Analysis of Minerals Produced by hFOB 1.19 and Saos-2 Cells Using Transmission Electron Microscopy with Energy Dispersive X-ray Microanalysis

Lukasz Bozycki; Magdalena Komiazyk; Saida Mebarek; Rene Buchet; Slawomir Pikula; Agnieszka Strzelecka-Kiliszek

doi:10.3791/57423

JoVE Journal > Chemistry

Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

화학

Анализ минералов, производимые hFOB 1.19 и Saos-2 клетки с помощью просвечивающей электронной микроскопии с энергии энергодисперсионный рентгеновский микроанализ

Published: June 24, 2018

doi:

10.3791/57423

Lukasz Bozycki, Magdalena Komiazyk, Saida Mebarek^3,4,5,6, Rene Buchet^3,4,5,6, Slawomir Pikula, Agnieszka Strzelecka-Kiliszek

¹Laboratory of Lipid Biochemistry, Nencki Institute of Experimental Biology,Polish Academy of Sciences, ²Université de Lyon, ³Université Lyon 1, ⁴L’insitut National des Sciences Appliquées (INSA) de Lyon, ⁵Ecole Supérieure de Chimie Physique Electronique (CPE) Lyon, ⁶Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS), Unité Mixte de Recherche (UMR),L’institut de Chimie et Biochimie Moléculaires et Supramoléculaires (ICBMS)

Summary

Мы представляем протокол для сравнения состояния минералов в везикулы, выпущенное две человеческие кости клеточных линий: hFOB 1.19 и Saos-2. Их минерализации профили были проанализированы по ализарин красный-S (AR-S) окрашивание, ультрафиолетового (УФ) света визуализации, передачи изображений электронной микроскопии (ТЕА) и энергии, дисперсионный рентгеновский микроанализ (EDX).

Abstract

Это видео представляет использование просвечивающей электронной микроскопии с энергии, дисперсионный рентгеновский микроанализ (ТЕА-EDX) для сравнения состояния минералов в везикулы, выпущенное две человеческие кости клеточных линий: hFOB 1.19 и Saos-2. Эти клеточные линии, после лечения с аскорбиновой кислотой (AA) и β-Глицерофосфат (β-GP), пройти полный Остеогенные transdifferentiation от распространения к минерализации и производим Матричные везикулы (МВС) которые вызывают нуклеации апатита в внеклеточная матрица (ECM).

Основываясь на окрашивание ализарин красный-S (AR-S) и анализ состава минералов в lysates клетки с помощью ультрафиолетового (УФ) света или пузырьки с помощью изображений ТЕА, следуют EDX количественный и Ион сопоставления, можно заключить, что остеосаркома Saos-2 и osteoblastic hFOB 1.19 клетки раскрыть собственный минерализации профили. Saos-2 клетки минерализации более эффективно, чем hFOB 1.19 клетки и производят больше полезных ископаемых, которые не видны под УФ света, но похожи на гидроксиапатита (га) в том, что они имеют больше Ca и F замен.

Результаты, полученные с помощью этих методов позволяет нам заключить, что процесс минерализации отличается в зависимости от типа ячейки. Мы предлагаем, что, на клеточном уровне, происхождение и свойства везикулы предопределить тип минералов.

Introduction

Кость — это тип соединительной ткани, состоящей из двух частей: органические (клетки и коллагеновые волокна) и минеральных (соединений кальция и фосфата). Основные минеральные компоненты в кости, Апатиты¹. Различные типы минерализации компетентных клеток в кости (остеобласты), зубы (odontoblasts) и хряща (хондроцитов) регулируют первоначальные шаги минерализации, производя белков внеклеточного матрикса (ECM) и выпускать матрица везикулы (МВС) (рис. 1). МВС являются 100-300 Нм диаметр пузырьков, которые накапливаются кальция и фосфатов, содействия апатита нуклеации и впоследствии связать коллаген²^,³. Затем MVs дезинтегрируют выпустить апатитов внеклеточных среды. Апатиты продолжают расти при контакте с коллагеновых волокон и формируют костной матрицы. Минерализация подкрепляется постоянные поставки P,_я и Ca^{2 +} в внеклеточных среды. Некоторые недавно опубликованные данные поддерживают нашу модель⁴^,⁵. Мягких тканей не минерализации в физиологических условиях. Однако эктопической кальцификации может произойти в патологических условиях например сосудистой кальцификации³. Сосудистые клетки, которые приобретают остеобластов фенотипом могут производить MVs, которые вызывают нуклеации апатитов и инициировать минерализации в медиальной и интимы слои стенки кровеносных сосудов. Начиная с эктопической кальцификации напоминают нормальный endochondral минерализация³, понимание молекулярных механизмов минерализация костных клеток и хондроцитов следует обеспечить некоторые подсказки на Эктопическая кальцификация мягких тканей, которые являются сформирован.

Развитие скелетных тканей регулируется различные ферменты, факторы роста и промоутеров или ингибиторов минерализации. Антагонистическое действие ткани неспецифические щелочной фосфатазы (TNAP) (рис. 1) и ectonucleotide пирофосфатаза/фосфодиэстеразы я (NPP1), вместе с Анкирины (АНК), контролирует концентрации неорганических пирофосфат (PP_я) ⁶. PP_я, мощным ингибитором формирования HA, гидролизуется по TNAP; NPP1 гидролизует нуклеотидов трифосфаты сформировать PP,_я пока ANK экспортирует PP,_яиз ячейки в ECM. Pi/PPi соотношение может регулировать апатита формирования⁷^,⁸ возможных патологических последствий⁹.

Мембрана MV обогащается в ионный транспорт белков, которые облегчают начальный осадков кальция и фосфатов внутри векторы во время процесса нуклеации (рис. 1). Фосфат транспортер 1 (Пит) помогает включить P_я сгенерирована perivesicular пространства в МВС¹⁰^,¹¹. Аннексины могут быть вовлечены в привязке и транспорта Ca^{2 +} и в процессе биофизических, который инициирует минерализации в MV просвета¹²^,¹³. Мы выступаем за гипотеза, предложил ранее, для минерализации в интрацитоплазматической пузырьков внутреннего нуклеации апатита внутри мВ до его распространения в ECM¹⁴^,¹⁵. В vitro моделирования подтвердил индукции формирования Ca^{2 +}/ p_я комплексов в proteoliposomes из¹⁶Л.С. и AnxA5. Это может означать, что накопление Ca^{2 +}, P,_я, AnxA5 и ПС комплексов в липидной плоты микроворсинки как membranesrepresent нуклеации ядро (NC) апатита в пределах Мпротив Аннексины и TNAP обладают также коллаген привязки возможности, которые могут быть полезны в размещении MVs вдоль волокон коллагена и в стимулировании распространения минерализации в ECM. Fetuin A и Остеопоэтин (OPN)¹⁷, известны как ингибиторы формирования апатита, которая может замедлить распространение минерализации на коллагеновых эшафот. Зарождения и распространения являются различные события, бывший до последнего, и оба могут быть актуальными для процесса патологических минерализации.

Чтобы узнать, как химический состав кальция фосфат комплексов могут изменить физиологических минерализации и эктопической кальцификации, это необходимо для идентификации минералов, производимые клеток. Апатиты группа кальция и фосфатов, содержащие минералы с общего кристалл блок клеток формулой Ca₁₀(PO₄)₆X₂, где X = Cl, F, OH. Они классифицируются следующим образом¹⁸: fluorapatite (ФА) Ca₆F₁₀(PO₄)₂, хлорапатитом (CA) Ca₁₀(PO₄)₆Cl₂ и гидроксиапатита (HA) Ca₁₀(PO₄ )₆(OH)₂.

Выбор остеобластов клеточных линий, чтобы побудить минеральные образования имеет решающее значение, поскольку в каждой ячейке строки экспонатов собственный профиль минерализации. В настоящем докладе, мы сравнили нуклеации минералов на две отдельных клеток человека модели минерализации: osteoblastic hFOB 1.19 клетки и клетки остеосаркома Saos-2. Остеосаркома, полученных клетки обычно используются как osteoblastic модели и Saos-2 клетки сохранили наиболее зрелой osteoblastic характер¹⁹ пока недифференцированные человеческого плода hFOB клетки широко используются как модель для нормальной osteoblastic дифференциация²⁰. Их минерализации профили были проанализированы различными методами: пятнать ализарин красный-S (AR-S), ультрафиолетового (УФ) света визуализации, передачи электронной микроскопии (ТЕА) изображений, энергии энергодисперсионный рентгеновский микроанализ (EDX) количественный и Ион сопоставление. Преимущество ТЕА-EDX над альтернативные методы, используемые в предыдущих исследованиях является, что она дает количественные и качественные результаты замены иона в апатита кристаллов⁴^,⁵^,²¹. Общая цель использования ТЕА-EDX состояла в том, чтобы найти простой способ для создания образов и количественной оценки распределения ионов Ca, F и Cl в различных минералов из различных типов клеток на различных этапах процесса минерализации. Этот метод успешно используется, например, для контроля взаимодействия цинка наночастиц с сосуществующих химических веществ и их совокупное воздействие на водные организмы²². В другом исследовании, медные фотокатализатор на титановые материалы в водном растворе широко характеризуется с помощью индуктивно связанной плазмы оптической эмиссионной спектрометрии (ICP-OES), N2 physisorption (BET), Дифракционные, UV-vis DRS, FT-IR, Раман спектроскопия, ТЕА-EDX и фотоэлектрохимические измерения²³. Нашей целью было сравнить происхождение и свойства везикулы и минералов в двух клеточных линий, чтобы понять механизм, который управляет минерализации при костной дифференциации.

Рисунок 1 . Схема из первоначальных шагов минерализации в костных клеток, синтез белков внеклеточного матрикса (ECM) и выпуска Матричные везикулы (МВС) от мембраны. МВС накопления кальция через действия кальция связывания белков, Аннексины и фосфат, через действие неорганического фосфата транспортера (Пит) следуют активности тканей неспецифической щелочной фосфатазы (TNAP), который dephosphorylates PP_я P_я, способствуя апатита зародышеобразования. Затем MVs распадаться и отпустите апатитов внеклеточных среды. Минерализация поддерживается постоянной поставке P,_я и Ca^{2 +} в внеклеточной средний⁴^,⁵. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Protocol

1. клетки культуры и лечение Положите все необходимые материалы под капотом ламинарного потока и стерилизовать их под УФ светом. Средства массовой информации культуры являются: 1:1 смесь ветчины F12 и DMEM СМИ с 2,5 мм L-глютамин дополнена 100 ед/мл пенициллин, 100 ед/мл стрептомицина, 0,3 мг/мл…

Representative Results

ТЕА-EDX позволяет для обработки изображений в vitro Матричные везикулы (МВС) выпущенный минерализация клетки и полезных ископаемых, выпускаемые Мпротив результаты, полученные с помощью этой методики продемонстрировать, что процесс минерализации может проходит…

Discussion

В текущем документе мы описали протоколы для окрашивания, УФ света идентификации fluorapatite AR-S и ТЕА-EDX в vitro изображений МВС, выпущенное минерализация клетки и минералов производимых MVs. Это позволяет решить все методы, упомянутые выше, после некоторых общих неполадок. Чтобы получ…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

МК и ASK ручной операции и LB подготовлены чертежи и сделал фильм. ASK написал рукопись, LB написал сценарий и MK подготовил таблицу. SM, RB и SP критически прочитать таблицу, сценарий и рукописи. Авторы хотели бы поблагодарить Hanna Chomontowska за ее превосходную помощь с ultramicrotomy а также Шимон Suski и Henryk Bilski за их прекрасную помощь с ТЕА-EDX анализа. Авторы хотели бы поблагодарить д-р Патрик рощи для коррекции профессионального английского языка и Барбара Sobiak для записи инструкции.

Эта работа была поддержана грант N N401 140639 от польского министерства науки и высшего образования спросить, за счет субсидий из национального научного центра, Польша 2016/23/N/NZ4/03313 фунтов и 2016/23/N/NZ1/02449 в МК, BIOIMAGINE Проект РП7 ЕС : Био-изображений в исследования инноваций и образования, GA № 264173 и уставных фондов из Ненцки Института экспериментальной биологии, польской академии наук.

Materials

Reagent
Ham’s DMEM/F12 media mixture	PAA	E15-813	1:1, for human fetus hFOB 1.19 SV40 large T antigen transfected osteoblasts (ATCC CRL-11372)
McCoy’s 5A medium	PAA	E82312-0025	for human osteosarcoma Saos-2 cells (ATCC HTB-85)
Antibiotics mixture (penicillin/streptomycin)	Sigma	P0781-100ML	100 U/mL each
G-418	Sigma	68168	0.3 mg/mL
FBS	Gibco	10270	10% for hFOB 1.19 and 15% for Saos-2
AA	Sigma	A-5960	50 µg/mL
ß-GP	Sigma	G9422-100G	7.5 mM
Bio-Gel HTP Gel	Bio-Rad	130-0420	for HA
FA			synthesized by us
CA			synthesized by us
Sodium phosphate buffer Na₂HPO₄/NaH₂PO₄ mixture	Sigma	S7907/S8282	0.1 M, pH 7.2
PBS			pH 7.0, prepared by us
AR-S in PBS	Sigma	A5533-25G	0.5 g/100 mL, pH 5.0
Collagenase type IA	Sigma	C2674	500 U/mL
SCL buffer			prepared by us
Deionized wather			produced by us
Ethanol	POCh	BA6480111	absolut 99.8% and solutions 25, 50, 75, 90%
Uranyl acetate in 50% ethanol	Polysciences Inc.	21447-25	0.25 g/10 mL
PD medium			pH 7.4, prepared by us
Fixation mixture (paraformaldehyde/glutaraldehyde)	Sigma	158127/G-6257	3%:1%
Post-fixation OsO₄	Sigma	75633	1%
LR White resin in ethanol	Polysciences Inc.	17411-MUNC 500g	1:2, 1:1, 100%
Acetone	CHEMPUR	111024800	pure
Tool
Cryogenic vials	Corning Inc.	430487	1.2 mL
Plastic Petri culture dishes	Falcon	353003	100 mm
Plastic tubes	Falcon	352096 and 352070	15 and 50 mL
Serological pipettes	Falcon and VWR	357521 and 612-3700	1 and 10 mL
Plastic microcentrifuge tubes	Sigma	Z688312 and Z628034	1.5 mL black and 2 mL transparent
Plastic tips	VWR	613-0364, 613-0239 and 613-1050	0.1-10 µL natural, 1-200 µL yellow and 200-1000 µL blue
Plastic racks	Light Labs	A-7055-Z, A-7053-C	green for tubes, orange for micro tubes and blue for TEM probes
Laminar Hera Save	Thermo Scientific Co.	KS12	HEPA filter (H14 according to DIN EN 1822)
Incubators Hera Cell	Thermo Scientific Co.	150	34°C for hFOB 1.19 and 37°C for Saos-2
Fume hood	POLON	WCS-2	for TEM stainings
Glass bottles	SIMAX	1632414501050 and 1632414501100	50 and 100 mL
Quartz glass tubes	SIMAX	638422010100	Ø 10 mm, L 100 mm
Pump	IBS Integra Biosciences	VACUSAFE comfort	for vacuum
Oven	Memmert	UNE 400	56°C
Porcelain multi-well plate	Rosenthal technik	229/12	12 wells
Glass beakers	SIMAX	632417010025	25 mL
Glass bottles	Pocord	DIN22	10 mL
Plastic box	Agar Scientific Ltd.		for darkness
Snap Fit Gelatin Capsules	Agar Scientific Ltd.	G3741	size 1
Formvar/Carbon 300 Mesh Ni grids in box	Agar Scientific Ltd.	S162N3	film on the shiny side
Silicon cell scraper	Sigma	SIAL0010-100EA	size 1.8/25 cm
Syringe with needle	BogMark	007	syringe 1 mL 40 U, needle 0.5 x 16
Syringe	Chirana	CH005L	5 mL
Centrifuge	MPW Medical Instruments	MPW-350R	130 x g and 500 x g
UV transluminator	UVP	M-20	for visible and UV light
Ultramicrotome	LKB	NOVA	700Å sections
Block holder	LKB	E6711	round shape
Diamond knife	DiATOME	Ultra 45°	size 3
Eyelash holder			bovine, prepared by us
Forceps	ROTH	2855.1	antistatic for grids
Spatulas set	ROTH	E286.1	antistatic for powders
Imaging
Inverted Light Microscope	Zeiss with Canon	AxioObserver Z1 equipped with PowerShot G9	Phase contrast, Transmitted light, 20 x objective, RGB filters
Transmission Electron Microscope	TEM Jeol Co. with Oxford Instruments and SiS-Olympus	JEM-1400 TEM equipped with full range INCA Energy Dispersive X-ray microanalysis (EDX) System and 11 Megapixel MORADA G2 camera	magnification 50,000X for TEM and 15,000X for STEM and EDX
Camera body and lenses	Nikon	Nikon D7100 Nikkor AF Micro 105 mm f/2.8D Nikkor AF-S 50 mm f/1.8G Nikkor AF 28 mm f/2.8D	for movie recordings
Microphone	MXL Mics	Tempo	for voice recordings

References

Buckwalter, J. A., Cooper, R. R. Bone structure and function. Instr. Course Lect. 36, 27-28 (1987).
Anderson, H. C. Molecular biology of matrix vesicles. Clin. Orthop. Relat. Res. 314, 266-280 (1995).
Anderson, H. C. Matrix vesicles and calcification. Curr Rheumatol. 5 (3), 222-226 (2003).
Bolean, M., Simão, A. M. S., Barioni, M. B., Favarin, B. Z., Sebinelli, H. G., Veschi, E. A., Janku, T. A. B., Bottini, M., Hoylaerts, M. F., Itri, R., Millán, J. L., Ciancaglini, P. Biophysical aspects of biomineralization. Biophys Rev. 9 (5), 747-760 (2017).
Bottini, M., Mebarek, S., Anderson, K. L., Strzelecka-Kiliszek, A., Bozycki, L., Simão, A. M. S., Bolean, M., Ciancaglini, P., Bandorowicz Pikula, J., Pikula, S., Magne, D., Volkmann, N., Hanein, D., Millán, J. L., Buchet, R. Matrix vesicles from chondrocytes and osteoblasts: Their biogenesis, properties, functions and biomimetic models. Biochim Biophys Acta. 1862 (3), 532-546 (2018).
Hessle, L., Johnson, K. A., Anderson, H. C., Narisawa, S., Sali, A., Goding, J. W., Terkeltaub, R., Millan, J. L. Tissue-nonspecific alkaline phosphatase and plasma cell membrane glycoprotein-1 are central antagonistic regulators of bone mineralization. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 99 (14), 9445-9449 (2002).
Garimella, R., Bi, X., Anderson, H. C., Camacho, N. P. Nature of phosphate substrate as a major determinant of mineral type formed in matrix vesicle-mediated in vitro mineralization: An FTIR imaging study. Bone. 38 (6), 811-817 (2006).
Thouverey, C., Bechkoff, G., Pikula, S., Buchet, R. Inorganic pyrophosphate as a regulator of hydroxyapatite or calcium pyrophosphate dihydrate mineral deposition by matrix vesicles. Osteoarthr. Cartil. 17, 64-72 (2009).
Terkeltaub, R. A. Inorganic pyrophosphate generation and disposition in pathophysiology. Am. J. Phys. 281 (1), 1-11 (2001).
Guicheux, J., Palmer, G., Shukunami, C., Hiraki, Y., Bonjour, J. P., Caverzasio, J. A novel in vitro culture system for analysis of functional role of phosphate transport in endochondral ossification. Bone. 27 (1), 69-74 (2000).
Yadav, M. C., Bottini, M., Cory, E., Bhattacharya, K., Kuss, P., Narisawa, S., Sah, R. L., Beck, L., Fadeel, B., Farquharson, C., Millán, J. L. Skeletal mineralization deficits and impaired biogenesis and function of chondrocyte-derived matrix vesicles in Phospho1(-/-) and Phospho1/Pi t1 double-knockout mice. J. Bone Miner. Res. 31 (6), 1275-1286 (2016).
Thouverey, C., Malinowska, A., Balcerzak, M., Strzelecka-Kiliszek, A., Buchet, R., Dadlez, M., Pikula, S. Proteomic characterization of biogenesis and functions of matrix vesicles released from mineralizing human osteoblast-like cells. J. Proteome. 74 (7), 1123-1134 (2011).
Wang, W., Xu, J., Kirsch, T. Annexin-mediated Ca2+ influx regulates growth plate chondrocyte maturation and apoptosis. J. Biol. Chem. 278 (6), 3762-3769 (2003).
Nollet, M., Santucci-Darmanin, S., Breuil, V., et al. Autophagy in osteoblasts is involved in mineralization and bone homeostasis. Autophagy. 10 (11), 1965-1977 (2014).
Boonrungsiman, S., Gentleman, E., Carzaniga, R., Evans, N. D., McComb, D. W., Porter, A. E., Stevens, M. M. The role of intracellular calcium phosphate in osteoblast-mediated bone apatite formation. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 109 (35), 14170-14175 (2012).
Genge, B. R., Wu, L. N., Wuthier, R. E. In vitro modeling of matrix vesicle nucleation: synergistic stimulation of mineral formation by annexin A5 and phosphatidylserine. J. Biol. Chem. 282 (36), 26035-26045 (2007).
Jahnen-Dechent, W., Schäfer, B., Ketteler, M., McKee, M. D. Mineral chaperones: a role for fetuin-A and osteopontin in the inhibition and regression of pathologic calcification. J. Mol. Med. (Berl). 86 (4), 379-389 (2008).
Suchanek, W., Yoshimura, M. Processing and properties of hydroxyapatite-based biomaterials for use as hard tissue replacement implants. J. Miner. Res. 13 (1), 94-117 (1998).
Pautke, C., Schieker, M., Tischer, T., Kolk, A., Neth, P., Mutschler, W., Milz, S. Characterization of osteosarcoma cell lines MG-63, Saos-2 and U-2 OS in comparison to human osteoblasts. Anticancer Res. 24 (6), 3743-3748 (2004).
Yen, M. -. L., Chien, C. -. C., Chiu, I. -. M., Huang, H. -. I., Chen, Y. -. C., Hu, H. -. I., Yen, B. L. Multilineage differentiation and characterization of the human fetal osteoblastic 1.19 cell line: a possible in vitro model of human mesenchymal progenitors. Stem Cells. 25 (1), 125-131 (2007).
Brittle, S. W., Foose, D. P., O’Neil, K. A., Sikon, J. M., Johnson, J. K., Stahler, A. C., Ryan, J. D., Higgins, S. R., Sizemore, I. E. A raman-based imaging method for characterizing the molecular adsorption and spatial distribution of silver nanoparticles to hydrated mineral surfaces. Environ Sci Technol. , (2018).
Liu, N., Wang, Y., Ge, F., Liu, S., Xiao, H. Antagonistic effect of nano-ZnO and cetyltrimethyl ammonium chloride on the growth of Chlorella vulgaris: Dissolution and accumulation of nano-ZnO. Chemosphere. 196, 566-574 (2018).
Tasbihi, M., Kočì, K., Troppová, I., Edelmannová, M., Reli, M., Čapek, L., Schomäcker, R. Photocatalytic reduction of carbon dioxide over Cu/TiO2 photocatalysts. Environ Sci Pollut Res Int. , (2017).
Chen, N. X., O’Neill, K. D., Chen, X., Moe, S. M. Annexin-Mediated Matrix Vesicle Calcification in Vascular Smooth Muscle Cells. J. Bone Miner. Res. 23 (11), 1798-1805 (2008).
Strzelecka-Kiliszek, A., Bozycki, L., Mebarek, S., Buchet, R., Pikula, S. Characteristics of minerals in vesicles produced by human osteoblasts hFOB 1.19 and osteosarcoma Saos-2 cells stimulated for mineralization. J. Inorg. Bioch. 171, 100-107 (2017).
Thouverey, C., Strzelecka-Kiliszek, A., Balcerzak, M., Buchet, R., Pikula, S. Matrix vesicles originate from apical membranę microvilli of mineralizing osteoblast-like Saos-2 cells. J. Cell. Biochem. 106 (1), 127-138 (2009).
Cazalbou, S., Eichert, D., Ranz, X., Drouet, C., Combes, C., Harmand, M. F., Rey, C. Ion exchanges in apatites for biomedical application. J. Mater. Sci. Mater. Med. 16 (5), 405-409 (2005).
Kraus, D. Consolidated data analysis and presentation using an open-source add-in for the Microsoft Excel® spreadsheet software. Med. Writ. 23 (1), 25-28 (2014).
Kawasaki, K., Buchanan, A. V., Weiss, K. M. Biomineralization in humans: making the hard choices in life. Annu. Rev. Genet. 43, 119-142 (2009).
Bonucci, E. Bone mineralization. Front. Biosci. 17, 100-128 (2012).
Veis, A., Dorvee, J. R. Biomineralization mechanisms: A new paradigm for crystal nucleation in organic matrices. Calcif. Tissue Int. 93 (4), 307-315 (2013).
Nudelman, F., Lausch, A. J., Sommerdijk, N. A., Sone, E. D. In vitro models of collagen biomineralization. J. Struct. Biol. 183 (2), 258-269 (2013).
Alliston, T. Biological regulation of bone quality. Curr. Osteoporos. Rep. 12 (3), 366-375 (2014).
Wang, W., Kirsch, T. Retinoic acid stimulates annexin-mediated growth plate chondrocyte mineralization. J. Cell Biol. 157 (6), 1061-1069 (2002).
Wang, W., Xu, J., Kirsh, T. Annexin V and terminal differentiation of growth plate chondrocytes. Exp. Cell Res. 305 (1), 156-165 (2005).

Play Video

PDF

DOI

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite This Article

Bozycki, L., Komiazyk, M., Mebarek, S., Buchet, R., Pikula, S., Strzelecka-Kiliszek, A. Analysis of Minerals Produced by hFOB 1.19 and Saos-2 Cells Using Transmission Electron Microscopy with Energy Dispersive X-ray Microanalysis. J. Vis. Exp. (136), e57423, doi:10.3791/57423 (2018).