Summary

HFOB 1.19 によって生成される鉱物と Sao 2 セルを使用して透過型電子顕微鏡エネルギー分散型 x 線微小分析での分析

Published: June 24, 2018
doi:

Summary

小胞の 2 つの人間の骨細胞によって放出における鉱物の状態を比較するためのプロトコルを提案する: hFOB 1.19 と Sao 2。自分の鉱化作用のプロファイルによってアリザリン赤-S (イオウ) 染色, 紫外線 (UV) 光可視化、伝達電子顕微鏡検査 (TEM) イメージング、エネルギー分散型 x 線微小分析 (EDX) を行った。

Abstract

このビデオは、エネルギー分散型 x 線微小分析 (TEM EDX) 小胞の 2 つの人間の骨細胞によって放出における鉱物の状態を比較すると透過型電子顕微鏡の使用を提示: hFOB 1.19 と Sao 2。アスコルビン酸 (AA) と β-グリセロリン酸 (β-GP)、治療後、これらの細胞株における鉱化完全な骨増殖から分化転換を受けるし、アパタイト核生成をトリガーするマトリックスの小胞 (MVs) を生成、細胞外マトリックス (ECM)。

アリザリン赤 S (イオウ) の染色と紫外線 (UV) を使用してセル lysates または続いて EDX 定量とイオン マッピング TEM 画像を用いたベシクルの鉱物組成の分析に基づいて、我々 はその骨肉腫を推論できる Sao 2 及び骨芽細胞hFOB 1.19 セルでは、異なる鉱化作用プロファイルを明らかにします。Sao 2 セル hFOB 1.19 細胞よりもより効率的に石化し、は紫外線の下で見えないがであるより多くの Ca と F の置換ハイドロキシアパ タイト (HA) に類似しているより大きい鉱物沈殿物を作り出します。

これらの技術を使用して得られた結果は、鉱化作用のプロセスがセルの種類によって異なることを結論することできます。細胞レベルでは、小胞の起源性事前鉱物の種類を提案します。

Introduction

骨は 2 つの部分から成る結合組織の種類: 有機性 (細胞と膠原線維) とミネラル (カルシウムとリン酸の化合物)。骨の主な無機成分は、アパタイト1です。骨 (骨芽細胞)、歯 (象牙芽細胞) および軟骨 (軟骨) の鉱化作用有能なセルの種類鉱化作用の初期の段階を調節する細胞外マトリックス (ECM) の蛋白質を生産し、行列を離すこと小胞 (MVs) (図 1)。MVs は 100-300 nm 径小胞カルシウムとアパタイト核生成を促進するリン酸を蓄積し、その後コラーゲン2,3にバインドします。その後、細胞外媒体にアパタイトを解放する MVs が崩壊します。アパタイトは、コラーゲン線維と接触して成長し、骨マトリックスを形成し続けます。石灰化は、P はと Ca2 +細胞中の一定した供給によって支えられています。いくつかの最近公開されたデータは、当社モデル4,5をサポートします。軟部組織は生理学的条件下で石化しません。ただし、異所性石灰化は、血管石灰化3など病理学的条件下で生じる。血管の細胞、骨芽細胞の表現型を取得は、アパタイトの核形成を誘導し、血管の壁の内側と内膜層の鉱化作用を開始して MVs を生成できます。異所性石灰化以来正常軟骨石灰化3、骨細胞の石灰化の分子機構の解明に似ており、軟骨、軟組織の異所性石灰化のいくつかの手がかりを提供形成されます。

骨格組織の開発は、様々 な酵素、成長因子、プロモーターや鉱化作用の阻害剤によって調整されます。拮抗作用組織非特異型アルカリホスファターゼ (TNAP) (図 1) と ectonucleotide ピロホスファターゼ/ホスホジエステラーゼの私 (NPP1)、アンキリン (アンク) と制御 (PP) 無機ピロリン酸濃度6TNAP; で加水分解 PP、ハ形成の強力な阻害剤。NPP1 では、アンクがセルから ECM に PP はをエクスポート中 PP はを形成するヌクレオチド三リン酸塩を加水分解します。Pi/PPi 比は、アパタイト形成7,8可能な病理学的結果9を調整するかもしれない。

MV の膜は、イオン輸送タンパク質核形成過程 (図 1) 中のカルシウムとリン酸、MVs の中の初期析出を促進することで濃縮されています。リン酸輸送体 1 (PiT) は、PMVs1011perivesicular 空間の生成を組み込むのに役立ちます。アネキシンは、バインドし、Ca2 +の輸送と MV ルーメン12,13の鉱化作用を開始する生物物理プロセスにかかわることも。述べましたが、ECM14,15中を伝搬する前に MV の中のアパタイトの内部の核細胞質内小胞内鉱化作用の仮説を支持します。In vitroモデルは、Ca2 +/P錯体形成16PS と AnxA5 から作られたプロテオリポソームの誘導を確認しました。その蓄積可能性がありますの Ca2 +P、微絨毛のような membranesrepresent Mアネキシンと TNAP 内アパタイトの核生成コア (NC) の脂質ラフトの AnxA5 と PS の錯体は、コラーゲン結合をまた所有しています。コラーゲン線維に沿って MVs を配置して、ECM の鉱化作用の伝播を刺激することで役立つことができる能力。フェツイン、オステオポンチン (OPN)17は膠原線維の足場に鉱化作用の伝播が遅くアパタイト形成の阻害剤として知られています。核生成と伝播が異なるイベント、上記後者の元と両方が病理学的無機化プロセスに関連する可能性があります。

カルシウム複合体の化学的性質がどのように変化生理的石灰化と異所性石灰化を発見し、細胞によって生成される鉱物を識別するために必要です。アパタイト カルシウムとリン酸鉱物、一般的な結晶単位セル数式 Ca10(PO4)6X2のグループは、ここで、X = Cl, F, オハイオ。18次のように分類されます: アパタイト (FA) Ca ハイドロキシアパ タイト (HA) Ca10(PO4アパタイト (CA) Ca10(PO4)6Cl2 10(PO4)6F2)6(OH)2

鉱物の形成を誘導する骨芽細胞のセルラインの選択は、各セルライン鉱化作用の異なるプロファイルを表わすので、重要です。本報告では、鉱化作用の 2 つの選択したひと細胞モデルによる鉱物の核形成を比較: 1.19 骨芽細胞 hFOB 細胞と細胞骨肉腫 Sao 2。骨肉腫由来細胞の骨芽細胞のモデルとして使われ、Sao 2 細胞は未分化のヒトの胎児 hFOB 細胞は骨芽細胞の通常のモデルとして幅広く使われている間最も成熟した骨芽細胞の文字19を維持してきた分化20。鉱化作用のプロファイルは、さまざまな方法によって分析された: アリザリン赤 S (イオウ) の染色、紫外線 (UV) 光の可視化、透過電子顕微鏡 (TEM) イメージング、エネルギー分散 x 線 (EDX) の微量分析の定量、およびイオンマッピング。以前の研究で使用される代替技術上の TEM EDX の利点は、アパタイト結晶4,5,21イオン交換の定量的および定性的な結果を与えるということです。TEM EDX を使用しての全体的な目標は、イメージングおよび石灰化過程の異なる段階で細胞の種類から様々 なミネラル Ca、F および Cl イオンの分布の定量化のため簡単な方法を見つけることだった。このメソッドが正常に使用されて、たとえば、共存する化学物質と亜鉛ナノ粒子との結合に及ぼす水生生物22の相互作用を監視するため。別の研究で銅触媒水溶液中でのチタン材料を広く誘導結合プラズマ発光分光分析法 (ICP-OES) N2 物理吸着 (ベット) によって特徴付けられた XRD, 紫外-可視 DRS、FT-IR、ラマン分光法、電子顕微鏡 EDX、および光電気化学測定23。私たちの目的は、小胞および石灰化骨分化を制御するメカニズムを理解する 2 つのセルラインの鉱物の性質と起源を比較しました。

Figure 1
図 1.骨細胞の細胞外マトリックス (ECM) 蛋白質合成と膜からマトリックスの小胞 (MVs) のリリースにおける鉱化作用の初期の段階の。MVs は、リン酸、無機リン酸トランスポーター (PiT) の作用により組織非特異的アルカリホスファターゼ (TNAP) 脱する活動が続く、アネキシン カルシウム結合蛋白質の作用によりカルシウムを蓄積します。PPP は、それによってアパタイト核生成を促進します。その後、MVs は崩壊して細胞外媒体にアパタイトをリリースします。石灰化は、P はと Ca2 +細胞外媒体45の安定供給によって支えられています。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Protocol

1. 細胞の培養と治療 層流フードの下で必要なすべての材料を入れ、紫外線の下でそれらを殺菌します。文化メディア: 1:1 の混合物ハムの F12 と DMEM メディア 2.5 mM L グルタミンを添加した 100 U/mL ペニシリン、100 U/mL ストレプトマイシン、0.3 mg/mL G418、10% ウシ胎児血清 (FBS) (v/v) 胎児 hFOB 1.19 SV40 large T 抗原の導入のため骨芽細胞と 1.5 mm L グルタミン 100 U/mL ペニシリン、100 U/mL ストレプト?…

Representative Results

TEM EDX 行列小胞 (MVs) の石灰化細胞によって放出・ M対このテクニックを使用して得られた結果を示す無機化プロセス可能性があります異なる進むことによって生成されるミネラルの体外イメージングが可能になります細胞の様々 なタイプ。2 つのセルの行が、同じ骨芽細胞分化転換治療を受け、まだ AR S によって証明されるよう刺激 Sao 2 細胞鉱 hFOB より?…

Discussion

現在の紙の AR s 染色、フルオロアパ タイトの UV 光識別プロトコルについて述べるし、MVs.によって生成される電子顕微鏡 EDX体外イメージング細胞の石灰化が発表した MVs と鉱物いくつかの一般的なトラブルシューティングの手順に従うことによって上記のすべてのメソッドに対応することが可能です。最適な結果を得るためにいくつかの重要な手順を慎重に実行する必要があり?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

MK と ASK が手動操作を実行して映画を作った LB 図面を準備します。ASK は原稿、LB はスクリプトを書いたし、MK は、表を作成しました。SM, RB, SP は批判的にテーブル、スクリプト、原稿を読みます。著者らは、超と彼女の優れた支援のためハンナ Chomontowska と同様、シモン十五夜とヘンリク Bilski TEM EDX 分析優秀な援助のために感謝したいと思います。著者は、dr プロ英語補正のためパトリック畑とバーバラ Sobiak の手順を記録するために感謝したいと思います。

この作品は、LB と 2016/23/N/NZ1/02449 MK、EU FP7 プロジェクト BIOIMAGINE に国立科学センター、ポーランド 2016年/23/N/NZ4/03313 から助成金を付与依頼、するポーランド科学高等教育省から N N401 140639 によって支えられました。: バイオ イメージング技術革新の研究と教育、GA 号 264173 と法定資金の Nencki 研究所の実験生物学、ポーランド科学アカデミー。

Materials

Reagent
Ham’s DMEM/F12 media mixture PAA E15-813 1:1, for human fetus hFOB 1.19 SV40 large T antigen transfected osteoblasts (ATCC CRL-11372)
McCoy’s 5A medium PAA E82312-0025 for human osteosarcoma Saos-2 cells (ATCC HTB-85)
Antibiotics mixture (penicillin/streptomycin) Sigma P0781-100ML 100 U/mL each
G-418 Sigma 68168 0.3 mg/mL
FBS Gibco 10270 10% for hFOB 1.19 and 15% for Saos-2
AA Sigma A-5960 50 µg/mL
ß-GP Sigma G9422-100G 7.5 mM
Bio-Gel HTP Gel Bio-Rad 130-0420 for HA
FA synthesized by us
CA synthesized by us
Sodium phosphate buffer Na2HPO4/NaH2PO4 mixture Sigma S7907/S8282 0.1 M, pH 7.2
PBS pH 7.0, prepared by us
AR-S in PBS Sigma A5533-25G 0.5 g/100 mL, pH 5.0
Collagenase type IA Sigma C2674 500 U/mL
SCL buffer prepared by us
Deionized wather produced by us
Ethanol POCh BA6480111 absolut 99.8% and solutions 25, 50, 75, 90%
Uranyl acetate in 50% ethanol Polysciences Inc. 21447-25 0.25 g/10 mL
PD medium pH 7.4, prepared by us
Fixation mixture (paraformaldehyde/glutaraldehyde) Sigma 158127/G-6257 3%:1%
Post-fixation OsO4 Sigma 75633 1%
LR White resin in ethanol Polysciences Inc. 17411-MUNC 500g 1:2, 1:1, 100%
Acetone CHEMPUR 111024800 pure
Tool
Cryogenic vials Corning Inc. 430487 1.2 mL
Plastic Petri culture dishes Falcon 353003 100 mm
Plastic tubes Falcon 352096 and 352070 15 and 50 mL
Serological pipettes Falcon and VWR 357521 and 612-3700 1 and 10 mL
Plastic microcentrifuge tubes Sigma Z688312 and Z628034 1.5 mL black and 2 mL transparent
Plastic tips VWR 613-0364, 613-0239 and 613-1050 0.1-10 µL natural, 1-200 µL yellow and 200-1000 µL blue
Plastic racks Light Labs A-7055-Z, A-7053-C green for tubes, orange for micro tubes and blue for TEM probes
Laminar Hera Save Thermo Scientific Co. KS12 HEPA filter (H14 according to DIN EN 1822)
Incubators Hera Cell Thermo Scientific Co. 150 34°C for hFOB 1.19 and 37°C for Saos-2
Fume hood POLON WCS-2 for TEM stainings
Glass bottles SIMAX 1632414501050 and 1632414501100 50 and 100 mL
Quartz glass tubes SIMAX 638422010100 Ø 10 mm, L 100 mm
Pump IBS Integra Biosciences VACUSAFE comfort for vacuum
Oven Memmert UNE 400 56°C
Porcelain multi-well plate Rosenthal technik 229/12 12 wells
Glass beakers SIMAX 632417010025 25 mL
Glass bottles Pocord DIN22 10 mL
Plastic box Agar Scientific Ltd. for darkness
Snap Fit Gelatin Capsules Agar Scientific Ltd. G3741 size 1
Formvar/Carbon 300 Mesh Ni grids in box Agar Scientific Ltd. S162N3 film on the shiny side
Silicon cell scraper Sigma SIAL0010-100EA size 1.8/25 cm
Syringe with needle BogMark 007 syringe 1 mL 40 U, needle 0.5 x 16
Syringe Chirana CH005L 5 mL
Centrifuge MPW Medical Instruments MPW-350R 130 x g and 500 x g
UV transluminator UVP M-20 for visible and UV light
Ultramicrotome LKB NOVA 700Å sections
Block holder LKB E6711 round shape
Diamond knife DiATOME Ultra 45° size 3
Eyelash holder bovine, prepared by us
Forceps ROTH 2855.1 antistatic for grids
Spatulas set ROTH E286.1 antistatic for powders
Imaging
Inverted Light Microscope Zeiss with Canon AxioObserver Z1 equipped with PowerShot G9 Phase contrast, Transmitted light, 20 x objective, RGB filters
Transmission Electron Microscope TEM Jeol Co. with Oxford Instruments and SiS-Olympus JEM-1400 TEM equipped with full range INCA Energy Dispersive X-ray microanalysis (EDX) System and 11 Megapixel MORADA G2 camera magnification 50,000X for TEM and 15,000X for STEM and EDX
Camera body and lenses Nikon Nikon D7100
Nikkor AF Micro 105 mm f/2.8D
Nikkor AF-S 50 mm f/1.8G
Nikkor AF 28 mm f/2.8D
for movie recordings
Microphone MXL Mics Tempo for voice recordings

References

  1. Buckwalter, J. A., Cooper, R. R. Bone structure and function. Instr. Course Lect. 36, 27-28 (1987).
  2. Anderson, H. C. Molecular biology of matrix vesicles. Clin. Orthop. Relat. Res. 314, 266-280 (1995).
  3. Anderson, H. C. Matrix vesicles and calcification. Curr Rheumatol. 5 (3), 222-226 (2003).
  4. Bolean, M., Simão, A. M. S., Barioni, M. B., Favarin, B. Z., Sebinelli, H. G., Veschi, E. A., Janku, T. A. B., Bottini, M., Hoylaerts, M. F., Itri, R., Millán, J. L., Ciancaglini, P. Biophysical aspects of biomineralization. Biophys Rev. 9 (5), 747-760 (2017).
  5. Bottini, M., Mebarek, S., Anderson, K. L., Strzelecka-Kiliszek, A., Bozycki, L., Simão, A. M. S., Bolean, M., Ciancaglini, P., Bandorowicz Pikula, J., Pikula, S., Magne, D., Volkmann, N., Hanein, D., Millán, J. L., Buchet, R. Matrix vesicles from chondrocytes and osteoblasts: Their biogenesis, properties, functions and biomimetic models. Biochim Biophys Acta. 1862 (3), 532-546 (2018).
  6. Hessle, L., Johnson, K. A., Anderson, H. C., Narisawa, S., Sali, A., Goding, J. W., Terkeltaub, R., Millan, J. L. Tissue-nonspecific alkaline phosphatase and plasma cell membrane glycoprotein-1 are central antagonistic regulators of bone mineralization. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 99 (14), 9445-9449 (2002).
  7. Garimella, R., Bi, X., Anderson, H. C., Camacho, N. P. Nature of phosphate substrate as a major determinant of mineral type formed in matrix vesicle-mediated in vitro mineralization: An FTIR imaging study. Bone. 38 (6), 811-817 (2006).
  8. Thouverey, C., Bechkoff, G., Pikula, S., Buchet, R. Inorganic pyrophosphate as a regulator of hydroxyapatite or calcium pyrophosphate dihydrate mineral deposition by matrix vesicles. Osteoarthr. Cartil. 17, 64-72 (2009).
  9. Terkeltaub, R. A. Inorganic pyrophosphate generation and disposition in pathophysiology. Am. J. Phys. 281 (1), 1-11 (2001).
  10. Guicheux, J., Palmer, G., Shukunami, C., Hiraki, Y., Bonjour, J. P., Caverzasio, J. A novel in vitro culture system for analysis of functional role of phosphate transport in endochondral ossification. Bone. 27 (1), 69-74 (2000).
  11. Yadav, M. C., Bottini, M., Cory, E., Bhattacharya, K., Kuss, P., Narisawa, S., Sah, R. L., Beck, L., Fadeel, B., Farquharson, C., Millán, J. L. Skeletal mineralization deficits and impaired biogenesis and function of chondrocyte-derived matrix vesicles in Phospho1(-/-) and Phospho1/Pi t1 double-knockout mice. J. Bone Miner. Res. 31 (6), 1275-1286 (2016).
  12. Thouverey, C., Malinowska, A., Balcerzak, M., Strzelecka-Kiliszek, A., Buchet, R., Dadlez, M., Pikula, S. Proteomic characterization of biogenesis and functions of matrix vesicles released from mineralizing human osteoblast-like cells. J. Proteome. 74 (7), 1123-1134 (2011).
  13. Wang, W., Xu, J., Kirsch, T. Annexin-mediated Ca2+ influx regulates growth plate chondrocyte maturation and apoptosis. J. Biol. Chem. 278 (6), 3762-3769 (2003).
  14. Nollet, M., Santucci-Darmanin, S., Breuil, V., et al. Autophagy in osteoblasts is involved in mineralization and bone homeostasis. Autophagy. 10 (11), 1965-1977 (2014).
  15. Boonrungsiman, S., Gentleman, E., Carzaniga, R., Evans, N. D., McComb, D. W., Porter, A. E., Stevens, M. M. The role of intracellular calcium phosphate in osteoblast-mediated bone apatite formation. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 109 (35), 14170-14175 (2012).
  16. Genge, B. R., Wu, L. N., Wuthier, R. E. In vitro modeling of matrix vesicle nucleation: synergistic stimulation of mineral formation by annexin A5 and phosphatidylserine. J. Biol. Chem. 282 (36), 26035-26045 (2007).
  17. Jahnen-Dechent, W., Schäfer, B., Ketteler, M., McKee, M. D. Mineral chaperones: a role for fetuin-A and osteopontin in the inhibition and regression of pathologic calcification. J. Mol. Med. (Berl). 86 (4), 379-389 (2008).
  18. Suchanek, W., Yoshimura, M. Processing and properties of hydroxyapatite-based biomaterials for use as hard tissue replacement implants. J. Miner. Res. 13 (1), 94-117 (1998).
  19. Pautke, C., Schieker, M., Tischer, T., Kolk, A., Neth, P., Mutschler, W., Milz, S. Characterization of osteosarcoma cell lines MG-63, Saos-2 and U-2 OS in comparison to human osteoblasts. Anticancer Res. 24 (6), 3743-3748 (2004).
  20. Yen, M. -. L., Chien, C. -. C., Chiu, I. -. M., Huang, H. -. I., Chen, Y. -. C., Hu, H. -. I., Yen, B. L. Multilineage differentiation and characterization of the human fetal osteoblastic 1.19 cell line: a possible in vitro model of human mesenchymal progenitors. Stem Cells. 25 (1), 125-131 (2007).
  21. Brittle, S. W., Foose, D. P., O’Neil, K. A., Sikon, J. M., Johnson, J. K., Stahler, A. C., Ryan, J. D., Higgins, S. R., Sizemore, I. E. A raman-based imaging method for characterizing the molecular adsorption and spatial distribution of silver nanoparticles to hydrated mineral surfaces. Environ Sci Technol. , (2018).
  22. Liu, N., Wang, Y., Ge, F., Liu, S., Xiao, H. Antagonistic effect of nano-ZnO and cetyltrimethyl ammonium chloride on the growth of Chlorella vulgaris: Dissolution and accumulation of nano-ZnO. Chemosphere. 196, 566-574 (2018).
  23. Tasbihi, M., Kočì, K., Troppová, I., Edelmannová, M., Reli, M., Čapek, L., Schomäcker, R. Photocatalytic reduction of carbon dioxide over Cu/TiO2 photocatalysts. Environ Sci Pollut Res Int. , (2017).
  24. Chen, N. X., O’Neill, K. D., Chen, X., Moe, S. M. Annexin-Mediated Matrix Vesicle Calcification in Vascular Smooth Muscle Cells. J. Bone Miner. Res. 23 (11), 1798-1805 (2008).
  25. Strzelecka-Kiliszek, A., Bozycki, L., Mebarek, S., Buchet, R., Pikula, S. Characteristics of minerals in vesicles produced by human osteoblasts hFOB 1.19 and osteosarcoma Saos-2 cells stimulated for mineralization. J. Inorg. Bioch. 171, 100-107 (2017).
  26. Thouverey, C., Strzelecka-Kiliszek, A., Balcerzak, M., Buchet, R., Pikula, S. Matrix vesicles originate from apical membranę microvilli of mineralizing osteoblast-like Saos-2 cells. J. Cell. Biochem. 106 (1), 127-138 (2009).
  27. Cazalbou, S., Eichert, D., Ranz, X., Drouet, C., Combes, C., Harmand, M. F., Rey, C. Ion exchanges in apatites for biomedical application. J. Mater. Sci. Mater. Med. 16 (5), 405-409 (2005).
  28. Kraus, D. Consolidated data analysis and presentation using an open-source add-in for the Microsoft Excel® spreadsheet software. Med. Writ. 23 (1), 25-28 (2014).
  29. Kawasaki, K., Buchanan, A. V., Weiss, K. M. Biomineralization in humans: making the hard choices in life. Annu. Rev. Genet. 43, 119-142 (2009).
  30. Bonucci, E. Bone mineralization. Front. Biosci. 17, 100-128 (2012).
  31. Veis, A., Dorvee, J. R. Biomineralization mechanisms: A new paradigm for crystal nucleation in organic matrices. Calcif. Tissue Int. 93 (4), 307-315 (2013).
  32. Nudelman, F., Lausch, A. J., Sommerdijk, N. A., Sone, E. D. In vitro models of collagen biomineralization. J. Struct. Biol. 183 (2), 258-269 (2013).
  33. Alliston, T. Biological regulation of bone quality. Curr. Osteoporos. Rep. 12 (3), 366-375 (2014).
  34. Wang, W., Kirsch, T. Retinoic acid stimulates annexin-mediated growth plate chondrocyte mineralization. J. Cell Biol. 157 (6), 1061-1069 (2002).
  35. Wang, W., Xu, J., Kirsh, T. Annexin V and terminal differentiation of growth plate chondrocytes. Exp. Cell Res. 305 (1), 156-165 (2005).
check_url/kr/57423?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Bozycki, L., Komiazyk, M., Mebarek, S., Buchet, R., Pikula, S., Strzelecka-Kiliszek, A. Analysis of Minerals Produced by hFOB 1.19 and Saos-2 Cells Using Transmission Electron Microscopy with Energy Dispersive X-ray Microanalysis. J. Vis. Exp. (136), e57423, doi:10.3791/57423 (2018).

View Video