫瘍検体を含む生体組織の細胞から単離することができる。染色体は、それらが最も凝縮された場合に、有糸分裂の中期段階で分析され、したがって、よりはっきりと見える。染色体分離技術の最初のステップは、後続の後期段階に進むから細胞を防ぐためにコルセミドとのインキュベーションによって、紡錘糸の破壊を伴う。次いで、細胞を低張液で処理し、カルノア固定液との膨潤した状態で保存されている。次いで、細胞をスライドガラス上に滴下し、次いで、種々の手順のために利用することができる。 Gバンド法は、特徴的な明暗の帯を作成するためにギムザで染色し、トリプシン処理を必要とする。同じPR染色体を単離するocedureは、例えば、in situハイブリダイゼーション （FISH）、 蛍光 、比較ゲノムハイブリダイゼーション（CGH）、スペクトル核型分析（SKY）14,15のような手順のための細胞の調製のために使用することができる。
Introduction
染色体分析は、染色体不安定性と遺伝性疾患や悪性腫瘍の1,2,8,9につながる再配列を診断するために、世界的に利用される従来の手法である。また、憲法および癌取得した遺伝的異常の診断および研究のための高解像度は、例えば、蛍光in situハイブリダイゼーション （FISH）などの古典的な細胞遺伝学的手順および分子細胞遺伝学的方法論の組み合わせ、比較ゲノムハイブリダイゼーション（CGH）で達成することができる、およびスペクトル核型分析（SKY）14,15。より最近では、これらの技術は、幹細胞研究に関連付けられた染色体不安定性の評価のために利用されている。そのような長期培養胚細胞（ES）および種々の生物の成体幹細胞の異数性のような核型異常は、複数の研究室により報告されている。最近の証拠は、いくつかの細胞系は本質的に、染色体に対してより傾斜していることを裏付けるinstabi関係なく、培養条件のLITY。確立および/またはヒト、マウス、アカゲザル幹細胞株を維持するときに、この理由のため、染色体分析は、品質管理プロセスの一部として推奨されている。多くの報告が文化10月13日中の幹細胞および悪性細胞または様々な生物の染色体の安定性を監視するためのルーチンおよび分子細胞遺伝学の使用の関心の高まりを説明します。これらのプロトコルは、ますます培養細胞の迅速な13染色体非遺伝的評価のために実験室で使用されている。我々は、様々な生物由来の臨床研究のため、細胞の両方に適用することができる種々の細胞型からの染色体を調製するための我々の基本的な手順を提示する。
Protocol
Representative Results
Discussion
我々は、種々のヒトから得られた細胞型、アカゲザル、ラットおよびマウス11,20-22を含む種々の生物の細胞から染色体を単離するための本手順を利用している。標準的なプロトコルが提供されるが、特定の重要なステップと変数は、細胞のこれらの多様なタイプのために調整される必要があり得る。いくつかの具体的な手順は、染色体の準備と結果の可能な限り最高の品質を確保する…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
本稿で説明した作業は、パトリック·F·テイラー財団からの資金によって可能になりました。
Materials
| KaryoMAX Colcemid | Gibco | 15212-012 | |
| HBSS Buffer | Gibco | 24020-117 | |
| 0.5% Trypsin EDTA 10x | Gibco | 15400-054 | |
| Permount | Fisher Scientific | SP15-100 | |
| Buffer Tablets "GURR" | Gibco | 10580-013 | |
| Geimsa Stain | Ricca Chemical Company | 3250-16 | |
| Centrifuge 5810 | Eppendorf | ||
| Methanol | Caledon Laboratory Chemicals | 6700130 | |
| Glacial Acetic Acid | Krackeler Scientific Inc. | 11-9508-05 |
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