O Western Blot

Western Blotting é usado para identificar a presença de proteínas específicas em amostras eletroforeticamente separadas. Após a separação por uma técnica conhecida como sulfato de sódio de poliacrilamida de gel de gel eletroforese, ou SDS-PAGE, a transferência ocidental é usada para mover proteínas de um gel de poliacrilamida para um pedaço de membrana que prende as proteínas em suas respectivas localizações. Em seguida, as membranas são sondadas com anticorpos em um processo chamado imunboblotting. A imunoblotting utiliza proteína de anticorpos e anticorpos de ligação através de locais específicos de reconhecimento, fornecendo a alta especificidade necessária para identificar uma única proteína. A detecção de anticorpos ocorre utilizando sistemas de repórteres que incluem o uso de enzimas. Enzimas podem ser anexadas ao final de um anticorpo e reagir com substratos para produzir mudanças de cor ou luz. Esses sinais podem então ser imagens e quantificados usando um processo chamado densitometria.

Este vídeo-artigo apresenta uma visão geral da técnica de mancha ocidental, descrevendo a transferência ocidental, o uso de detecção de anticorpos e análise de imagem. As etapas envolvidas com a transferência ocidental, como a montagem do sanduíche de transferência e as condições de transferência, são discutidas em detalhes, bem como a teoria por trás da ligação de anticorpos e detecção desses anticorpos. As amplas aplicações dessa técnica são descritas através de vários exemplos, incluindo a detecção de interações proteína-proteína e identificação de proteínas individuais dentro de complexos proteicos.