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웨스턴 블롯
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개요
웨스턴 블로팅은 전기전구분리 시료에서 특정 단백질의 존재를 식별하는 데 사용됩니다. 나트륨 도데딜 황산염 폴리아크라이글라미드 젤 전기포고증 또는 SDS-PAGE로 알려진 기술에 의한 분리에 따라, 서부 전달은 폴리아크릴아미드 젤에서 단백질을 각 위치에서 단백질을 트랩하는 막 조각으로 이동시키는 데 사용된다. 다음으로, 막은 면역제팅에게 불린 프로세스에 있는 항체로 조사됩니다. 면역블로팅은 특정 인식 부위를 통해 항체 단백질 및 항체 결합을 사용하며 단일 단백질을 식별하는 데 필요한 높은 특이성을 제공합니다. 항체의 검출은 효소의 사용을 포함하는 기자 시스템을 사용하여 일어난다. 효소는 항체의 끝에 부착하고 색상이나 빛의 변화를 생성하기 위해 기판과 반응할 수 있습니다. 그런 다음 이러한 신호는 밀도라는 프로세스를 사용하여 이미지를 만들고 정량화할 수 있습니다.
이 비디오 기사는 서부 전세, 항체 검출 의 사용 및 이미지 분석을 설명하여 서양 얼룩 기술에 대한 개요를 제시합니다. 이송 샌드위치 및 이송 조건의 조립과 같은 서부 전달과 관련된 단계는 항체 결합 및 항체의 검출 뒤에 대한 이론뿐만 아니라 자세히 논의된다. 이 기술의 광범위한 응용 프로그램은 단백질 -단백질 상호 작용의 검출및 단백질 복합체 내의 개별 단백질의 식별을 포함하여 몇몇 예를 통해 기술됩니다.
Procedure
웨스턴 블로팅은 항체를 사용하여 전기 전구 분리 된 샘플에서 특정 단백질의 존재를 확인하기 위해 많은 연구자들이 사용하는 강력한 기술입니다. 이 기술의 3가지 주요 단계는 품질 결과에 필수적인 3가지 주요 단계인 전기연전, 면역블로팅 및 검출입니다. 이러한 단계를 시도하기 전에, 변성 단백질이 폴리 아크릴아미드 젤의 크기로 분리되는 SDS-PAGE는 수행해야합니다….
Disclosures
No conflicts of interest declared.
내레이션 대본
Cite This
JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. The Western Blot. JoVE, Cambridge, MA, (2023).
