इन विट्रो परख से अध्ययन ट्यूमर-मैक्रोफेज इंटरेक्शन
Summary
यह लेख मैक्रोफेज को आकर्षित करने के लिए ट्यूमर कोशिकाओं से वातानुकूलित माध्यम की क्षमता का मूल्यांकन करने के लिए इन विट्रो परख में एक उपयोगी का प्रतिनिधित्व करता है।
Abstract
ट्यूमर जुड़े मैक्रोफेज (TAMs) कैंसर के विभिन्न प्रकार के लिए ट्यूमर द्रव्यमान में कोशिकाओं का एक बड़ा प्रतिशत के लिए खाते. ग्लियोब्लास्टोमा (जीबीएम), कोई इलाज नहीं के साथ एक घातक मस्तिष्क ट्यूमर, एक आधा ट्यूमर जन TAMs अप करने के लिए है। TAMs समर्थक ट्यूमर या विरोधी tumoral हो सकता है, कोशिकाओं में विशिष्ट जीन के सक्रियण पर निर्भर करता है. ट्यूमर में आनुवंशिक उत्परिवर्तन, cytokine अभिव्यक्ति को विनियमित करने के माध्यम से, ट्यूमर microenvironment के लिए TAMs की भर्ती को प्रभावित कर सकते हैं. यहाँ, हम ट्यूमर कोशिकाओं से वातानुकूलित माध्यम द्वारा मैक्रोफेज भर्ती का आकलन करने के लिए एक मात्रात्मक सेल आधारित परख का वर्णन करते हैं। इस परख ग्लियोब्लास्टोमा से वातानुकूलित माध्यम द्वारा मैक्रोफेज आकर्षण का अध्ययन करने के लिए मानव मैक्रोफेज सेल लाइन MV-4-11 का उपयोग करता है, उच्च प्रजननक्षमता और कम परिवर्तनशीलता के लिए अनुमति देता है। इस परख के साथ उत्पन्न डेटा ट्यूमर और ट्यूमर microenvironment के बीच बातचीत की एक बेहतर समझ के लिए योगदान कर सकते हैं. इसी तरह की परख ट्यूमर कोशिकाओं और अन्य प्रतिरक्षा कोशिकाओं के बीच बातचीत का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, टी कोशिकाओं और प्राकृतिक हत्यारा (एनके) कोशिकाओं सहित.
Introduction
मैक्रोफेज प्रतिरक्षा कोशिकाएं होती हैं जिनमें उच्च लक्षणीय और कार्यात्मक विषमता1होती है . वे मेजबान रक्षा प्रणाली, ऊतक की मरम्मत, विकास और ट्यूमर प्रगति1में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। TAMs ठोस ट्यूमर के microenvironment में मैक्रोफेज हैं. कुछ TAMs टी सेल मध्यस्थता cytotoxic गतिविधि को बाधित करने के माध्यम से ट्यूमर के विकास को बढ़ावा देने, ट्यूमर microenvironment (TME), एंजियोजेनेसिस को बढ़ावा देने, आक्रमण और मेटास्टेसिस2,3,4, 5. टीएएम टी एम ई में सबसे प्रचुर मात्रा में सेल प्रकारों में से एक है और टीएएम की अधिक संख्या आम तौर पर कई प्रकार के ठोस ट्यूमर 6 में बदतर रोगी के जीवित रहने से संबंधित होतीहै. ट्यूमर कोशिकाओं के विशिष्ट आनुवंशिक हस्ताक्षर मैक्रोफेज की भर्ती करने की उनकी क्षमता को प्रभावित करते हैं। जीबीएम में, कोई इलाज के साथ एक आक्रामक मस्तिष्क ट्यूमर, मैक्रोफेज ट्यूमर द्रव्यमान7के एक आधे तक का प्रतिनिधित्व कर सकते हैं। एपिडर्मल विकास कारक रिसेप्टर (ईजीएफआर) और इसके truncation उत्परिवर्ती EGFRvIII के सह-प्रवर्धन अक्सर जीबीएम में मनाया जाता है, जो ट्यूमर विकास लाभप्रदान 8. कोशिकाओं सह व्यक्त EGFR और EGFRvIII अधिक मैक्रोफेज को आकर्षित करने की तुलना में व्यक्त कोशिकाओं EGFR या EGFRvIII singly7.
चेमोकिन छोटे साइटोकिन्स का एक परिवार है जो टी एम ई6,9में प्रतिरक्षा संरचना को विनियमित करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं . मानव कोशिकाओं 50 से अधिक साइटोकिन्स10व्यक्त करते हैं। ट्यूमर में प्रतिरक्षा घुसपैठ काफी हद तक साइटोकिन्स और साइटोकिन रिसेप्टर्स11के बीच बातचीत से महसूस किया जाता है . प्रतिरक्षा कोशिकाओं के प्रत्येक प्रकार के विशिष्ट chemokine रिसेप्टर्स / chemokines व्यक्त करता है और विशिष्टchemokines स्रावित कोशिकाओं द्वारा भर्ती किया जा सकता / कैंसर कोशिकाओं को कुछ chemokines की अभिव्यक्ति में वृद्धि करने के लिए इस तरह के TAMs के रूप में प्रतिरक्षा कोशिकाओं की भर्ती कर सकते हैं, नियामक टी कोशिकाओं और माइलॉयड व्युत्पन्न दमन कोशिकाओं (MDSCs)6. ट्यूमर द्वारा स्रावित विशिष्ट chemokine की नाकाबंदी ट्यूमर द्रव्यमान में प्रतिरक्षा कोशिकाओं की घुसपैठ को रोकने में एक आशाजनक तरीका हो सकता है।
यहाँ, हम एक प्रोटोकॉल है कि ट्यूमर-मैक्रोफेज बातचीत के इन विट्रो मूल्यांकन में अनुमति देता है का वर्णन, chemokines और मैक्रोफेज सेल लाइनों युक्त ट्यूमर कोशिकाओं से वातानुकूलित मीडिया का उपयोग कर.
Protocol
Representative Results
Discussion
इस प्रोटोकॉल में, कई महत्वपूर्ण चरण हैं: 1) Transwell सम्मिलित करें का चयन। MV-4-11 सेल लाइन के लिए, 5 डिग्री m ट्रांसवेल सम्मिलित करता है अच्छी तरह से काम करते हैं. हालांकि, इस तरह के सामान्य रूप से इस्तेमाल किया monocyte स?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
अनुदान सहायता: एक एलेक्स Lemonade स्टैंड फाउंडेशन, अमेरिकी मस्तिष्क ट्यूमर एसोसिएशन, NIH T32CA108462 और निर्णायक जैव चिकित्सा अनुसंधान, जो आंशिक रूप से Sandler फाउंडेशन द्वारा वित्त पोषित है के लिए कार्यक्रम से समर्थन प्राप्त किया. डब्ल्यू Weiss NIH अनुदान R01CA2221969, R01NS091620, P50CA097257, U01CA217864, P30CA82103 द्वारा समर्थित किया गया था; शमूएल जी Waxman कैंसर रिसर्च फाउंडेशन; और एवलिन और मैटी एंडरसन कुर्सी.
Materials
| 0.1 μm filtration cup | Thermo fisher | 566-0010 | |
| 0.45 μm filter unit | Millipore | SLHA033SS | |
| 10 mL serological pipettes | Olympus plastics | 12-104 | |
| 15mL sterile centrifuge tubes | Olympus plastics | 28-103 | |
| 1 mL pipette tip | ART molecular bioproducts | 2779-RI | |
| 2 mL aspirating pipet | Falcon | 357558 | |
| 24-well plate | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| 4x lysis buffer | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| 5 μm Transwell insert | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| 75cm2 flask | Corning | 430641U | |
| Accutase | Innovative cell technologies | AT-104 | |
| B27 | Gibco | 12587-010 | |
| CyQuant Dye | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| DMEM | Gibco | 11965-092 | |
| DMEM:F12 | Gibco | 10565-018 | |
| EGF | Peprotech | AF-100-15 | |
| FBS | Gibco | 26140 | |
| FGF | Peprotech | 100-18B | |
| IMDM | Gibco | 12440-053 | |
| PBS | Gibco | 14190-144 | |
| Pen Strep | Gibco | 15140-122 | |
| Trypan blue | Biorad | 1450021 |
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