리스테리아 단세포 유전자를 사용하여 감염된 마우스에 있는 문화와 심혼 식민지에 있는 심장 세포의 세균성 침략 평가
Summary
리스테리아 단세포 유전자는 취약한 인구에 있는 임산부및 뇌막염에 있는 태아 감염을 일으키는 원인이 됩니다. 박테리아의 하위 인구는 심장 조직을 식민지화 할 수 있습니다, 환자와 실험실 동물에 심근염을 일으키는. 여기에서 우리는 감염된 동물에 있는 체외 및 심장 식민지에 있는 L. monocytogenes 심장 세포 침략을 평가하는 방법을 설명하는 프로토콜을 제시합니다.
Abstract
리스테리아 단세포 유전자는 면역 손상 환자, 노인 및 임산부에서 심각한 침습적 감염을 일으킬 수있는 그램 양성 성 세포 내 병원균입니다. 인간에 있는 listeriosis의 일반적인 표현은 뇌막염, 뇌염 및 태아 낙태를 포함합니다. 침략적인 L. monocytogenes 감염의 중요하지만 훨씬 적게 문서화된 속편은 심혼을 관련시킵니다. 심장 병에서 죽음 비율은 처리에도 불구하고 최대 35%까지 일 수 있습니다, 그러나 아주 거의 심장 조직 및 그것의 결과병학의 L. monocytogenes 식민지에 관하여 알려져 있습니다. 또한, 최근 L. 단세포 유전자의 하위 인구가 심장 조직 내에서 침입하고 성장할 수 있는 향상된 용량을 가지고 있다는 것이 명백해졌습니다. 이 프로토콜은 L. monocytogenes 분리의 심폐소생학을 평가하는 데 사용할 수있는 생체 외 및 생체 내 방법에 대해 자세히 설명합니다. 방법은 H9c2 쥐 심장 근막의 감염뿐만 아니라 감염된 마우스의 심장의 세균 식민지의 결정에 대해 제시된다. 이러한 방법은 감염된 동물의 심장 조직을 식민지화 할 수있는 잠재력을 가진 균주를 식별하는 데 유용할뿐만 아니라 심장 세포 침입및 / 또는 심장 병리학의 변화를 촉진하는 역할을하는 세균 성 유전자 제품의 식별을 용이하게 할 수 있습니다. 이러한 방법은 또한 다중 L. monocytogenes 균주 사이 심혈 성 부속의 직접적인 비교를 제공.
Introduction
리스테리아 단세포 유전자는 노인, 임산부, HIV/AIDS를 가진 사람들 및 화학요법을 받는 사람을 포함하여 취약한 인구에 있는 가혹한 질병을 일으키는 원인이 될 수 있는 그람 양성 세포내병원체입니다 1. 이 인구에 있는 감염은 수시로 오염한 식품을 섭취의 결과이고, 대부분의 감염은 대규모 식품 매개 발발과 연관됩니다2,3. 인간과 다른 포유동물에서, L. monocytogenes는 소장의 상피 경계를 가로질러 배설할 수 있고, 그 후에 간4,5로이송된다. 동물 모델은 섭취한 박테리아가 장 내의 담악과 포털 정맥을 통해 간으로 이동하거나 혈류로 막대한 림프절을 통해 퍼지며 간 및 비장에 혈액 선서를 통해 혈액 류로 확산되는 것을 제안한다6,7. 간과 비장에서 박테리아는 전문 식세포뿐만 아니라 상주 한창 세포로 섭취를 중재 할 수 있으며 이러한 장기 내에서 신속하게 감염을 확립합니다. 세균성 하중이 증가함에 따라, 수많은 박테리아는 혈액으로 다시 분산되어 중추 신경계와 태반 (현재)을 포함하여 취약한 조직을 더 식민지화 할 수 있습니다. 이 사이트의 식민지는 뇌막염, 뇌염 및 태아 낙태2를포함하여 인간에서 리스테리오증의 일반적인 표현을 배제합니다.
L. monocytogenes의 선택된 하위 인구는 최근에 심장 조직8내에서 침략하고 복제하는 향상된 능력을 갖는 것으로 나타났습니다. 심장 참여의 증상은 다양하며 내막염과 복막염에서 부터 전도 이상으로 완성된 충만성 심근염에 이르기까지다양하다. L. monocytogenes 심장 케이스의 전반적인 수는 1 년에 낮습니다 그러나 감염의 이 면이 일반적으로 잘 인식되지 않기 때문에 추정될 수 있습니다. 병원체에 의한 심장의 식민지화는 종종 기존의 용기 손상 또는 인공 심장 판막과 같은 호스트 소인이 필요합니다. 그러나, 어떤 심장 손상 및/또는 이상이 없는 경우에 감염된 동물의 심혼을 식민지화하는 그들의 능력에 대해 주목할 만한 확인된 L. monocytogenes의 격리가있습니다 8.
본명에서 조직 배양뿐만 아니라 살아있는 동물 감염에 침입 적인 소심을 이용하여 감염된 동물 내의 심장 조직의 세균성 식민지화를 평가하기 위한 체외 및 생체 내 방법으로 기재된다. 이러한 방법은 감염된 동물의 심장 조직을 식민지화 할 수있는 잠재력을 가진 균주를 식별하는 데 유용할뿐만 아니라 심장 세포 침입을 강화하고 심장 병리학의 변화를 초래하는 세균 성 유전자 제품의 식별에 유용해야합니다. 이러한 방법은 여러 균주 사이의 심부전의 비교를 용이하게. 여기서 설명된 방법에 대해, L. monocytogenes 10403S는 비심혈성 균주를 잘 연구한 대표자로 사용되며 임상 분리 07PF0776은 심장영양균의 대표적인 예로 사용된다. 이 두 균주는 생체 내에서 감염된 마우스의 심장의 체외 및 식민지에서 심장 세포의 세균성 침입에대한 비교를 제공하기 위해 선택되었다. 분리07PF0776은 HIV+ 환자8에서치명적인 부정맥을 일으킨 간 농양에서 회복된 임상 격리이다. L. monocytogenes 분리그들의 독성 잠재력에 다를 수 있습니다., 그리고 리스테리아 면역 억제와 임산부를 감염 하는 성향을 감안할 때, 이러한 인구 내의 사람들은 다른 임상 격리를 평가 하는 동안 주의 행사 해야.
Protocol
Representative Results
Discussion
L. 단세포 유전자는 광범위하고 잘 특징인 인간 병원체, 다른 질병 표현의 다수를 일으키는 원인이 될 수 있는15. 박테리아는 이전에 중앙 신경계에 도달하고 식민지화하고 태아를 개발하기 위하여 혈액 두뇌 장벽 및 태반 태아 장벽과 같은 장벽을 가로질러 배분하는 기능에 대해 설명되었습니다. 이 조직을 식민지화하는 유기체의 생체 내 능력은 종종 표적 장기를 구성하는 ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작업은 공중 보건 서비스 보조금 AI41816 및 AI099339 (N.E.F.) 및 NiAID의 F31AI094886-01 (P.D.M)에 의해 지원되었습니다. 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 자금 출처의 공식 견해를 나타내는 것은 아닙니다.
Materials
| Difco | BHI Broth Base | 237200 | 2KG of Brain Heart Infusion powder (without agar) |
| Difco | Agar | 214510 | 2KG of Granulated Agar |
| Difco | BHI Agar | 241810 | 2KG of Brain Heart Infusion Powder with 7.5% Agar |
| in vitrogen | LB Broth Base | 12975-084 | 2KG of Luria Broth Base Powder (without agar) |
| Fisher | Glass Coverslips | 12-545-80 | 12mm glass coverslips |
| Falcon | 24-well Tissue Culture Plate | 35-3047 | 24 Well, Plasma-treated Tissue Culture Plate |
| Falcon | 14mL Polystyrene tube | 352051 | 14mL Polystyrene tubes |
| Falcon | 96-well U-bottom plate | 35-3077 | Non-tissue culture treated 96-well plate |
| Corning | 0.05% Trypsin, 0.53 mM EDTA (1X) | 25-052-CI | Stock solution of Trypsin EDTA for tissue culture |
| Corning | DMEM (High glucose, high pyruvate) | 15-013-CU | DMEM media without FBS, glutamine, or antibiotics |
| Corning | Pen/Strep/Glut Solution | 30-009-CI | Stock mixture of penicillin, streptomycin, and L-glutamine for tissue culture |
| Corning | Gentamicin | 30-005-CR | 50mg/mL Stock solution of Gentamicin for tissue culture |
| Cellgro (Corning) | L-Glutamine | 25005197 | Stock L-glutamine solution without antibiotics |
| Denville | 75cm^2 Flask | T1225 | 75cm^2 tissue culture treated flask |
| Denville | 1.5mL microcentrifuge tubes | 2013004 | 1.5mL microcentrifuge tubes |
| ATCC | H9c2 Cardiac Myoblasts | CRL-1446 | Rat cardiac myoblasts |
| Hyclone | Fetal Bovine Serum | SH30070.63 | Fetal Bovine Serum |
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