Melk Collection Methoden voor Mice and Reeves 'Muntjac Herten
Summary
Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer.
Abstract
Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen’s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.
Introduction
Diermodellen inzicht in pathologie die niet kunnen worden verkregen door in vitro analyse. De meest effectieve resultaten oplevert, is het belangrijk om een diermodel dat nauw samenhangt met de ziekte en soorten van gebruik. Bijvoorbeeld, de Reeves 'muntjak (wordt reevesi), een kleine Aziatische hert 1,2 en transgene muizen die de cervid prion eiwit (CerTgPrP) 3 zijn nuttig diermodellen voor soorten hertachtigen. Beide soorten zijn polyestrous, waardoor het hele jaar door fokken, en dus een consistente bron voor zwangerschap-gerelateerde weefsels en vloeistoffen aan specifieke mechanismen bestuderen in hertachtigen biologie. Studies van melk hebben een breed scala van toepassingen die eenvoudiger (en goedkoop) bereikt in diermodellen dan bij de mens. Onderzoekers konden melk en biest als een potentiële bron van 1) overdracht van infectieziekten te onderzoeken, 2) immunoglobulinen overgedragen van moeder op nakomelingen in de ontwikpment van passieve immuniteit 4 en 3) lactoferrine, een eiwit dat voorkomt in moedermelk betrokken bij passieve immuniteit dat de onderzoekers op dit moment proberen om commercieel te produceren 5.
Het verzamelen van een grote hoeveelheid melk van kleine dieren kunnen blijken te zijn een moeilijke taak worden. Rogers voorgestelde benadering om melk te verzamelen van ratten 6, die vervolgens werd gebruikt in muizen. DePeters en Hovey voorgesteld twee methoden voor melkinzameling een een handmatig gegenereerde onderdruk door een rubberen pipet bolbodem een Pasteur pipet en een tweede waarbij de constructie van een melkstel, die vervolgens wordt bevestigd aan een vacuümbron (zoals als een kraan) voor muis melk 7 oogsten. Hier stellen we een eenvoudige, goedkope methode voor het verzamelen van melk van zowel muizen als Reeves 'muntjac herten, die alleen beschikbaar laboratorium apparatuur en technische basisvaardigheden vereist. Onze methode levert voldoende hoeveelheden melk voor diversetoepassingen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Muis
Er zijn verschillende factoren om rekening te houden bij het verzamelen van melk van een muis, waaronder 1) het bedrag van de tijd gereserveerd voor het verzamelen, 2) de dosis oxytocine toegediend, 3) hoeveel pups de dam is momenteel verpleging en 4) het bedrag van de tijd die is verstreken sinds de bevalling op het moment van de collectie. Met behulp van eerdere studies als leidraad hebben we besloten om de voorwaarden voor de melkgift te optimaliseren.
<p class="…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
These experiments were funded by the NIH grant #RAI093634A. We express immense gratitude to Jenny Powers, DVM, PhD, for her assistance in muntjac milking.
Materials
| Materials-Mouse | |||
| Name of Material/Reagent | Vendor | Catalog Number | Comments |
| Ketamine (KetaVed 100 mg/mL) (dose: 80-100 mg/kg) | MWI/Vedco | 011075 | |
| Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose:5-10 mg/kg) | MWI/Vedco | NADA 139236 | |
| Eye lubricant | MWI/Apexa | 701013 | |
| Oxytocin (2 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Materials- Muntjac | |||
| Name of Material/Reagent | Vendor | Catalog Number | Comments |
| Midazolam (1-2 mg/kg) | Amerisource Bergen Drug Corp | 924326 | optional: researcher can either use Midazolam on its own or BAM combination as an anesthetic |
| Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health | NADA 135-780 | |
| Azaperone tartrate (0.25 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Medetomadine HCl (0.07 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dose: 0.25 mg/kg) | Orion Corporation | NADA 141-033 | |
| Oxytocin (10 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Equipment- Mouse | |||
| Name of Equipment | Vendor | Catalog Number | Comments |
| P-200 Pipetman | Gilson | F123601 | |
| 200 μL pipette tips | Light Labs | B-2004-SH | |
| 1 ml syringes | MWI | 005427 | |
| 27 gauge needles | MWI | 002031 | |
| Equipment- Muntjac | |||
| Name of Equipment | Vendor | Catalog Number | Comments |
| 15 ml conical tubes | VWR | 21008-918 | |
| 22 gauge needles | MWI | 873 | |
| 3 ml luer lock syringes | MWI | 001377 |
References
- Dueling, S. . Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , (2004).
- Pei, K., Taber, R., O’Gara, B., Wang, Y. Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China. Mammalia. 59 (2), 223-228 (1995).
- Browning, S. R. Transmission of prions from mule deer and elk with chronic wasting disease to transgenic mice expressing cervid PrP. J. Virol. 78 (23), 13345-13350 (2004).
- Van de perre, P. Transfer of antibody via mother’s milk. Vaccine. 21 (24), 3374-3376 (2003).
- Maden, C. Genetically modified mice produce human milk protein. BioNews. , (2009).
- Rodgers, C. T. Practical aspects of milk collection in the rat. Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).
- Depeters, E. J., Hovey, R. C. Methods for collecting milk from mice. J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).
- Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. Milk yield and composition in mice: effects of litter size and lactation. 84 (1), 127-133 (1986).
- Hedrich, H. J., Bullock, G. R. The laboratory mouse. , 735-736 (2004).
- Nishimori, K., Young, L. J., Guo, Q., Wang, Z., Insel, T. R., Matzuk, M. M. Oxytocin is required for nursing but is not essential for parturition or reproductive behavior. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (21), 11699-11704 (1996).
- Miller, B. F., Osborn, D. A., Lance, W. R., Howze, M. M., Warren, R. J., Miller, K. V. Butorphanol-azaperone-medetomidine for immobilization of captive white-tailed deer. 45 (2), 457-467 (2009).
