Lipoaspirates mekanik mikronize rejeneratif Terapisi için
Summary
Burada, stromal vasküler kesir emülsifikasyon ve birden çok centrifugations kapsayan mekanik işlemler bir dizi Yağ dokusundan elde etmek için bir iletişim kuralı mevcut.
Abstract
Stromal vasküler kesir (SVF) çeşitli hastalıklar için yenileyici bir araç haline gelmiştir; Ancak, mevzuat kesinlikle collagenase kullanarak hücre ürünlerin klinik uygulama düzenlemektedir. Burada, SVF hücreleri ve yerel hücre dışı matriks enjekte edilebilir bir karışımı yağ dokusu tamamen mekanik bir işlem tarafından oluşturmak için bir protokol mevcut. Lipoaspirates bir santrifüj koymak ve 1200 x g 3 dk de döndü. Orta tabaka toplanır ve (yüksek yoğunluklu alt) ve düşük yoğunluklu yağlı üst iki katmanlara ayrılmış. Üst katman doğrudan intersyringe, 6 x 8 x için 20 mL/s hızında değişen emülsiyon. Emülsifiye yağ 2.000 x g 3 min için de centrifuged ve yapışkan madde yağ tabakası altında toplanan ve hücre dışı Matriks (ECM) tanımlanan / SVF-jel. Üst katmanı yağlıboya toplanır. Yaklaşık 5 mL yağı 15 mL yüksek yoğunluklu yağ eklenir ve intersyringe, 6 x 8 x için 20 mL/s hızında değişen emülsiyon. Emülsifiye yağ 2.000 x g 3 dk de centrifuged, ve yapışkan madde de ECM/SVF-jel. Çıplak fareler içine ECM/SVF-jel nakli sonra rüşvet hasat ve histolojik bir sınava tabi. Sonuçta bu ürün normal yağ dokusu yeniden oluşturmak için potansiyele sahip olduğunu gösterir. Bu yordamı rejeneratif amaçlar için onların doğal destekleyici ECM gömülü SVF hücreleri yoğunlaşmak için basit, etkili mekanik ayrışma bir işlemdir.
Introduction
Böylece çeşitli hastalıkları1için alternatif bir tedavi rejimi sunabilir kök hücre tedavileri bir paradigma kayması doku onarımı ve yenilenme için sağlar. Kök hücreleri (örneğin, İndüklenmiş pluripotent kök hücreler ve embriyonik kök hücre) büyük tedavi potansiyel ama hücre düzenleme ve etik kaygılar nedeniyle sınırlıdır. Yağ elde edilen Mezenkimal stromal/kök hücreler (ASCs) lipoaspirates ve aynı sınırlamalarına tabi değil almak kolaydır; Böylece, bu pratik rejeneratif tıp2için bir ideal hücre türü haline gelmiştir. Buna ek olarak, onlar nonimmunogenic ve Otolog yağ3bol kaynaklara sahip.
Şu anda, ASCs esas olarak collagenase-aracılı hazım yağ dokusu tarafından elde edilir. Yağ dokusu stromal vasküler kesir (SVF) ASCs, endotelyal progenitor hücre, perisitlerden ve bağışıklık hücreleri içerir. Enzimatik SVF/ASCs yüksek yoğunluğu elde etmek faydalı etkileri olduğu gösterildi rağmen birçok ülke mevzuatında kesinlikle collagenase4kullanarak hücre tabanlı ürünlerin klinik uygulama düzenlemektedir. Yağ dokusu ile collagenase 30 dk SVF hücreleri elde etmek için 1 h için sindirerek eksojen her iki malzeme hazırlama ve biyolojik kirlenme riski artar. Yapisan kültür ve gün hafta için alır, ASCs, arıtma belirli labaratuar donanımları gerektirir. Ayrıca, çoğu çalışmalarda, süspansiyon SVF hücreleri ve ASCs kullanılır. Hücre dışı Matriks (ECM) veya başka bir taşıyıcı korumasız boş hücre güvenlik açığından etkilenir, zavallı hücre saklama enjeksiyon sonra neden ve tedavi sonucu5uzlaşma. Tüm bu nedenlerle daha fazla uygulama kök hücre tedavisinin sınırlayın.
ASCs collagenase-aracılı sindirim olmadan Yağ dokusundan elde etmek için aralıklarla, doğrama, parçalama, püre ve kıyma, mekanik dahil olmak üzere çeşitli mekanik işleme yordamları gelişmiş6,7 olmuştur , 8 , 9. bu yöntem doku ve ASCs mekanik olarak olgun adiposit ve onların yağ içeren veziküller kesintiye tarafından yoğunlaşmak düşünülmektedir. Ayrıca,8,9,10hayvan rejeneratif tıp modelleri gibi ASCs, yüksek konsantrasyonda içeren bu hazırlıklar, önemli bir tedavi potansiyel gösterdi.
2013 yılında, Tonnard ve ark. emülsifiye lipoaspirates11işleme intersyringe tarafından üreten içerir tekniği aşılama nanofat tanıttı. Değişen intersyringe tarafından oluşturulan kesme Kuvvetleri seçmeli olarak olgun adiposit zarar verebilir. Onların bulgularına dayanarak, sadece SVF hücreleri ve ECM/SVF-jel12fraksiyonlara ECM bırakarak lipoaspirates, lipid ve sıvı çoğunu kaldırır bir tamamen mekanik işleme yöntemi geliştirdi. Burada, insan kaynaklı yağ dokusu ECM/SVF-jel üretmek için mekanik sürecinin ayrıntıları açıklamak.
Protocol
Representative Results
Discussion
Kök hücre tabanlı rejeneratif terapisi büyük potansiyel yarar farklı hastalıklarda göstermiştir. Kolay elde etmek ve doku onarımı ve roman doku15rejenerasyon için kapasitesine sahip oldukları için ASCs en iyi tedavi adaylardır. Ancak, hücreleri ve collagenase6işlemek için izole etmek için karmaşık prosedürler gerektirdiğinden klinik uygulama, genişleyen sınırlamalar vardır. Böylece, kök hücre collagenase kullanımı olmadan elde etmek için bas…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser desteklenmiştir (81471881, 81601702, 81671931) Çin’in Ulusal Doğa Bilim Vakfı, Guangdong Eyaleti Çin (2014A030310155) ve Nanfang hastane yöneticisi Foundation (2014B009, doğal Bilim Vakfı tarafından 2015Z002, 2016Z010, 2016B001).
Materials
| Alexa Fluor 488-conjugated isolectin GS-IB4 | Molecular Probes | I21411 | |
| guinea pig anti-mouse perilipin | Progen | GP29 | |
| DAPI | Thermofisher | D1306 | |
| wide tip pipet | Celltreat | 229211B | |
| Confocal microscope | Leica | TCS SP2 | |
| nude nice | Southern Mdical University | / | |
| light microscope | Olympus | / | |
| 50 mL tube | Cornig | 430828 | |
| sterile bag | Laishi | / | |
| microtome | Leica | CM1900 | |
| centrifuge | Heraus |
References
- Bateman, M. E., et al. Using Fat to Fight Disease: A Systematic Review of Non-Homologous Adipose-Derived Stromal/Stem Cell Therapies. Stem Cells. 36 (9), 1311-1328 (2018).
- Baer, P. C., Geiger, H. Adipose-derived mesenchymal stromal/stem cells: tissue localization, characterization, and heterogeneity. Stem Cells International. , 812693 (2012).
- Gimble, J. M., Katz, A. J., Bunnell, B. A. Adipose-derived stem cells for regenerative medicine. Circulation Research. 100 (9), 1249-1260 (2017).
- Halme, D. G., Kessler, D. A. FDA regulation of stem-cell-based therapies. New England Journal of Medicine. 355 (16), 1730-1735 (2006).
- Cheng, N. C., Wang, S., Young, T. H. The influence of spheroid formation of human adipose-derived stem cells on chitosan films on stemness and differentiation capabilities. Biomaterials. 33 (6), 1748-1758 (2012).
- van Dongen, J. A., et al. Comparison of intraoperative procedures for isolation of clinical grade stromal vascular fraction for regenerative purposes: a systematic review. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 12 (1), 261-274 (2018).
- van Dongen, J. A., et al. The fractionation of adipose tissue procedure to obtain stromal vascular fractions for regenerative purposes. Wound Repair and Regeneration. 24 (6), 994-1003 (2016).
- Mashiko, T., et al. Mechanical Micronization of Lipoaspirates: Squeeze and Emulsification Techniques. Plastic and Reconstructive Surgery. 139 (1), 79-90 (2017).
- Feng, J., et al. Micronized cellular adipose matrix as a therapeutic injectable for diabetic ulcer. Regenerative Medicine. 10 (6), 699-708 (2015).
- Zhang, P., et al. Ischemic flap survival improvement by composition-selective fat grafting with novel adipose tissue derived product – stromal vascular fraction gel. Biochemistry and Biophysics Research Communication. 495 (3), 2249-2256 (2018).
- Tonnard, P., et al. Nanofat grafting: basic research and clinical applications. Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (4), 1017-1026 (2013).
- Yao, Y., et al. Adipose Extracellular Matrix/Stromal Vascular Fraction Gel: A Novel Adipose Tissue-Derived Injectable for Stem Cell Therapy. Plastic and Reconstructive Surgery. 139 (4), 867-879 (2017).
- Yao, Y., et al. Adipose Stromal Vascular Fraction Gel Grafting: A New Method for Tissue Volumization and Rejuvenation. Dermatologic Surgery. 44 (10), 1278-1286 (2018).
- Zhang, Y., et al. Improved Long-Term Volume Retention of Stromal Vascular Fraction Gel Grafting with Enhanced Angiogenesis and Adipogenesis. Plastic and Reconstructive Surgery. 141 (5), 676-686 (2018).
- Sun, B., et al. Applications of stem cell-derived exosomes in tissue engineering and neurological diseases. Reviews in the Neurosciences. 29 (5), 531-546 (2018).
- Allen, R. J., et al. Grading lipoaspirate: is there an optimal density for fat grafting. Plastic and Reconstructive Surgery. 131 (1), 38-45 (2013).
- Qiu, L., et al. Identification of the Centrifuged Lipoaspirate Fractions Suitable for Postgrafting Survival. Plastic and Reconstructive Surgery. 137 (1), 67-76 (2016).
