Mælk Collection Metoder til Mus og Reeves 'Muntjac Deer

Summary

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer.

Abstract

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen’s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Introduction

Dyremodeller give indsigt i sygdommen patologi, som ikke kan opnås ved in vitro-analyse. At give de mest effektive resultater, er det vigtigt at anvende en dyremodel, der er nært relateret til sygdommen og arter af interesse. For eksempel Reeves 'muntjac (Muntiacus reevesi), en lille asiatiske hjorte ^1,2, og transgene mus, der udtrykker hjortedyr prion protein (CerTgPrP) ^3. er nyttige dyremodeller for hjortedyr arter. Begge arter er polyestrous, så året rundt avl, og derfor en konsekvent kilde til graviditetsrelaterede væv og væsker til at studere specifikke mekanismer i hjortedyr biologi. Undersøgelser af mælk har en bred vifte af applikationer, der er mere enkelt (og billigt) udført i dyremodeller end hos mennesker. Forskerne kunne undersøge mælk og colostrum som en potentiel kilde til 1) smitsom sygdom transmission, 2) immunoglobuliner overføres fra mor til afkom i udvikpment af passiv immunitet ⁴ og 3) lactoferrin, et protein der findes i modermælk er involveret i passiv immunitet, at forskere er i øjeblikket forsøger at kommercielt producere ^5.

Indsamling af en væsentlig mængde af mælk fra små dyr kan vise sig at være en vanskelig opgave. Rogers foreslog en tilgang til at indsamle mælk fra rotter, ^6, som efterfølgende blev brugt i mus. DePeters og Hovey foreslås to metoder til indsamling af mælk, den ene med en manuelt genereret vakuum fremstillet af gummi pipette pære fastgjort til en Pasteur-pipette, og en anden, der kræver anlæg af en malkeenhed, som derefter fastgøres til en vakuumkilde (såsom som en vandhane) at høste muse mælk ^7. Her foreslår vi en enkel, billig metode til indsamling af mælk fra både mus og Reeves 'muntjac hjorte, hvilket kun kræver let tilgængelige laboratorieudstyr og grundlæggende tekniske færdigheder. Vores metode giver tilstrækkelige mængder mælk til diverseapplikationer.

Protocol

1.. Mouse Malkning Protocol De i denne protokol beskrevne metoder blev godkendt af IACUC. 1.. Adskillelse af Dam fra Offspring Vælg dæmningen der skal malkes. Vælg en dæmning med et kuld på 4 eller flere unger, der er 8-12 dage efter fødsel til at give maksimal indsamling af mælk-selv samling er muligt på ethvert tidspunkt efter fødslen op til 21 dage. Adskil dæmningen fra hendes kuld mindst 2 timer før malkning. Bemærk: Skal …

Representative Results

Mus Fra vores eksperimenter har vi fastslået, at det er muligt at indsamle ca 100-400 pi mælk fra en laboratorie-mus, afhængig af flere variabler. Disse variabler omfatter 1) den tid, der er afsat til indsamling, 2) dosis af oxytocin administreret, 3) hvor mange unger dæmningen er i øjeblikket sygepleje og 4) mængden af ​​tid efter kælvning. Vores undersøgelser har vist, at det højeste udbytte opnås, når dæmninger er separeret fra deres afkom i mindst 2 timer…

Discussion

Mus

Der er flere faktorer at tage i betragtning, når de indsamler mælk fra en mus, herunder 1) den tid, der er afsat til indsamling, 2) dosis af oxytocin administreret, 3) hvor mange unger dæmningen er i øjeblikket sygepleje og 4) det beløb, tid, der er gået siden fødslen på tidspunktet for indsamlingen. Brug tidligere undersøgelser som retningslinjer, vi satte sig for at optimere betingelserne for mælkeydelse.

Tidligere forskning har d…

Materials

Materials-Mouse
Name of Material/Reagent	Vendor	Catalog Number	Comments
Ketamine (KetaVed 100 mg/mL) (dose: 80-100 mg/kg)	MWI/Vedco	011075
Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose:5-10 mg/kg)	MWI/Vedco	NADA 139236
Eye lubricant	MWI/Apexa	701013
Oxytocin (2 IU/kg)	Vet One	501013
Materials- Muntjac
Name of Material/Reagent	Vendor	Catalog Number	Comments
Midazolam (1-2 mg/kg)	Amerisource Bergen Drug Corp	924326	optional: researcher can either use Midazolam on its own or BAM combination as an anesthetic
Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg)	Fort Dodge Animal Health	NADA 135-780
Azaperone tartrate (0.25 mg/kg)	ZooPharm
Medetomadine HCl (0.07 mg/kg)	ZooPharm
Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dose: 0.25 mg/kg)	Orion Corporation	NADA 141-033
Oxytocin (10 IU/kg)	Vet One	501013
Equipment- Mouse
Name of Equipment	Vendor	Catalog Number	Comments
P-200 Pipetman	Gilson	F123601
200 μL pipette tips	Light Labs	B-2004-SH
1 ml syringes	MWI	005427
27 gauge needles	MWI	002031
Equipment- Muntjac
Name of Equipment	Vendor	Catalog Number	Comments
15 ml conical tubes	VWR	21008-918
22 gauge needles	MWI	873
3 ml luer lock syringes	MWI	001377