Ein Modell des Glaukoms induziert durch Circumlimbal Naht bei Ratten und Mäusen
Summary
Chronische okulärer Hypertension wird induziert durch die Anwendung einer Circumlimbal Naht bei Ratten und Mäusen, was zu funktionellen und strukturellen Verschlechterung der retinalen Ganglienzellen, die konsistent mit Glaukom.
Abstract
Die Circumlimbal Naht ist eine Technik zur Induktion experimentelle Glaukom bei Nagetieren durch chronisch hochziehen intraokulare Druck (IOP), ein bekannter Risikofaktor für Glaukom. Dieses Protokoll zeigt Schritt für Schritt diese Technik bei langen Evans Ratten und Mäusen C57BL/6. Unter Vollnarkose wird ein “tabaksbeutelnaht” auf die Bindehaut, rund um den Äquator und hinter dem Limbus des Auges angewendet. Das andere Auge dient als einer unbehandelten Kontrolle. Über die Dauer unserer Studie, die einen Zeitraum von 8 Wochen für Ratten und Mäuse 12 Wochen war, blieb IOP erhöhten, Rebound Tonometrie in bewusste Tiere ohne topische Anästhesie regelmäßig gemessen. In beiden Arten zeigte die genähten Augen Elektroretinogramm Features entsprechen bevorzugte innere retinalen Dysfunktion. Optische Kohärenztomographie zeigte selektive Ausdünnung der retinalen nervenfaserschicht. Histologie der Netzhaut Ratte im Querschnitt gefunden reduziert Zelldichte in das Ganglion Zellschicht, aber keine Änderung in anderen zellulären Ebenen. Färbung der Wohnung montiert Maus Netzhaut mit einem Ganglion Zelle spezifische Marker (RBPMS) bestätigt Ganglion Zellverlust. Die Circumlimbal Naht ist eine einfache, minimal invasive und kostengünstigen Weg zur okulären Hypertension induzieren, der zum Ganglion Zelle Verletzung bei Ratten und Mäusen führt.
Introduction
Tiermodelle zur Verfügung stellen, eine wichtige Plattform für Laboruntersuchung der zellulären Prozesse zugrunde liegenden Glaukom-Pathogenese, sowie über mögliche therapeutische Interventionen zu bewerten. Mehreren induzierbaren Modelle wurden entwickelt, um nachhaltige intraokulare Druck (IOP) Höhe, der wichtigste Risikofaktor für Glaukom zu produzieren. Methoden, die angewendet wurden, um IOP zu erheben sind: hypertone Kochsalzlösung Injektion in Augenhaut Adern1, Laser-Photokoagulation der trabekuläre Geflecht2 oder des limbischen Adern3und intrakameraler Injektion von Substanzen wie Gespenst rote Blutkörperchen4, Microbeads5,6 und Viskoelastische Agenten7. Jeder dieser Ansätze hat seine Vorteile und Einschränkungen.
Ein gutes Modell für Glaukom sollte den Krankheitsprozess mit minimalen Komplikationen wie Trauma, Entzündung und Medien linsentrübungen imitieren. Diese Komplikationen sind häufig verbunden mit den Verfahren verwendet, um IOP Höhe zu induzieren und Interpretation der Ergebnisse verwirren können. Z. B. Punktion der Vorderkammer, sogar wenn Fremdstoffe nicht eingeführt werden, hat sich gezeigt, Trauma und Entzündungen, die nicht repräsentativ für typische glaukomatösen Änderung8,9ist zu verursachen. Neben der Bedeutung der Vermeidung von Entzündungen erleichtert die Pflege optischen Klarheit in Vivo Imaging und Elektrophysiologie, Fortschreiten der Krankheit zu überwachen. Obwohl es unklar, inwieweit ist diese Komplikationen beeinträchtigen Krankheit Untersuchungen, es kann besser sein, vermeiden durchdringen das Auge während Modell Induktion. Der Circumlimbal Naht Ansatz verhindert Eindringen von der ganzen Welt und erleichtert in Vivo longitudinalen Beurteilung der Netzhaut Struktur und Funktion. Noch wichtiger ist, unterscheidet sich dieses Modell von vorherigen in seiner Fähigkeit, IOP, Baseline-Werte durch Entfernung des Nahtmaterials bei Bedarf zurück. IOP Normalisierung möglicherweise hilfreich für die Erforschung der zellulären und molekularen Korrelate des reversiblen und irreversiblen Ganglion Zelle Verletzung10,11,12,13,14.
Dieser Artikel konzentriert sich auf die Technik für das Modell Induktion. Charakterisierung der retinalen Schädigung induziert durch dieses Modell bei Ratten und Mäusen finden Sie an anderer Stelle ausführlicher15,16,17,18,19.
Protocol
Representative Results
Discussion
Die Circumlimbal Naht ist ein neues Modell der chronischen okuläre Hypertension. Zusätzlich zu den Studien, aus denen die repräsentativen Ergebnisse aus der Region16,18sind, ist dieses Tiermodell verwendet worden in einer Reihe von aktuellen Studien15,23,24,25 ,26. Vergleich über diese früheren B…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wird von National Health und Medical Research Council of Australia Projekt Grant (1046203), Australian Research Council Zukunft Fellowship (FT130100338) finanziert.
Materials
| normal saline | Baxter International Inc | AHB1323 | Maintain corneal hydration during surgery |
| Chlorhexadine 0.5% | Orion Laboratories | 27411, 80085 | Disinfection of surgical instrument |
| Isoflurane 99.9% | Abbott Australasia Pty Ltd | CAS 26675-46-7 | Proprietory Name: Isoflo(TM) Inhalation anaaesthetic. Pharmaceutical-grade inhalation anesthetic mixed with oxygen gas for suture procedure |
| ocular lubricant | Alcon Laboratories | 1618611 | Proprietory Name: Genteal, ocular lubricant to keep the other eye moist |
| Needle holder (microsurgery) | World Precision Instruments | 555419NT | To hold needle during ocular surgery |
| Proxymetacaine 0.5% | Alcon Laboratories | CAS 5875-06-9 | Topical ocular analgesia |
| Scissors (microsurgery) | World Precision Instruments | 501232 | To cut excessive suture stump during ligation |
| Surgical drape | Vital Medical Supplies | GM29-612EE | Ensure sterile enviornment during surgery |
| Suture needle for rats (microsurgery) | Ninbo medical needles | 151109 | 8-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm |
| Suture needle for mice (microsurgery) | Ninbo medical needles | 160905 | 10-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm |
| Tweezers (microsurgery) | World Precision Instruments | 500342 | Manipulate tissues during ocular surgery |
| rebound tonometer | TONOLAB, iCare, Helsinki, Finland | TV02 | for intraocular pressure monitoring |
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