ワンステップ低温大気プラズマ治療体外で神経幹細胞の分化
Summary
このプロトコルは、神経幹細胞と分化強化のため蛍光検出に冷たい大気圧プラズマ処理の詳細な実験手順を提供しています。
Abstract
除染、がん治療、創傷治癒、根管治療などの冷たい大気プラズマ (Cap) 物理プラズマ技術の開発が検討されているとはプラズマ医学という新しい研究分野を形成します。電気・化学・生物学的活性種の混合物であること、キャップが両方生体外で神経幹細胞の分化を強化する能力を示していると体内であり、神経疾患治療のための有望な方法になっています。将来的には。多くのエキサイティングなニュースは、キャップを使用してワンステップを実現することが安全に誘導、神経幹細胞 (NSCs) の分化組織輸送のため。ここで NSC C17.2 NSCs と初代ラット神経幹細胞分化を強化する自作ジェット キャップ デバイスを使用と同様、細胞の運命で反転を観察し、蛍光顕微鏡の詳細な実験的プロトコルを示す.蛍光抗体染色技術の助けを借りて、未処理のグループよりも加速の差分率を示したの両方の NSCs がわかったし、NSCs の ~ 75% は選択的に、主に中高年、コリン作動性と運動ニューロンに分化ニューロン。
Introduction
NSCs の分化組織交通機関の特定の系列には、神経変性疾患や neurotraumatic 病1の最も有望な治療の一つと見なされます。たとえば、カテコラミン神経ドーパミン作動性ニューロンがパーキンソン病 (PD) 治療特に所望されます。ただし、交通機関の任意のセルを準備する従来の方法化学的毒性、瘢痕形成、または他の主として再生医療2NSCs のアプリケーションを阻害するなどの多くの欠点があります。したがって、NSC 分化の小説と安全な方法を見つけるために非常に必要です。
プラズマは事項、次の固体、液体、ガスの 4 つめの状態、それは全体の宇宙の問題の 95% 以上を構成します。プラズマは非連結の正/負と中性粒子を電気でニュートラル、ラボで高電圧放電による生成されます。最後の二十年で生物医学におけるプラズマのアプリケーションは冷たい大気圧プラズマ技術の開発として世界的に巨大な注目を集めています。この技術のおかげで安定した低温プラズマ アークの形成を伴わない雰囲気で周囲の空気で生成でき、活性窒素種 (RNS)、活性酸素種 (ROS)、紫外線 (UV) などのさまざまな反応種で構成されています放射線、電子、イオン、電気フィールド3。キャップは、微生物の不活化、がん治療、創傷治癒、皮膚疾患、細胞増殖、細胞分化4,5,6、7の治療のユニークな利点を持っています。前作でデモンストレーションを行った冷たい大気圧プラズマ ジェットは NSCs マウス神経幹細胞 C17.2 (C17.2-NSCs) で初代ラット神経幹細胞分化を高めることができるの監督のための強力なツールになる大きな可能性を出展NSCs8の分化。キャップによる NSC 分化のメカニズムはまだ明らかでないがないキャップによって生成されたプロセスで重要な要因ことが証明されています。大気圧ヘリウム ・酸素プラズマ ジェットを用いた体外NSCs、セル準備と前処理、倒立顕微鏡による形態観察が治療の詳細な実験的プロトコルの提供を目指してこの作品で、免疫蛍光染色の蛍光顕微鏡観察。
Protocol
Representative Results
Discussion
C17.2 NSCs は一種10,11のスナイダーと他の人によって開発された新生児マウス小脳顆粒層細胞の不死化神経幹細胞ラインの。C17.2 NSCs は神経細胞やアストロ サイト、オリゴデンドロ サイトに分化することができ、神経科学12で広く使用されています。以前の研究では、キャップは C17.2 NSCs のニューロンへの分化を高めることができま?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、華中学者プログラム、華中大学の科学・技術 (第 2018KFYYXJJ071)、中国の国家自然科学基金 (31501099, 51707012 番) の独立した技術革新基金によって支えられました。
Materials
| Coverslip | NEST | 801008 | |
| Poly-D-lysine | Beyotime | P0128 | |
| DMEM medium | HyClone | SH30022.01B | stored at 4 °C |
| DMEM/F12 medium | HyClone | SH30023.01B | stored at 4 °C |
| N2 supplement | Gibco | 17502048 | stored at -20 °C and protect from light |
| B27 supplement | Gibco | 17504044 | stored at -20 °C and protect from light |
| Fetal bovine serum | HyClone | SH30084.03 | stored at -20 °C, avoid repeated freezing and thawing |
| Donor Horse serum | HyClone | SH30074.03 | tored at -20 °C, avoid repeated freezing and thawing |
| Penicillin/Streptomycin | HyClone | SV30010 | stored at 4 °C |
| Trypsin | HyClone | 25300054 | stored at 4 °C |
| PBS solution | HyClone | SH30256.01B | stored at 4 °C |
| 4% paraformaldehyde | Beyotime | P0098 | stored at -20 °C |
| TritonX-100 | Sigma | T8787 | |
| Normal Goat Serum Blocking Solution | Vector Laboratories | S-1000-20 | stored at 4 °C |
| anti-Nestin | Beyotime | AF2215 | stored at -20 °C, avoid repeated freezing and thawing |
| anti-β-Tubulin III | Sigma Aldrich | T2200 | stored at -20 °C, avoid repeated freezing and thawing |
| anti-O4 | R&D Systems | MAB1326 | stored at -20 °C, avoid repeated freezing and thawing |
| anti-NF200 | Sigma | stored at -20 °C, avoid repeated freezing and thawing | |
| anti-ChAT | Sigma | stored at -20 °C, avoid repeated freezing and thawing | |
| anti- LHX3 | Sigma | stored at -20 °C, avoid repeated freezing and thawing | |
| anti-GABA | Sigma | stored at -20 °C, avoid repeated freezing and thawing | |
| anti-Serotonin | Abcam, Cambridge, MA | stored at -20 °C, avoid repeated freezing and thawing | |
| anti-TH | Abcam, Cambridge, MA | stored at -20 °C, avoid repeated freezing and thawing | |
| Immunol Staining Primary Antibody Dilution Buffer | Beyotime | P0103 | stored at 4 °C |
| Cy3 Labeled Goat Anti-Rabbit IgG | Beyotime | A0516 | stored at -20 °C and protect from light |
| Alexa Fluor 488- Labeled Goat | Beyotime | A0428 | stored at -20 °C and protect from light |
| Anti-Mouse IgG | |||
| 12-well plate | corning | 3512 | |
| 25 cm2 flask | corning | 430639 | |
| Hoechst 33258 | Beyotime | C1018 | stored at -20 °C and protect from light |
| Mounting medium | Beyotime | P0128 | stored at -20 °C and protect from light |
| Light microscope | Nanjing Jiangnan Novel Optics Company | XD-202 | |
| Fluorescence microscopy | Nikon | 80i | |
| High – voltage Power Amplifier | Directed Energy | PVX-4110 | |
| DC power supply | Spellman | SL1200 | |
| Function Generator | Aligent | 33521A | |
| Oscilloscope | Tektronix | DPO3034 | |
| High voltage probe | Tektronix | P6015A |
References
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