縦<em>インビボ</em>脳血管系のイメージング：中枢神経系疾患との関連
Summary
この原稿が縦2光子顕微鏡を用いたin vivoでのアミロイド斑の蓄積の間に脳血管系のリモデリングを追跡するための手順を説明します。間引き頭蓋骨製剤は、アルツハイマー病のマウスモデルにおける脳損傷の進行を評価するために、蛍光色素の可視化を可能にします。
Abstract
脳血管系のリモデリングは、脳の病理の共通の特徴です。 in vivoでのイメージング技術は、脳血管可塑性または損傷が残業を発生し、神経活動や血液の流れに関連して検出することが基本です。 生体内では 2光子顕微鏡は、生きている脳内の大規模な細胞単位の構造的および機能的可塑性の研究を可能にします。具体的には、間引き頭蓋骨ウィンドウの準備は重要な脳の炎症を誘発することなく、関心領域（ROI）の皮質領域の可視化を可能にします。皮質ROIの反復的なイメージングセッションは、多数のCNS疾患の進行中に、時間をかけて病気の特徴の特徴付けを提供する、実現可能です。脳の250μmの範囲内軟膜構造にアクセスするこの技術は、遺伝子細胞マーカーおよび/または生体染色色素によってコードされた蛍光プローブの検出に依存しています。後者（ 例えば、蛍光デキストラン）はLUMINをマッピングするために使用されています脳血管構造のアルコンパートメント。本明細書に記載のプロトコルに密接には、アルツハイマー病（AD）の進行を評価するためのアミロイド沈着のインビボマーカー、メトキシO4の使用です。我々はまた、血管の変化およびアミロイド沈着を追跡するために使用されるポスト取込み画像処理を説明します。 ADのモデルに現在着目して、記載されているプロトコルは、病理学的な脳血管変更が発生し、他のCNS障害に関連しています。
Introduction
脳血管系は、解剖学的および機能的ニューロンに結合されている多細胞構造です。血管の動的なリモデリングは、脳の発達全体および中枢神経系（CNS）1,2の病状の進行中に発生します。広く脳損傷が、てんかん、アルツハイマー病（AD）、外傷性脳損傷および脳炎3,4を含むいくつかのCNS疾患の顕著な特徴であることが認められています。発症から慢性期に、CNS疾患をモデル化するときしたがって、in vivoでの脳血管の変化を追跡することは重要になります。脳血管の修飾は、しばしば、神経損傷または可塑性と同時に起こるように、神経血管系の画像化は、CNS疾患の病態生理学を解読するためのキーのエントリポイントを表します。
このプロトコルは、マウスモデルにおいて脳血管系の再構築を追跡するために、長手方向の二光子ベースの手順を説明しますAD、アミロイド形成性プラーク沈着5-7による大と小口径血管に脳血管の欠陥によってマークプログレッシブ病理。この手順では、病気の経過を通して神経血管リモデリングに対するアミロイド沈着の可視化とその位置と成長の追跡を可能にします。バイタル蛍光色素は、トランスジェニックADマウス8における脳血管およびアミロイド斑の可視化のための各撮像セッションの前に注入されます。薄くなった頭蓋骨の頭蓋窓を通してROIのイメージングセッションを非侵襲的であり、生きているマウスの脳2,5,9,10に神経血管リモデリングを評価するための選択の方法を繰り返します。
以下の手順は、外科プロトコル、画像取得および処理の概要を説明します。主に大軟膜と貫通細動脈における脳アミロイド血管症（CAA）の早期の進行を特徴としています。
Protocol
Representative Results
Discussion
in vivoでの 2光子顕微鏡のためのオープン頭蓋骨技術は大きな撮像視野13,14の無制限のイメージングセッションの利点を提供しています。しかし、この技術は、互換性のない、多くの場合、関心14の領域における炎症を生成または神経血管リードアウト15に影響を与えます。逆に、薄くなった頭蓋骨の頭蓋技術は、脳血管の構造およびプラーク蓄積10,14…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、リーグ・フランセーズcontre L'épilepsie（MA-Lに）、（FJ）に研究所ナショナル・デ・ラ・サンテら・デ・ラ・RECHERCHEMédicaleグラントAVENIR R12087FSは、モンペリエの大学からの助成金（FJ）と補助金を承認したいと思います連盟から（NM）にラRECHERCHEシュルルCerveauを注ぎます。私たちは、モンペリエのin vivoイメージングのコアプラットフォームの施設内IPAMでChrystelラフォンの技術支援を認めます。また、原稿を校正するためのメアリーVernov（ワイルコーネル医科大学を）感謝します。
Materials
| methoxy-X04 | tocris | 4920 | use 10 mg/Kg |
| FITC-Dextran 70Kda | sigma | 46945 | use 100 mg/Kg |
| gelfoam/Bloxang | Bausch and Lomb | ||
| micorsurgical blade | surgistar | 6900 | must be sharp and not dented |
| povidone-iodine | betadine | antisceptic solution | |
| binocular stereomicroscope | olympus | SX10 | optimal image contrast is crucial for this procedure |
| 2-photon microscope | zeiss | Zeiss LSM 710mp | |
| fine scissors-toughcut | Fine science tools | 14058-09 | this scissors are optimized for cutting skin and soft tissue |
References
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