Trasmissione sessuale dell'americano Trypanosomes da maschi e femmine ai compagni di Naive
Summary
L’agente di Trypanosoma cruzi di malattia di Chagas produce infezioni asintomatiche di lunga durata che improvvisamente trasformarsi in patologia clinicamente riconosciuta. Il seguente protocollo di ricerca descrive uno studio epidemiologico a breve termine basati sulla famiglia per svelare il T. cruzi infezione sessualmente trasmessa dal padre alla progenie.
Abstract
Tripanosomiasi americana è trasmesso agli esseri umani da bug triatomine attraverso l’ingestione di alimenti contaminati, da trasfusioni di sangue o accidentalmente in ospedali e laboratori di ricerca. Inoltre, l’infezione di Trypanosoma cruzi è trasmesso congenitamente da una madre chagasic alla prole, ma il contributo del partner maschile alla contaminazione nell’utero è sconosciuto. I risultati di nidi e ciuffi di amastigoti e tripomastigoti nelle cellule del theca dell’ovaia, nel goniablasts e nel lume del tubulo seminifero suggeriscono che T. cruzi infezioni vengono trasmesse sessualmente. Il protocollo di ricerca questo documento presenta i risultati di una popolazione di studio della famiglia risultati parassita nucleare del DNA in cellule mononucleari del sangue diploide e i gameti aploidi dei soggetti umani. Così, tre indipendenti campioni biologici raccolti un anno parte confermato che T. cruzi infezioni sessualmente sono stati trasmessi alla progenie. Interessante, lo specifico anticorpo di T. cruzi era assente nella maggior parte della famiglia progenie che portava la tolleranza immunitaria all’antigene di parassita. Tolleranza immunologica è stata dimostrata in refrattario alla T. cruzi di pollo dopo la prima settimana di sviluppo embrionale, e pulcini nati da uova inoculate flagellati erano in grado di produrre l’anticorpo specifico. Inoltre, l’instillazione dello sperma umano eiacula intraperitonealmente o nella vagina di topi ingenuo ha reso T. cruzi amastigoti nel epididimo, tubulo seminifero, deferenti e tuba uterina con un’assenza di infiammatoria reazioni negli organi immuni privilegiati della riproduzione. L’allevamento di T. cruzi-infetti topi maschi e femmine con i compagni di ingenuo ha provocato acquisizione delle infezioni, che più successivamente sono stati trasmessi alla progenie. Di conseguenza, un robusto programma di formazione, informazione e comunicazione che coinvolge la popolazione e le organizzazioni sociali è ritenuto necessario per prevenire la malattia di Chagas.
Introduction
Il protozoo parassita Trypanosoma cruzi appartenente alla famiglia Trypanosomatidae subisce le fasi del ciclo di vita trypomastigote e amastigote in ospiti mammiferi ed esiste come epimastigotes nel vettore di insetto (Reduviid: eziologico) dell’intestino e in coltura. Negli ultimi decenni, diversi studi hanno dimostrato la presenza di malattia di Chagas in paesi su quattro continenti considerato bug triatomine gratis1,2,3,4,5, 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13; la dispersione dei tripanosomi americane inizialmente è stata attribuita agli immigrati latino-americani all’emisfero nordico, ma la possibilità che alcuni sono casi autoctoni di malattia di Chagas non può essere negata3,4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14. la fonte endogena solo riconoscibile di trasmissione di T. cruzi è stata attribuita al trasferimento della madre chagasic del parassita alla prole in circa il 10% delle gravidanze15; contributo del partner maschile nell’utero infezioni attraverso lo sperma eiacula è rimasto non riconosciuto.
Più di un secolo fa, gli investigatori16,17 osservato intracellulare T. cruzi amastigoti nelle cellule del theca dell’ovaia e nel germe linea cellule dei testicoli dei casi acuti di malattia di Chagas. I nidi e ciuffi di T. cruzi tripomastigoti e amastigoti in cellule del theca dell’ovaia, in goniablasts e nel lume del tubulo seminifero (Figura 1) di casi di malattia di Chagas acuti mortali sviluppano privilegio immune negli organi di riproduzione in assenza dell’infiammatorio si infiltra in18,19. Negli ultimi decenni, alcuni studi sperimentali hanno dimostrato nidi delle forme rotonde amastigote di T. cruzi nel tubulo seminifero, epididimo e dotto deferente anche come in utero, ovaia e tubi di cellule della teca di acutamente infettate topi 1,20,21,22. Inoltre, nel corso di studi della famiglia per documentare il trasferimento di protozoo il DNA mitocondriale parentale Chagas pazienti ai loro discendenti, T. cruzi DNA nucleare (nDNA) è stato verificato in germinale aploide umana linea cellule23, e fasi di ciclo di vita del parassita sono stati osservati nell’eiacula di chagasic topi24. Questi risultati sono in accordo i rapporti sulla tolleranza immunitaria conseguito con la progenie di T. cruzi –infettati padroni di casa in assenza di anticorpo specifico1,25,26. Inoltre, rapporti epidemiologici che ha suggerito la diffusione della malattia di Chagas endemica per gli altri continenti3,4,5,6,7,8 ,9,10,11,12,13 sono ora supportati dagli studi sperimentali mostrano che la malattia di Chagas possa essere trasmessa sessualmente1 . La ricerca attuale presenta un protocollo di studio epidemiologico della famiglia e mostra che T. cruzi infezione si propaga attraverso i rapporti sessuali.
Protocol
Representative Results
Discussion
Qui, discutiamo un protocollo di ricerca basate sulla famiglia che ha risposto alla domanda di se la malattia di Chagas umana deriva dalla sessualmente trasmissibili intraspecie T. cruzi infezioni. Primi studi non potevano fornire la prova della trasmissione sessuale di T. cruzi infezioni, probabilmente perché i dati disponibili e le informazioni sulla malattia di Chagas sono stati ottenuti separatamente dai singoli3,4, <sup class="…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Riconosciamo le strutture di laboratorio e i commenti critici di Izabela Dourado, Carla Araujo e Gomes intelligente e l’assistenza tecnica di Bruno Dalago e Rafael Andrade. Siamo grati alla Fondazione per l’avanzamento di scienza (FAPDF), il Consiglio nazionale delle ricerche, Ministero della scienza e tecnologia (CNPq/MCT) e l’Agenzia per la formazione delle risorse umane, Ministero della pubblica istruzione (CAPES / ME), Brasile, per il supporto di questi indagini.
Materials
| BCIP and NBT redox system | Sigma-Aldrich | 681 451 001 | |
| Blood DNA Purification columns | Amersham Biosciences | 27-9603-01 | |
| d-ATP, [α-32P], 250 µCi. | Perkin Elmer | BLU012H | |
| DNA, Solution Salt Fish Sperm | AMRESCO | 064-10G | |
| dNTP Set, 100 mM Solutions | GE Healthcare | 28-4065-51 | |
| Eco RI | Invitrogen | 15202-021 | |
| Goat anti-human IgG- alkaline phosphatase conjugated | Southern Biotech | 2040-04 | |
| Goat anti-human IgG- FITC conjugated | Biocompare | MB5198020 | |
| Hybond – N+ nylon membrane | GE Healthcare | RPN303B | |
| Hybridization oven | Thomas Scientific | 95-0031-02 | |
| Micro imaging software cell Sens software | Olympus, Japan | ||
| Molecular probes labeling System | Invitrogen | 700-0030 | |
| Nsi I | Sigma-Aldrich | R5584 1KU | |
| Plasmid Prep Mini Spin Kit | GE Healthcare | 28-9042-70 | |
| Plate reader | Bio-Tek GmBH | 2015 | |
| Rabbit anti-chicken IgG-alkaline phosphatase conjugated | Sigma-Aldrich | A9171 | |
| Rabbit anti-chicken IgG-FITC conjugated | Sigma-Aldrich | F8888 | |
| Rabbit anti-mouse IgG- alkaline phosphatase conjugated | Sigma Aldrich | A2418 | |
| Rabbit anti-mouse IgG-FITC conjugated | Biorad | MCA5787 | |
| Spin Columns for radio labeled DNA purification, Sephadex G-25, fine | Sigma-Aldrich | G25DNA-RO | |
| Taq DNA Polymerase Recombinant | Invitrogen | 11615-010 | |
| Thermal cycler system | Biorad, USA | 1709703 | |
| Vector Systems | Promega | A1380 |
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