Beyin omurilik sıvısı imzalat fareler gelen topluluğu için geliştirilmiş bir yöntem
Summary
Bu iletişim kuralı beyin-omurilik sıvısı (bos) kan yok kirlenme ile bol topluluğu için geliştirilmiş bir teknik anlatılmaktadır. Daha fazla örnek toplama ve saflık ile daha fazla analiz anlayışımız beyin ve omurilik etkileyen hastalıkların daha fazla için CSF kullanarak gerçekleştirilebilir.
Abstract
Beyin-omurilik sıvısı (bos) nörolojik araştırma analizi için değerli bir vücut sıvısı var. Bu sıvılar merkezi sinir sistemi ile yakın temas biridir ve böylece, doğrudan bu dokuların erişmeden beyin ya da omurilik hastalıklı durumunu analiz etmek için kullanılabilir. Ancak, kan damarlarının Sisterna magna yakınlığı nedeniyle elde etmek zordur farelerde, hangi sık sık örnekleri kontamine. Fareleri koleksiyonunda CSF için alan da için incelemek zordur ve genellikle sadece küçük örnekleri (5-7 µL en fazla veya daha az) elde edilir. Bu protokol üzerinde toplama kan kirlenme en aza indirmek ve bol koleksiyonda CSF (on ortalama 10-15 µL toplanan) izin vermek için geçerli yöntemleri geliştirir bir teknik ayrıntılı olarak anlatılmaktadır. CSF çekme sırasında herhangi bir doku etkilemez gibi bu tekniği fareler, doku koleksiyonundan için diğer diseksiyon yöntemleri ile kullanılabilir. Böylece, beyin ve omurilik bu tekniği ile etkilenmez ve sağlam kalır. Büyük CSF örnek toplama ve saflık ile daha fazla analizler bu sıvı daha fazla yardım nörolojik araştırma ile kullanılabilir ve daha iyi anlamak beyin ve omurilik etkileyen hastalıklar.
Introduction
Bos analizi nörolojik araştırma için değerli bir vücut sıvısı var. Bos öncelikle kan plazma kaç hücre (hiçbir kırmızı kan hücreleri ve sadece bir kaç beyaz kan hücreleri) içeren yapılır ve neredeyse protein ücretsizdir. Sıvılar merkezi sinir sistemi (MSS) ile yakın temas içinde biridir ve birçok elektrolit beyin ve omurilik periferik sisteme geçmek. İnsanlarda, CSF örnekleri hastalık teşhis yardım toplanabilir veya klinik araştırma amaçlı bir omurilik sıvısı (veya lomber ponksiyon) olarak bu küçük, invaziv bir işlemdir: CSF sıvı bunlar doğrudan erişmek zorunda kalmadan MSS değişiklikleri yansıtabilir doku. Böylece, klinikte, araştırma amacıyla son yıllarda CSF örnekleri nörodejeneratif hastalıklar Alzheimer hastalığı ve diğer demans1,2,3gibi hastalardan elde edilmiştir. Orada potansiyel olarak hastalıkları Kliniği2,3‘ te tanılamada yardımcı olmak için CSF numuneleri kullanılarak geliştirilen birçok biyomarker deneyleri. Ancak, özellikle hastalık4,5tanılamak için tutarlı, hassas sonuçlar üretmek için bu deneyleri güvenilirliğini çok tartışma var. Standart bir teknik üretiminde daha fazla duyarlılık ve özgüllük ile nörodejeneratif hastalıkları teşhis etmek için yardım etmek için daha iyi deneyleri ve bos içinde bulunabilir, hedefler geliştirilmesi için büyük bir ihtiyaç vardır. Potansiyel insan CSF örnekleri hastalık nedeniyle, nörolojik araştırma kemirgen CSF koleksiyonundan da ilgi önemlidir.
Fareler önemli hayvan biyolojik ve tıbbi araştırma ve potansiyel terapötik bileşiklerin ve prototip, çalışmaların insan klinik çalışmalarda önce test için izin. Sisterna magna, beyincik ve medulla oblongata dorsal yüzeyi arasında bir açıklık ile elde etmek için her zamanki yöntem CSF koleksiyon farelerde olduğu gibi Ancak, farelerde bu CSF örnekleri için küçük bir hayvan, beyinde yakınlığı nedeniyle elde etmek zordur. Bu zorluk bu alan için incelemek zor olduğu gibi CSF örnekleri toplama ve kan damarları, kan hücreleri kirlenme riski artan yakın neden olur. Bu zorluklar nedeniyle çoğu araştırmacı sadece CSF az miktarda (genellikle 5-7 µL belirtilen) analiz için elde edebilirsiniz ve kan hücreleri tarafından CSF örnekleri kirlenme analizleri6,7,8 için birincil bir sorundur , 9. kan kirlenme karanlık sonuçları ve değil gerçekten MSS durumunu yansıtır. Fareler toplanan zamanki miktar (içinde yinelenen ya da nüsha) tek bir ölçüm için yeterli Ayrıca, sınırlı örnek toplanan araştırma olabilir etkisi enzim bağlı immunosorbent assay (ELISA) kullanarak. Böylece, CSF örnekleri genellikle birden çok fare birden çok testleri çalıştırmak için yeterli örnek için havuza. Bir iletişim kuralı için bol geliştirmek, kirlenmemiş CSF koleksiyonundan fareler büyük ölçüde istenen ve kemirgenler kullanarak nörolojik araştırma geliştirmeye faydalı olacaktır.
Bu protokol, bol bir tekniği (ortalama 10-15 µL) imzalat fareler CSF koleksiyonundan ayrıntılı olarak açıklanmıştır ve kan10kirlenme en aza indirmek için CSF koleksiyonunun karşılaşabileceği bilinen bir yöntem geliştirir. CSF koleksiyonu için sağlam bir protokol yanı sıra hastalığı teşhis yardım araştırma MSS etkileyen hastalıkların altında yatan mekanizmaları geliştirmek için kullanılan olabilir CSF tabanlı biyomarker deneyleri, geliştirilmesinde yardımcı olacak.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu iletişim kuralı ayrıntılı olarak geçerli yöntemleri10 kan kirlenme en aza indirmek ve CSF bol koleksiyonu için izin vermek için CSF koleksiyonunun artıran bir teknik anlatılmaktadır (ortalama ~ 10-15 µL elde edilebilir) fare üzerinden. Kapiler uç kırma zaman kılcal ucu (sonra da bos hulâsa çok yavaş) çok küçük olmamalı veya (çok büyük-ecek değil var olmak yeterli bos toplamak için ince ve doku içinde kılcal teslim olmak). CSF koleksiyonu için alan dissekan zaman…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin (81650110527, 81371400) ve ulusal anahtar temel araştırma programı Çin (2013CB530900) tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Chloral hydrate (used as anesthetic) | Sinopharm Chemicals Reagen Co. Ltd. | 30037517 | CAS number 302-17-0. |
| Dissecting scissors | 66 vision technology | 54002 | |
| Dissecting curved forceps | 66 vision technology | 53072 | |
| Dissecting straight forceps | 66 vision technology | 53070 | |
| Mouse adapter (with ear bars) | Made in-house. | N/A | Similar equipment available from World Precision Instruments. |
| Dissecting microscope | Meiji Labax | Model 15381 | |
| Micromanipulator | World Precision Instruments | M3301 | |
| Magnetic base for micromanipulator | Kanetec | MB-K | |
| Glass capillaries | World Precision Instruments | 1B100-4 | |
| Micropipette puller | Sutter Instruments | Model P-1000 | |
| Syringes (1ml) | Tansoole | 02024692 | For 1ml. |
| Microtubes (1.5ml) | Axygen | MCT-150-C | |
| Protease inhibitor Cocktail Set III EDTA-free | Calbiochem | 539134 | |
| Human Aβ42 ELISA kit | Invitrogen | KHB3441 | |
| Piping (teflon tubing) | World Precision Instruments | MMP-KIT | Obtained from a microinjection kit and attached to the capillary holder and syringe. |
| Mini centrifuge | Tiangen Biotech | OSE-MC8 | |
| Cotton buds | Obtained from any household store/pharmacy. | N/A |
References
- Anoop, A., Singh, P. K., Jacob, R. S., Maji, S. K. CSF Biomarkers for Alzheimer’s Disease Diagnosis. Int. J. Alzheimers. Dis. 2010, 1-12 (2010).
- Blennow, K., Hampel, H., Weiner, M., Zetterberg, H. Cerebrospinal fluid and plasma biomarkers in Alzheimer disease. Nat. Rev. Neurol. 6 (3), 131-144 (2010).
- Schoonenboom, N. S. M., et al. Cerebrospinal fluid markers for differential dementia diagnosis in a large memory clinic cohort. Neurology. 78 (1), 47-54 (2012).
- Molinuevo, J. L., et al. The clinical use of cerebrospinal fluid biomarker testing for Alzheimer’s disease diagnosis: A consensus paper from the Alzheimer’s Biomarkers Standardization Initiative. Alzheimer’s Dement. 10 (6), 808-817 (2014).
- Fagan, A. M. CSF biomarkers of Alzheimer’s disease: impact on disease concept, diagnosis, and clinical trial design. Adv. Geriatr. 2014, 1-14 (2014).
- Ramautar, R., et al. Metabolic profiling of mouse cerebrospinal fluid by sheathless CE-MS. Anal. Bioanal. Chem. 404 (10), 2895-2900 (2012).
- Liu, L., Herukka, S., Minkeviciene, R., Vangreon, T., Tanila, H. Longitudinal observation on CSF Aβ42 levels in young to middle-aged amyloid precursor protein/presenilin-1 doubly transgenic mice. Neurobiol. Dis. 17 (3), 516-523 (2004).
- Schelle, J., et al. Prevention of tau increase in cerebrospinal fluid of APP transgenic mice suggests downstream effect of BACE1 inhibition. Alzheimer’s Dement. , (2016).
- You, J. -. S., Gelfanova, V., Knierman, M. D., Witzmann, F. A., Wang, M., Hale, J. E. The impact of blood contamination on the proteome of cerebrospinal fluid. Proteomics. 5 (1), 290-296 (2005).
- Liu, L., Duff, K. A Technique for Serial Collection of Cerebrospinal Fluid from the Cisterna Magna in Mouse. J. Vis. Exp. (21), (2008).
- Maia, L. F., et al. Changes in amyloid-β and Tau in the cerebrospinal fluid of transgenic mice overexpressing amyloid precursor protein. Sci. Transl. Med. 5 (194), 194re2 (2013).
- Oshio, K. Reduced cerebrospinal fluid production and intracranial pressure in mice lacking choroid plexus water channel Aquaporin-1. FASEB J. , (2004).
