쥐와 쥐에 Circumlimbal 봉합에 의해 유도 된 녹 내장의 모델

Summary

만성 안구 고혈압 쥐와 쥐, 일치 녹 내장 망막 신경 절 세포의 기능 및 구조 저하로 이어지는 circumlimbal 봉합을 적용 하 여 유도 된다.

Abstract

Circumlimbal 봉합 만성 안구 내부 압력 (IOP), 녹 내장에 대 한 잘 알려진 위험 요소를 높이기에 의해 설치류의 실험 녹 내장을 유발 하는 기술 이다. 이 프로토콜에서는 긴 에반스 쥐 및 C57BL/6 쥐에이 기술에 대 한 단계별 가이드를 보여 줍니다. 일반 마 취, “지갑-문자열” 봉합 결, 적도 주위와 눈의 limbus 뒤에 적용 됩니다. 동료 눈 치료 컨트롤 역할을 합니다. 우리의 연구는 쥐에 대 한 8 주와 12 주 마우스의 기간의 기간 동안 IOP 리바운드 tonometry 국 소 마 취 없이 의식이 있는 동물에 의해 정기적으로 측정 된 높은, 남아. 두 종에서 sutured 눈 보여주었다 electroretinogram 기능을 우선 내부 망막 장애와 일치. 광학 일관성 단층 촬영 망막 신경 섬유 층의 선택적 숱이 보였다. 조직학 발견 횡단면에 쥐 망막의 신경 절 세포 층에 세포 밀도 하지만 다른 세포 층에 변화가 감소. 신경 절 세포 특정 표시 (RBPMS)와 함께 평면 탑재 마우스 retinae의 얼룩 ganglion 셀 손실 확인. Circumlimbal 봉합은 간단한, 최소한 침략 적이 고 비용 효율적인 방법으로 쥐 및 쥐에서 신경 절 세포 상해에 이르게 눈의 고혈압을 유발 하.

Introduction

동물 모델 평가 잠재적인 치료 내정간섭으로 기본 녹 병, 잘을 처리 하는 세포의 실험실 조사에 대 한 중요 한 플랫폼을 제공 합니다. 여러 모델을 유도할 수 있는 지속적인된 intraocular 압력 (IOP) 상승, 녹 내장에 대 한 가장 중요 한 위험 요소를 생산 하기 위해 개발 되었습니다. IOP 상승에 적용 된 방법은 다음과 같습니다: episcleral에 고 식 염 수 주입 혈관¹, 레이저 photocoagulation 배수 채널² 의 또는 limbal 혈관³및 intracameral와 같은 물질의 주입 빨간 유령 혈⁴, microbeads^5,6 , 점 탄성 요원⁷. 각 방법의 장점과 한계는 있습니다.

녹 내장에 대 한 좋은 모델 외상, 염증 및 미디어 불투명도 등 최소한의 합병증과 질병 과정을 모방 해야 합니다. 이러한 합병증 IOP 상승, 유도 하는 데 사용 하는 절차와 자주 연결 되 고 결과의 해석을 혼동 수 있습니다. 예를 들어 paracentesis 앞쪽 챔버의 이물질은 도입 되지, 하는 경우에 표시 되었습니다 외상 및 염증의 전형적인 glaucomatous 변경^8,9은 아닙니다 원인. 염증 방지의 중요성 뿐만 아니라 vivo에서 이미징 및 질병의 진행을 모니터링 하는 생리학 용이 광학 선명도 유지. 이러한 합병증 질환 조사, 영향을 미칠 수 있지만 그것은 어느 정도까지 불분명 모델 유도 하는 동안 눈을 관통 하지 않도록 더 있을 수 있습니다. Circumlimbal 봉합 접근 세계의 침투를 방지 하 고 망막의 구조와 기능의 비보에 경도 평가 용이 하 게. 더 중요 한 것은,이 모델은 필요할 때 봉합의 제거에 의해 초기 계획 값을 IOP를 반환 에서 이전 그들에서 다릅니다. 되돌릴 수와 돌이킬 수 없는 신경 절의 분자 상호 세포 상해^{10,11,12,,1314}그리고 IOP 정규화 세포를 공부 하는 데 유용 수 있습니다.

이 문서는 모델 유도 대 한 기술에 초점을 맞추고. 쥐와 쥐에이 모델에 의해 유도 된 망막 상해의^{15,,1617,,1819}자세히 다른 곳에서 찾을 수 있습니다.

Protocol

모든 실험 절차는 과학적 목적, 호주에서 국민 건강 및 의료 연구 위원회에 의해 설정에 대 한 관심과 동물의 사용에 대 한 호주 코드 연습에 따라 실시 했다. 하 워드 Florey 연구소 동물 윤리 위원회에서 윤리 승인을 얻은 (승인 번호 13-044-UM 그리고 13-068-음 쥐와 생쥐, 각각). 1. 안 구내 압력 측정 의식 쥐에 실험실 리바운드 tonometer 쥐 설정으로 설정 합니다. 진정 동물을 …

Representative Results

쥐18 및 마우스16 다음 결과 이전에 보고 된 고 여기 요약 된다. Circumlimbal 봉합 사 생산 IOP 상승 쥐와 생쥐 (그림 2)에서 비슷한 패턴. 간단한 IOP 스파이크, 최대 58.1 ± 2.7 mmHg 쥐에서와 쥐, 38.7 ± 2.2 mmHg 봉합 수술 후 즉시 발견 되었다. 쥐, IOP 크기 3와 24 시간, 각각15에 44 ± 6 mmHg 그리고 32 ± 2 mm Hg, 수 ?…

Discussion

Circumlimbal 봉합 만성 눈의 고혈압의 새로운 모델입니다. 연구는 대표적인 결과 공급된^16,18, 뿐만 아니라이 동물 모델은 최근 연구^{15,,2324,25의 수에 이용 되어 ,26}. 이러한 이전 보고서에 걸쳐 비교는 방법은 모델 유도 동안 IOP 상승, ?…

Materials

normal saline	Baxter International Inc	AHB1323	Maintain corneal hydration during surgery
Chlorhexadine 0.5%	Orion Laboratories	27411, 80085	Disinfection of surgical instrument
Isoflurane 99.9%	Abbott Australasia Pty Ltd	CAS 26675-46-7	Proprietory Name: Isoflo(TM) Inhalation anaaesthetic. Pharmaceutical-grade inhalation anesthetic mixed with oxygen gas for suture procedure
ocular lubricant	Alcon Laboratories	1618611	Proprietory Name: Genteal, ocular lubricant to keep the other eye moist
Needle holder (microsurgery)	World Precision Instruments	555419NT	To hold needle during ocular surgery
Proxymetacaine 0.5%	Alcon Laboratories	CAS 5875-06-9	Topical ocular analgesia
Scissors (microsurgery)	World Precision Instruments	501232	To cut excessive suture stump during ligation
Surgical drape	Vital Medical Supplies	GM29-612EE	Ensure sterile enviornment during surgery
Suture needle for rats (microsurgery)	Ninbo medical needles	151109	8-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm
Suture needle for mice (microsurgery)	Ninbo medical needles	160905	10-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm
Tweezers (microsurgery)	World Precision Instruments	500342	Manipulate tissues during ocular surgery
rebound tonometer	TONOLAB, iCare, Helsinki, Finland	TV02	for intraocular pressure monitoring