Métodos de coleta de leite para Ratos e Reeves Muntjac cervos
Summary
Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer.
Abstract
Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen’s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.
Introduction
Os modelos animais fornecem informações sobre a patologia da doença que não pode ser adquirida através da análise in vitro. Para obter os resultados mais eficazes, é importante o uso de um modelo animal, que está intimamente relacionado com a doença e da espécie de interesse. Por exemplo, o muntjac Reeves (Muntiacus reevesi), um pequeno cervo asiáticos 1,2 e camundongos transgênicos que expressam a proteína príon cervídeos (CerTgPrP) 3 são modelos animais úteis para as espécies de cervídeos. Ambas as espécies são polyestrous, permitindo reprodução durante todo o ano e, portanto, uma fonte consistente de tecidos e fluidos relacionados com a gravidez para estudar mecanismos específicos em biologia cervídeos. Estudos de leite tem uma vasta gama de aplicações, que são mais simples (e barata) realizados em modelos animais do que em seres humanos. Pesquisadores poderia investigar leite e colostro como uma fonte potencial de 1) a transmissão de doenças infecciosas, 2) imunoglobulinas transferidos de mãe para filho no desenvolvimento da imunidade passiva 4 e 3) a lactoferrina, uma proteína encontrada no leite materno humano envolvido na imunidade passiva que os investigadores estão actualmente a tentar produzir comercialmente 5.
Coleta de uma quantidade substancial de leite de pequenos animais pode revelar-se uma tarefa difícil. Rogers propôs uma abordagem para coletar o leite de ratos 6, que foi posteriormente utilizados em camundongos. DePeters e Hovey propostos dois métodos para a recolha de leite, um utilizando um vácuo gerado produzido manualmente por um bolbo de pipeta de borracha ligada a uma pipeta de Pasteur, e uma segunda que exige a construção de uma unidade de ordenha, que é então ligado a uma fonte de vácuo (tal como uma torneira) para colher o leite do mouse 7. Aqui propomos um método de custo simples, de baixo para a recolha de leite de ratos e Reeves 'veado muntjac, que requer equipamentos de laboratório apenas prontamente disponíveis e habilidades técnicas básicas. Nosso método produz volumes suficientes de leite para diversasaplicações.
Protocol
Representative Results
Discussion
Mouse
Existem vários factores a ter em consideração aquando da recolha de leite de um rato, incluindo 1) a quantidade de tempo reservado para a coleta, 2) a dose de ocitocina administrada, 3) quantos filhotes da barragem é atualmente de enfermagem e 4) a quantidade de tempo que se passou desde o parto, no momento da coleta. Usando estudos anteriores como diretrizes, partimos para otimizar as condições de produção de leite.
Pesquisas anter…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
These experiments were funded by the NIH grant #RAI093634A. We express immense gratitude to Jenny Powers, DVM, PhD, for her assistance in muntjac milking.
Materials
| Materials-Mouse | |||
| Name of Material/Reagent | Vendor | Catalog Number | Comments |
| Ketamine (KetaVed 100 mg/mL) (dose: 80-100 mg/kg) | MWI/Vedco | 011075 | |
| Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose:5-10 mg/kg) | MWI/Vedco | NADA 139236 | |
| Eye lubricant | MWI/Apexa | 701013 | |
| Oxytocin (2 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Materials- Muntjac | |||
| Name of Material/Reagent | Vendor | Catalog Number | Comments |
| Midazolam (1-2 mg/kg) | Amerisource Bergen Drug Corp | 924326 | optional: researcher can either use Midazolam on its own or BAM combination as an anesthetic |
| Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health | NADA 135-780 | |
| Azaperone tartrate (0.25 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Medetomadine HCl (0.07 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dose: 0.25 mg/kg) | Orion Corporation | NADA 141-033 | |
| Oxytocin (10 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Equipment- Mouse | |||
| Name of Equipment | Vendor | Catalog Number | Comments |
| P-200 Pipetman | Gilson | F123601 | |
| 200 μL pipette tips | Light Labs | B-2004-SH | |
| 1 ml syringes | MWI | 005427 | |
| 27 gauge needles | MWI | 002031 | |
| Equipment- Muntjac | |||
| Name of Equipment | Vendor | Catalog Number | Comments |
| 15 ml conical tubes | VWR | 21008-918 | |
| 22 gauge needles | MWI | 873 | |
| 3 ml luer lock syringes | MWI | 001377 |
References
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