JoVE Journal > Immunology and Infection
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
자동 번역
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
면역학 및 감염병학

الاتصال الجنسي من المثقبيات الأمريكية من الذكور والإناث إلى الأصحاب ساذج

Published: January 27, 2019
doi:
10.3791/57985
, , , , ,
1Chagas Disease Multidisciplinary Research Laboratory, Faculty of Medicine,University of Brasilia, 2Instituto Evandro Chagas

Summary

مثقبيه الكروزية وكيلاً لمرض شاغاس تنتج الالتهابات أعراض طويلة الأمد التي تتحول فجأة إلى الأمراض سريرياً المعترف بها. بروتوكول البحث التالية توضح دراسة المدى القصير وبائية القائم على الأسرة لكشف الكروزية ت. العدوى تنتقل جنسياً من الأصل إلى النسل.

Abstract

داء المثقبيات الأمريكي ينتقل إلى البشر بالبق triatomine عن طريق ابتلاع الأغذية الملوثة، بنقل الدم أو عن طريق الخطأ في المستشفيات والمختبرات البحثية. وباﻹضافة إلى ذلك، ينتقل العدوى مثقبيه الكروزية خلقيا من أم تشاجاسيك إلى نسلها، ولكن مساهمة الشريك الذكر للتلوث داخل الرحم غير معروف. وتوحي نتائج أعشاشها وكتل من amastigotes ومن trypomastigotes في الخلايا القراب المبيض وجونيابلاستس في التجويف الخصي تنتقل العدوى الكروزية. ت. . بروتوكول البحث هنا يعرض نتائج جمهرة الدراسة الأسرة يظهر الطفيلي الحمض النووي في خلايا الدم مثنوية وحيدات النوى وفي الأمشاج فرداني من البشر. وهكذا، أكدت ثلاث عينات بيولوجية مستقلة جمعها سنة واحدة وبصرف النظر أن ت الكروزية العدوى كانت تنتقل إلى ذرية. من المثير للاهتمام، المحددة جسم الكروزية ت. كان غائبا في معظم ذرية الأسرة التي تتحمل التسامح المناعية للمستضد الطفيلي. التسامح المناعي تجلى في الدجاج الصهر إلى الكروزية ت. بعد الأسبوع الأول من النمو الجنينية والكتاكيت التي فقست من البيض تلقيح السوطيات غير قادر على إنتاج الأجسام المضادة المحددة. وعلاوة على ذلك، أنزل تقطير المني البشري إينترابيريتونيلي أو في المهبل من السذاجة الفئران أسفرت عن amastigotes الكروزية. ت. في البربخ وأنبوب سيمينيفيروس، الاسهر وأنبوب الرحم مع عدم وجود التهابات ردود الفعل في أجهزة المناعة المميز للاستنساخ. تربية الكروزية. ت.-الفئران الذكور والإناث المصابة مع الأصحاب ساذجة أدت إلى اكتساب العدوى، التي أحيلت لاحقاً إلى الذرية. وبالتالي، يعتبر برنامج قوي التعليم والمعلومات والاتصالات يشمل السكان والمنظمات الاجتماعية اللازمة لمنع مرض شاغاس.

Introduction

بروتوزوا مثقبيه الكروزية تنتمي إلى عائلة تريبانوسوماتيداي يخضع لمراحل دورة الحياة تريبوماستيجوتي وأماستيجوتي في الثدييات المضيفين وموجود ابيماستيجوتيس في الحشرات ناقلات الأمراض (الرضوفي: Triatominae) القناة الهضمية وفي الثقافة أكسينيك. في العقود الأخيرة، أظهرت العديد من الدراسات وجود مرض شاغاس في البلدان في القارات الأربع تعتبر triatomine الشوائب الحرة1،2،3،،من45، 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13؛ تشتت المثقبيات الأمريكي يعزى في البداية إلى المهاجرين من أمريكا اللاتينية إلى نصف الكرة الشمالي، ولكن يمكن لم يعد رفض إمكانية أن بعض من حالات مرض شاغاس أصلي3،4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14-وقد تم المسند المصدر الذاتية يمكن التعرف عليها فقط من انتقال الكروزية. ت. نقل الأم تشاجاسيك الطفيلي إلى الذرية في حوالي 10% من حالات الحمل15؛ وظلت مساهمة الشريك الذكر بالتهابات في الرحم عن طريق السائل المنوي الدفقات غير المعترف بها.

قبل أكثر من قرن من الزمان ولاحظ المحققون16،17 داخل الخلايا الكروزية. ت. amastigotes في الخلايا القراب المبيض والجرثومية خط خلايا الخصيتين للحالات الحادة من مرض شاغاس. أعشاشها وكتل الكروزية. ت. trypomastigotes و amastigotes في خلايا القراب المبيض، وفي جونيابلاستس وفي التجويف الخصي (الشكل 1) للحالات المميتة الحاد مرض شاغاس تطوير امتياز الحصانة في أجهزة استنساخ في الغياب الالتهابات تتسرب18،19. في العقود الأخيرة، عدد قليل من الدراسات التجريبية قد أظهرت أعشاش أشكال الكروزية. ت. أماستيجوتي جولة في أنبوب سيمينيفيروس والبربخ، و الاسهر كذلك كما هو الحال في الرحم والأنابيب والمبيض خلايا القراب من الفئران المصابة حادة 120،،،من2122. وعلاوة على ذلك، من خلال دراسات الأسرة لتوثيق نقل بروتوزوا تم التحقق من الحمض النووي من مرضى داء شاغاس الأبوية لذريتهم، الحمض النووي الكروزية. ت. (ندنا) في الخلايا الجرثومية فرداني البشرية خط23، و ولوحظت في الدفقات تشاجاسيك الفئران24مراحل دورة حياة الطفيلي. هذه النتائج الاتفاق مع تقارير عن التسامح المناعي حققته الذرية الكروزية. ت.-إصابة المضيفين في حالة عدم وجود جسم محدد1،،من2526. بالإضافة إلى ذلك، التقارير الوبائية التي اقترح انتشار مرض شاغاس متوطن إلى سائر القارات3،4،5،6،7،8 ،،من910،11،،من1213 معتمدة الآن بالدراسات التجريبية التي تبين أن داء شاغاس يمكن أن تنتقل عن طريق الاتصال الجنسي1 . التحقيق الحالي ويعرض على بروتوكول دراسة الوبائية أسرة ويبين أن ت الكروزية العدوى ينتشر عن طريق الاتصال الجنسي.

Protocol

الإنسان ولجان بحوث الحيوان من “كلية الطب التابعة” لجامعة برازيليا وافق جميع الإجراءات مع البشر والحيوانات المختبرية، على التوالي، في بروتوكولات البحوث 2500.167567 و 10411 2011. وافقت “لجنة الأخلاقيات” العام مؤسسة مستشفى غاسبار فيانا (البروتوكول رقم 054/2009 وهذا 11163/2009) أشكال الموافقة الحرة للدراسة الم…

Representative Results

هدف هذا البحث، وفقا للبروتوكول، للكشف عن الحالات الحادة من مرض شاغاس بالامتحانات السريرية وعلم الطفيليات. عينات الدم الوريدي تعرضوا للفحص المجهري المباشر، والثقافة في المختبر لنمو الطفيلي. وأظهرت إحدى وعشرون حالة حادة من مرض شاغاس الكروزية. ت. في الدم. بروتوكول الب…

Discussion

هنا، نحن مناقشة بروتوكول بحث القائم على الأسرة أن الإجابة على مسألة ما إذا كان مرض شاغاس البشرية ينبع من يبلغ المنقولة الكروزية ت. الالتهابات. الدراسات المبكرة يمكن أن تقدم أدلة الجنسي انتقال العدوى الكروزية. ت. ، ربما نظراً لأن البيانات المتاحة والمعلومات المتعلقة بمرض شاغاس تم…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

نحن نعترف بالمرافق المختبرية والتعليقات الانتقادية Dourado إيزابيلا، كارلا أراوخو، و “ذكي غوميز” ومساعدة تقنية من برونو دالاجو ورفائيل أندرادي. ونحن مدينون للمؤسسة للنهوض بالعلوم (فابدف)، ومجلس البحوث الوطني، ووزارة العلوم والتكنولوجيا (التكنولوجيا)، والوكالة لتدريب الموارد البشرية، وزارة التربية والتعليم (الرؤوس/لي)، البرازيل، لدعم هذه التحقيقات.

Materials

BCIP and NBT redox system Sigma-Aldrich 681 451 001
Blood DNA Purification columns Amersham Biosciences 27-9603-01
d-ATP, [α-32P], 250 µCi.   Perkin Elmer   BLU012H
DNA, Solution Salt Fish Sperm AMRESCO 064-10G
dNTP Set, 100 mM Solutions GE Healthcare 28-4065-51
Eco RI Invitrogen 15202-021
Goat anti-human IgG- alkaline phosphatase conjugated Southern Biotech        2040-04
Goat anti-human IgG- FITC conjugated Biocompare MB5198020
Hybond – N+ nylon membrane GE Healthcare RPN303B
Hybridization oven Thomas Scientific 95-0031-02
Micro imaging software cell Sens software Olympus, Japan
Molecular probes labeling System Invitrogen 700-0030
Nsi I Sigma-Aldrich R5584 1KU
Plasmid Prep Mini Spin Kit GE Healthcare 28-9042-70
Plate reader  Bio-Tek GmBH 2015
Rabbit anti-chicken IgG-alkaline phosphatase conjugated Sigma-Aldrich A9171
Rabbit anti-chicken IgG-FITC conjugated Sigma-Aldrich F8888
Rabbit anti-mouse IgG- alkaline phosphatase conjugated Sigma Aldrich A2418 
Rabbit anti-mouse IgG-FITC conjugated Biorad MCA5787
Spin Columns for radio labeled DNA purification, Sephadex G-25, fine Sigma-Aldrich G25DNA-RO 
Taq DNA Polymerase Recombinant Invitrogen 11615-010
Thermal cycler system Biorad, USA 1709703
Vector Systems Promega A1380
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Araujo, P. F., et al. Sexual transmission of American trypanosomiasis in humans: a new potential pandemic route for Chagas parasites. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 112 (6), 437-446 (2017).
  2. Teixeira, A. R. L., Nitz, N., Bernal, F. M., Hetch, M. M. Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model. Journal of Visualized Experiments. (65), 3716 (2012).
  3. Kalil-Filho, R. Globalization of Chagas Disease Burden and New Treatment Perspectives. Journal of the American College of Cardiology. 66 (10), 1190-1192 (2015).
  4. Nunes, M. C. P., Dones, W., Morillo, A., Encina, J. J., Ribeiro, A. L. Chagas Disease: An Overview of Clinical and Epidemiological Aspects. Journal of the American College of Cardiology. 62 (9), 767-776 (2013).
  5. Pinazo, M. J., Gascon, J. Chagas disease: from Latin America to the world. Reports in Parasitology. 2015 (4), 7-14 (2015).
  6. Kessler, D. A., Shi, P. A., Avecilla, S. T., Shaz, B. H. Results of lookback for Chagas disease since the inception of donor screening at New York Blood Center. Transfusion. 53 (5), 1083-1087 (2013).
  7. Klein, N., Hurwitz, I. R. Globalization of Chagas Disease: A Growing Concern in Nonendemic Countries. Epidemiology Research International. , (2012).
  8. Pérez-Molina, J. A., Norman, F., López-Vélez, R. Chagas disease in non-endemic countries: epidemiology, clinical presentation and treatment. Current Infectious Diseases Report. 14 (3), 263-274 (2012).
  9. Hotez, P. J., et al. Chagas disease: "the new HIV/AIDS of the Americas". PLoS Neglected Tropical Diseases. 6, e1498 (2012).
  10. Schmunis, G. A., Yadon, Z. E. Chagas disease: a Latin American health problem becoming a world health problem. Acta Tropica. 115 (1-2), 14-21 (2010).
  11. Franco-Paredes, C., Bottazzi, M. E., Hotez, P. J. The Unfinished Public Health Agenda of Chagas Disease in the Era of Globalization. PLoS Neglected Tropical Diseases. 3 (7), e470 (2009).
  12. Teixeira, A. R. L., Vinaud, M., Castro, A. M. . Emerging Chagas Disease. In: Chagas Disease: – A Global Health Problem. 3, 18-39 (2009).
  13. Lee, B. Y., Bacon, K. M., Bottazzi, M. E., Hotez, P. J. Global economic burden of Chagas disease: a computational simulation model. Lancet Infectious Diseases. 13 (4), 342-348 (2013).
  14. Teixeira, A. R. L., Hecht, M. M., Guimaro, M. C., Sousa, A. O., Nitz, N. Pathogenesis of Chagas Disease: Parasite Persistence and Autoimmunity. Clinical Microbiology Review. 24 (3), 592-630 (2011).
  15. Murcia, L., et al. Risk factors and primary prevention of congenital Chagas disease in a nonendemic country. Clinical Infectious Diseases. 56 (4), 496-502 (2013).
  16. Chagas, C. New human trypanosomiasis. Morphology and lifecycle of Schizotrypanum cruzi, the cause of a new human disease. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 1, 159 (1909).
  17. Vianna, G. Contribution to the study of the Pathology of Chagas disease. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 3, 276 (1911).
  18. Teixeira, A. R. L., Roters, F., Mott, K. E. Acute Chagas disease. Gazeta Médica da Bahia. 3, 176-186 (1970).
  19. Teixeira, A. R. L., et al. Prevention and Control of Chagas Disease – An Overview. International STD Research, Reviews. 7 (2), 1-15 (2018).
  20. Rios, A., et al. Can sexual transmission support the enzootic cycle of Trypanosoma cruzi?. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 113 (1), 3-8 (2018).
  21. Lenzi, H. L., et al. Trypanosoma cruzi: compromise of reproductive system in acute murine infection. Acta Tropica. 71 (2), 117-129 (1998).
  22. Carvalho, L. O. P., et al. Trypanosoma cruzi and myoid cells from seminiferous tubules: Interaction and relation with fibrous components of extra cellular matrix in experimental Chagas’ disease. International Journal of Experimental Pathology. 90 (1), 52-57 (2009).
  23. Hecht, M. M., et al. Inheritance of DNA transferred from American trypanosomes to human hosts. PLoS One. 12, e9181 (2010).
  24. Alarcon, M., et al. Presencia de epimastigotes de Trypanosoma cruzi en el plasma seminal de ratones con infección aguda. Boletín Malariología y Salud Ambiental. 51, 237 (2011).
  25. Teixeira, A. R. L., et al. Trypanosoma cruzi in the Chicken Model: Chagas-Like Heart Disease in the Absence of Parasitism. PLoS Neglected Tropical Diseases. 5 (3), e1000 (2011).
  26. Guimaro, M. C., et al. Inhibition of Autoimmune Chagas-Like Heart Disease by Bone Marrow Transplantation. PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (12), e3384 (2014).
  27. Oliveira, C. I., et al. Leishmania braziliensis isolates differing at the genome level display distinctive features in BALB/c mice. Microbes and Infection. 6 (11), 977-984 (2004).
  28. Mendes, D. G., et al. Exposure to mixed asymptomatic infections with Trypanosoma cruzi, Leishmania braziliensis and Leishmania chagasi in the human population of the greater Amazon. Tropical Medicine, International Health. 12, 629 (2007).
  29. Moser, D. R., Kirchhoff, L. V., Donelson, J. E. Detection of Trypanosoma cruzi by DNA amplification using the polymerase chain reaction. Journal of Clinical Microbiology. 27 (7), 1477-1482 (1989).
  30. Da Silva, A. R. . Sexual transmission of Trypanosoma cruzi in mus musculus [MsD thesis]. , (2013).
  31. Ribeiro, M., et al. Can sexual transmission support the enzootic cycle of Trypanosoma cruzi?. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 113 (1), 3-8 (2018).
  32. Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. Actively acquired tolerance of foreign cells. Nature. 172 (4379), 603-606 (1953).
  33. Burnet, F., Fenner, F. . The production of Antibodies. , (1949).
  34. Hasek, M. Parabiosis of birds during their embryonic development. Chekhoslovatskaia Biology. 2 (1), 29-31 (1953).
  35. Coura, J. R., Junqueira, A. C. V., Fernades, O., Valente, S. A., Miles, M. A. Emerging Chagas Disease in Amazonian Brazil. Trends Parasitology. Trends Parasitology. 18 (4), 171-176 (2002).
  36. Teixeira, A. R. L., et al. Emerging Chagas disease: Trophic network and cycle of transmission of Trypanosoma cruzi from palm trees in the Amazon. Emerging Infectious Diseases. 7 (1), 100112 (2001).
  37. Hazebroek, M., Dennert, R., Heymans, S. Idiopathic dilated cardiomyopathy: possible triggers and treatment strategies. Netherland Heart Journal. 20 (7-8), 332-335 (2012).
  38. Arimura, T., Hayashi, T., Kimura, A. Molecular etiology of idiopathic cardiomyopathy. Acta Myologica. 26 (3), 153-158 (2007).
  39. Dec, W. G., Fuster, V. Idiopathic Dilated Cardiomyopathy. New England Journal of Medicine. 33, 1564-1575 (1994).
  40. Niederkorn, J. Y. See no evil, hear no evil, do no evil: the lessons of immune privilege. Nature Immunology. 7 (4), 354-359 (2006).
  41. Smith, B. E., Braun, R. E. Germ cell migration across Sertoli cell tight junctions. Science. 338 (6118), 798-802 (2012).
  42. Garth, A., Wilbanks, J., Streilein, W. Fluids from immune privileged sites endow macrophages with the capacity to induce antigen-specific immune deviation via a mechanism involving transforming growth factor-β. European Journal of Immunology. 22 (4), 1031-1036 (1992).
  43. Meng, J., Anne, R., Greenlee, C., Taub, J., Braun, R. E. Sertoli Cell-Specific Deletion of the Androgen Receptor Compromises Testicular Immune Privilege in Mice. Biology of Reproduction. 85 (2), 254-260 (2011).
  44. Fujisaki, J., et al. In vivo imaging of Treg cells providing immune privilege to the haematopoietic stem-cell niche. Nature. 474 (7350), 216-219 (2011).
  45. Wood, K. J., Sakaguchi, S. Regulatory T cells in transplantation tolerance. Nature Review Immunology. 3 (3), 199-210 (2003).

Tags

Keywords: Trypanosoma CruziChagas DiseaseSexual TransmissionBlood SamplesCell CulturePCR AnalysisDNA Extraction
check_url/kr/57985?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Almeida, A. B., Araújo, P. F., Bernal, F. M., Rosa, A. d. C., Valente, S. A., Teixeira, A. R. Sexual Transmission of American Trypanosomes from Males and Females to Naive Mates. J. Vis. Exp. (143), e57985, doi:10.3791/57985 (2019).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image