Mjölk Collection Metoder för möss och Reeves 'Muntjac Deer

Summary

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer.

Abstract

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen’s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Introduction

Djurmodeller ge insikt i sjukdomspatologi, som inte kan erhållas genom in vitro-analys. För att åstadkomma de mest effektiva resultaten, är det viktigt att använda en djurmodell som är nära relaterad till sjukdomen och arter av intresse. Till exempel, Reeves muntjac (muntiacus reevesi), en liten asiatiska rådjur ^1,2, och transgena möss som uttrycker den cervid prionprotein (CerTgPrP) ^3, är användbara djurmodeller för cervid arter. Båda arterna är polyestrous, vilket gör året runt avel, och därmed en enhetlig källa för graviditetsrelaterade vävnader och vätskor för att studera specifika mekanismer i hjortdjur biologi. Studier av mjölk har ett brett spektrum av applikationer som är mer helt enkelt (och billigt) åstadkommit i djurmodeller än hos människor. Forskare kan undersöka mjölk och råmjölk som en potentiell källa till 1) smittsam sjukdom sprids, 2) immunoglobuliner överförs från mor till avkomma i utveckpment av passiv immunitet ⁴ och 3) laktoferrin, ett protein som finns i bröstmjölk inblandad i passiv immunitet som forskare för närvarande försöker att producera kommersiellt ^5.

Samla en väsentlig mängd av mjölk från små djur kan visa sig vara en svår uppgift. Rogers föreslog en metod för att samla in mjölk från råttor ^6, som sedan användes i möss. DePeters och Hovey föreslagit två metoder för uppsamling av mjölk, en med användning av en manuellt genererat vakuum som produceras av en gummi pipett glödlampa ansluten till en pasteurpipett, och en andra som kräver konstruktion av en mjölkningsenhet, som sedan är fäst vid en vakuumkälla (exempelvis som en kran) för att skörda mus mjölk ^7. Här föreslår vi en enkel, billig metod för insamling av mjölk från både möss och Reeves muntjac rådjur, som kräver endast lätt tillgängliga laboratorieutrustning och grundläggande teknisk kompetens. Vår metod ger tillräckliga volymer av mjölk för olikaapplikationer.

Protocol

1. Mouse Mjölkning Protocol De metoder som beskrivs i detta protokoll har godkänts av IACUC. 1. Separation av dammen från Offspring Välj dammen som ska mjölkas. Välj en damm med en kull på 4 eller fler valpar som är 8-12 dagar efter nedkomst för att ge maximal uppsamling av mjölk-även om samlingen är möjlig vid någon tidpunkt efter förlossning upp till 21 dagar. Separera dammen från hennes kull minst 2 timmar före mjölkning. <b…

Representative Results

Mus Från våra experiment har vi fastställt att det är möjligt att samla in cirka 100-400 l av mjölk från ett laboratorium mus, beroende på flera variabler. Dessa variabler är 1) den tid som avsatts för insamling, 2) den dos av oxytocin administreras, 3) hur många valpar dammen är idag omvårdnad och 4) den tid efter förlossning. Våra studier har visat, att det högsta utbytet erhålles då dammarna är separerade från deras avkomma i minst 2 timmar, och åtmin…

Discussion

Mus

Det finns flera faktorer att ta hänsyn till när man samlar in mjölk från en mus, däribland 1) den tid som avsatts för insamling, 2) den dos av oxytocin administreras, 3) hur många valpar dammen är idag omvårdnad och 4) det belopp tid som har gått sedan förlossning vid tidpunkten för insamlingen. Med hjälp av tidigare studier som riktlinjer, vi ut för att optimera förutsättningarna för mjölkproduktion.

Tidigare forskning har …

Materials

Materials-Mouse
Name of Material/Reagent	Vendor	Catalog Number	Comments
Ketamine (KetaVed 100 mg/mL) (dose: 80-100 mg/kg)	MWI/Vedco	011075
Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose:5-10 mg/kg)	MWI/Vedco	NADA 139236
Eye lubricant	MWI/Apexa	701013
Oxytocin (2 IU/kg)	Vet One	501013
Materials- Muntjac
Name of Material/Reagent	Vendor	Catalog Number	Comments
Midazolam (1-2 mg/kg)	Amerisource Bergen Drug Corp	924326	optional: researcher can either use Midazolam on its own or BAM combination as an anesthetic
Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg)	Fort Dodge Animal Health	NADA 135-780
Azaperone tartrate (0.25 mg/kg)	ZooPharm
Medetomadine HCl (0.07 mg/kg)	ZooPharm
Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dose: 0.25 mg/kg)	Orion Corporation	NADA 141-033
Oxytocin (10 IU/kg)	Vet One	501013
Equipment- Mouse
Name of Equipment	Vendor	Catalog Number	Comments
P-200 Pipetman	Gilson	F123601
200 μL pipette tips	Light Labs	B-2004-SH
1 ml syringes	MWI	005427
27 gauge needles	MWI	002031
Equipment- Muntjac
Name of Equipment	Vendor	Catalog Number	Comments
15 ml conical tubes	VWR	21008-918
22 gauge needles	MWI	873
3 ml luer lock syringes	MWI	001377