Clonazione molecolare

La clonazione molecolare è un insieme di metodi, che vengono utilizzati per inserire DNA ricombinante in un vettore – un vettore di molecole di DNA che replicherà frammenti di DNA ricombinante negli organismi ospiti. Il frammento di DNA, che può essere un gene, può essere isolato da un campione procariotico o eucariotico. Dopo l’isolamento del frammento di interesse, o inserto, sia il vettore che l’inserto devono essere tagliati con enzimi di restrizione e purificati. I pezzi purificati sono uniti insieme attraverso una tecnica chiamata legatura. L’enzima che catalizza la reazione di legatura è noto come ligasi.

Questo video spiega i principali metodi che sono combinati, in tandem, per comprendere la procedura generale di clonazione molecolare. Vengono discussi gli aspetti critici della clonazione molecolare, come la necessità di una strategia di clonazione molecolare e come tenere traccia delle colonie batteriche trasformate. Vengono inoltre menzionate le fasi di verifica, come il controllo del plasmide purificato per la presenza di inserti con digest e sequenziamento delle restrizioni.