ラットおよびマウスの Circumlimbal 縫合による緑内障のモデル
Summary
慢性的な高眼圧症は、ラットおよびマウス、緑内障と網膜神経節細胞の構造と機能の劣化につながる circumlimbal 縫合を適用することによって誘導されます。
Abstract
Circumlimbal 縫合は、慢性的な眼圧 (IOP) 緑内障のよく知られている危険因子を高めることによって齧歯動物で実験的緑内障を誘発するテクニックです。このプロトコルは、長い期のラットと c57bl/6 マウスにこの手法を順を追って示します。全身麻酔下で「巾着」縫合糸は結膜、赤道周りや目の角膜の後ろ側に適用されます。仲間の目は、未処理のコントロールとして機能します。ラットの 8 週間と 12 週間のマウスの時代、我々 の研究期間にわたって IOP は上昇残った意識動物局所麻酔なしでリバウンド トノメトリで定期的に測定されました。両種で縫合の目は網膜機能の内部優遇の網膜機能不全と一致を示した。光干渉断層計は、網膜神経線維層の選択的な間伐を示した。断面を見つけたラット網膜組織減少神経節細胞層の細胞密度が他の細胞の層に変化はないです。フラット マウント マウス網膜神経節細胞特異的マーカー (RBPMS) と染色性神経節の細胞の損失を確認しました。Circumlimbal 縫合はシンプル、最低限ラットおよびマウスの神経節細胞傷害につながる眼圧を誘導するために侵襲的で費用効果の高い方法です。
Introduction
動物モデルでは、携帯の実験室調査のための重要なプラットフォーム潜在的な治療上の介在を評価する基になる緑内障の病因、同様の処理を提供します。いくつかの誘導型モデルは、持続的な眼圧 (IOP) 上昇、緑内障の最も重要なリスク因子を生成する開発されています。眼圧を高めるに適用されている方法があります:1レーザー光凝固小柱網2の輪部静脈3、およびように物質の眼注射の静脈の上強膜における高張生理食塩水注入ゴースト赤い血液細胞4、ミクロ粒子のニキビトリートメント5,6と粘弾性エージェント7。それぞれの方法には、利点と限界があります。
外傷、炎症、メディアの混濁など最小限の合併症との病気プロセスを模倣しては、緑内障のための良いモデル。これらの合併症は、眼圧上昇を誘導するための手順と頻繁に関連付けられる、結果の解釈を混同することができます。たとえば、前房穿刺異物が起きない場合でも示されているトラウマと典型的な緑内障性変化8,9の代表ではない炎症を起こす。、炎症を避けることの重要性だけでなく生体内イメージングと疾患の進行をモニターする電気生理学を容易に光学的透明度を維持します。これらの合併症が病気の調査に影響を与えるどの程度まで明確ではありませんがモデルの誘導中に目を貫通しないようにするより良いことがあります。Circumlimbal 縫合アプローチ地球の侵入を回避し、生体内で網膜の構造と機能の縦断的評価が容易になります。もっと重要なは、このモデルは必要に応じて縫合の除去によって眼圧を基準値に戻りますその容量で以前のものとは異なります。IOP 正規化は細胞を調査に役立つかもしれないし、分子相関可逆・不可逆的な神経節の細胞傷害10、11,12,13,14。
モデル誘導する手法について説明します。ラットおよびマウスのこのモデルによる網膜の損傷の評価の場合15,16,17,18,19に詳しく別の場所で見つけることができます。
Protocol
すべての実験手順は、オーストラリア国立保健医療研究評議会によって設定の科学的な目的のためケアと動物の使用のためオーストラリアのコード練習で行われました。ハワード Florey 研究所動物倫理委員会から倫理が承認された (承認番号 13 044 UM と 13 068 UM ラットとマウス、それぞれ)。 1. 意識下ラットにおける眼圧測定 研究室のリバウンド眼圧計をラットの設…
Representative Results
ラット18とマウス16次の結果以前に報告されている、ここでまとめます。Circumlimbal 縫合は、ラットおよびマウス (図 2) の眼圧上昇の同様のパターンを作り出した。簡単な IOP スパイク、ラットまで 58.1 ± 2.7 mmHg とマウスで 38.7 ± 2.2 mmHg は縫合処理の直後に発見されました。ラットでは、IOP の大きさは 44 ± 6 mmHg …
Discussion
Circumlimbal 縫合は、慢性的な高眼圧症の新しいモデルです。元代表の結果が供給された16,18の研究に加えて、最近研究15,23,24,25 の数のこの動物モデルを利用されています。 ,26。これらの以前のレポート間で比較メソッドがモデ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は国立保健医療研究評議会オーストラリアのプロジェクト助成金 (1046203)、オーストラリアの研究評議会未来フェローシップ (FT130100338) によって資金を供給します。
Materials
| normal saline | Baxter International Inc | AHB1323 | Maintain corneal hydration during surgery |
| Chlorhexadine 0.5% | Orion Laboratories | 27411, 80085 | Disinfection of surgical instrument |
| Isoflurane 99.9% | Abbott Australasia Pty Ltd | CAS 26675-46-7 | Proprietory Name: Isoflo(TM) Inhalation anaaesthetic. Pharmaceutical-grade inhalation anesthetic mixed with oxygen gas for suture procedure |
| ocular lubricant | Alcon Laboratories | 1618611 | Proprietory Name: Genteal, ocular lubricant to keep the other eye moist |
| Needle holder (microsurgery) | World Precision Instruments | 555419NT | To hold needle during ocular surgery |
| Proxymetacaine 0.5% | Alcon Laboratories | CAS 5875-06-9 | Topical ocular analgesia |
| Scissors (microsurgery) | World Precision Instruments | 501232 | To cut excessive suture stump during ligation |
| Surgical drape | Vital Medical Supplies | GM29-612EE | Ensure sterile enviornment during surgery |
| Suture needle for rats (microsurgery) | Ninbo medical needles | 151109 | 8-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm |
| Suture needle for mice (microsurgery) | Ninbo medical needles | 160905 | 10-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm |
| Tweezers (microsurgery) | World Precision Instruments | 500342 | Manipulate tissues during ocular surgery |
| rebound tonometer | TONOLAB, iCare, Helsinki, Finland | TV02 | for intraocular pressure monitoring |
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Cite This Article
He, Z., Zhao, D., van Koeverden, A. K., Nguyen, C. T., Lim, J. K. H., Wong, V. H. Y., Vingrys, A. J., Bui, B. V. A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice. J. Vis. Exp. (140), e58287, doi:10.3791/58287 (2018).