Modelo de matriz extracelular óssea tridimensional para osteossarcoma
Summary
O modelo de matriz extracelular (BEM) de osso de osteossarcoma (OS) é bem estabelecida e mostrado aqui. Ele pode ser usado como um andaime apropriado para simulando tumor primário crescimento em vitro e fornecendo um modelo ideal para o estudo da heterogeneidade de mutagénese e histológica do sistema operacional.
Abstract
Osteossarcoma (OS) é o mais comum e um tumor ósseo primário altamente agressivo. É caracterizado com variações anatômicas e histológicas, juntamente com as dificuldades de diagnósticos ou prognósticos. Sistema operacional é composto por células cancerosas Leishmania e fenotipicamente heterogêneas. Elementos do microambiente ósseo são provou conta para progressão de doença e heterogeneidade do tumor. Matriz extracelular óssea (BEM) retém a matrizes microestrutural e componentes bioquímicos do nativo da matriz extracelular. Este nicho de tecido-específica fornece um andaime favorável e a longo prazo para proliferação e célula OS semeadura. Este artigo fornece um protocolo para a preparação da modelo BEM e sua aplicação mais experimental. OS células podem crescer e se diferenciar em múltiplos fenótipos consistentes com a complexidade histopatológica das amostras clínicas OS. O modelo também permite a visualização de diversas morfologias e sua associação com alterações genéticas e mecanismos reguladores subjacentes. Como homólogo para OS humanos, este modelo BEM-OS pode ser desenvolvido e aplicado para a patologia e pesquisa clínica do sistema operacional.
Introduction
Osteossarcoma (OS) geralmente ocorre em áreas, a metáfise de ossos longos, um crescimento activo durante a adolescência. Mais de 80% dos sites OS afetados têm preferência para a metáfise da tíbia proximal proximal do úmero e fêmur distal e proximal, correspondente à posição do crescimento placa1. OS compreende vários subtipos de células com propriedades mesenquimais e considerável diversidade nas características histológicas e grau. Evidências suportam as células-tronco mesenquimais (MSCs), cometido precursores de osteoblastos e pericitos como as células de origem2,3,4,5. Estas células podem acumular alterações epigenéticas ou genéticas e dar origem a OS sob a influência de certos sinais microenvironmental de osso. Mecanismos intrínsecos e extrínsecos resultam na instabilidade genômica e heterogeneidade do sistema operacional, com vários fenótipos clínicos e morfológicos6,7. Para terapias individualizadas ou triagem de novas drogas, novos modelos precisam ser gerado para contra heterogeneidade ou outras desordens clínicas.
Sistema operacional é um tumor sólido maligno intra ósseo. A complexidade e a atividade ao redor de elementos do microambiente conferem diferenças fenotípicas e funcionais sobre células do sistema operacional em diferentes locais de um tumor. A matriz extracelular óssea (BEM) fornece um andaime estrutural e bioquímico para deposição mineral e remodelação óssea. A parte orgânica da matriz extracelular (ECM) consiste principalmente de tipo eu colágeno secretado pelas células da linhagem osteoblástica, enquanto sua porção mineralizada é composta de fosfato de cálcio sob a forma de hidroxiapatita8. O papel dinâmico das redes de ECM é regular a adesão celular, diferenciação, cross-talk e tecido função manutenção9.
Desmineralizada BEM e ECM hidrogel tem sido utilizado com sucesso na cultura de pilha e pode aumentar a proliferação de célula10,11. Sintetizado como osso ECM pode regular o tamanho do pool, decisões de destino e progressão da linhagem do MSCs12,13,14. Além disso, resultados provas de sua significância clínica para fornecer atividade osteogênica por processos celulares estimulantes durante o osso formação e regeneração15,16,17.
Neste artigo, o nosso grupo estabelece um modelo modificado e alternativa favorável para tridimensional cultura a longo prazo. OS células injetadas pelo BEM derivado de tecido apresentam um fenótipo de forma heterogénea mesenquimal prontamente em comparação com plásticos culturas bidimensionais. BEM derivado mostrar tecidos homólogos site-specific, sua vantagem dramática como sendo um nicho nativo para ósmio em vitro células e tem um grande potencial em pesquisas teóricas e clínicas de sistema operacional. Esta plataforma BEM caracterizada é simples mas eficiente para a investigação em vitro e pode ser prorrogada em modelagem de vários tipos de câncer.
Protocol
Representative Results
Discussion
Geralmente, OS podem ser classificados como osteoblástica, chondroblastic e fibroblastic subtipos dependendo de seu componente histológico dominante. Seu prognóstico é dependente não só parâmetros histológicos, mas também no seu sítio anatômico. Pode ocorrer no interior dos ossos (na haste intramedular ou compartimento intracortical), nas superfícies dos ossos e em sites extraosseous19. O surgimento e a heterogeneidade do sistema operacional podem ser elucidados como uma conjugação …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores valorizam o apoio de Liuying Chen por sua assistência administrativa e Zhao longa por sua excelente assistência técnica durante a construção de andaimes de matriz extracelular do osso. Este estudo é suportado por concessões da Fundação Nacional de ciências naturais da China (31871413).
Materials
| 15 mL centrifuge tube | Greiner | 188271 | |
| 50 mL centrifuge tube | Greiner | 227270 | |
| 6 cm cell culture dish | Greiner | 628160 | |
| 6-well plate | Greiner | 657160 | |
| Ampicillin | Sigma-Aldrich | A9393 | |
| C57-BL/6J mouse | Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center | ||
| CO2 incubator | SHEL LAB | SCO5A | |
| Dibasic sodium phosphate | Guangzhou Chemical Reagent Factory | BE14-GR-500G | |
| DMEM/F12 | Sigma-Aldrich | D0547 | |
| Fetal bovine serum | Hyclone | SH30084.03 | |
| Hemocytometer | BLAU | 717805 | |
| Kanamycin | Sigma-Aldrich | PHR1487 | |
| MG-63 | Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank | Human osteosarcoma cell line | |
| MNNG/HOS | Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank | Human osteosarcoma cell line | |
| Phenol red | Sigma-Aldrich | P4633 | A solution of phenol red is used as a pH indicator: its color exhibits a gradual transition from yellow to red over the pH range 6.6 to 8.0. |
| Potassium chloride | Sangon Biotech | A100395 | |
| Potassium Phosphate Monobasic | Sangon Biotech | A501211 | |
| Sodium chloride | Sangon Biotech | A501218 |
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