体外测定研究肿瘤-巨噬菌体相互作用
Summary
本文代表一种有用的体外测定,以评估肿瘤细胞的调节介质吸引巨噬细胞的能力。
Abstract
肿瘤相关巨噬细胞(TAM)占不同类型癌症肿瘤质量中很大比例的细胞。胶质母细胞瘤(GBM),一种恶性脑肿瘤,没有治愈,有高达一半的肿瘤质量TAM。根据细胞中特定基因的激活,TAM 可以是亲肿瘤或抗肿瘤的。肿瘤的基因突变,通过调节细胞因子表达,可以影响TAM在肿瘤微环境中的招募。在这里,我们描述了一个基于定量细胞的测定,以评估肿瘤细胞中调节介质的巨噬细胞招募。此测定使用人类巨噬细胞系 MV-4-11 来研究胶质细胞瘤的调节介质对宏噬细胞的吸引力,从而实现高重现性和低变异性。通过这种测定生成的数据有助于更好地了解肿瘤与肿瘤微环境之间的相互作用。类似的测定可用于评估肿瘤细胞与其他免疫细胞(包括T细胞和自然杀伤细胞(NK)细胞之间的相互作用。
Introduction
巨噬细胞是具有高型磷型和功能异质性1的免疫细胞。它们在宿主防御系统、组织修复、发育和肿瘤进展1中起着重要的作用。在实体肿瘤的微环境中,TAM是巨噬细胞。某些TAM可以通过抑制T细胞介导细胞毒性活性,调节肿瘤微环境(TME),促进血管生成、入侵和转移2,3,4,促进肿瘤生长。5.TAM是 TME 中最丰富的细胞类型之一,在多种类型的实体肿瘤6中,TAM 的数量通常与较差的患者存活率相关。肿瘤细胞的不同遗传特征影响其招募巨噬细胞的能力。在GBM,一个侵略性脑肿瘤,没有治愈,巨噬细胞可以代表肿瘤质量的一半7。表皮生长因子受体(EGFR)及其截断突变EGFRvIII的共增增在GBM中经常观察到,赋予肿瘤生长优势8。与表达EGFR或EGFRvIII的细胞相比,共同表达EGFR和EGFRvIII的细胞吸引更多的巨噬细胞。
化学因子是小细胞因子家族,在TME6、9中调节免疫成分方面起着重要作用。人类细胞表达超过50个细胞因子10。肿瘤中的免疫渗透主要通过细胞因子和细胞因子受体11之间的相互作用来实现。每种类型的免疫细胞表达不同的化学素受体/化学素,并可以招募的细胞分泌特定的化学素/化学素受体12。癌细胞可以增加某些化学素的表达,以招募免疫细胞,如TAM,调节性T细胞和骨髓衍生抑制细胞(MDSc)6。抑制肿瘤分泌的特定化学体是抑制免疫细胞渗入肿瘤质量的有希望的途径。
在这里,我们描述了一个方案,允许体外评估肿瘤-巨噬细胞相互作用,使用来自含有化学素和巨噬细胞系的肿瘤细胞的条件介质。
Protocol
Representative Results
Discussion
在此协议中,有几个关键步骤:1) 选择 Transwell 插入件。对于 MV-4-11 细胞系,5 μm Transwell 插入件工作良好。但是,对于其他细胞系(如常用的单细胞细胞系 THP-1),不同的孔径可能效果更好。2) 随着不同的细胞系以不同的速度生长,根据细胞数调整调节介质的体积非常重要。为此,在相同的实验条件下孵育的无细胞介质可用于稀释条件介质。3) FBS含有细胞因子。在上腔中使用无血清培养基对MV-4-11细胞进行种子…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
资助支持:Z. An得到了亚历克斯柠檬水站基金会、美国脑肿瘤协会、NIH T32CA108462和突破性生物医学研究计划的支持,该计划由桑德勒基金会提供部分资助。W. Weiss 得到 NIH 授权 R01CA221969、R01NS091620、P50CA097257、U01CA217864、P30CA82103的支持;塞缪尔·瓦克斯曼癌症研究基金会;和伊芙琳和玛蒂·安德森的主席
Materials
| 0.1 μm filtration cup | Thermo fisher | 566-0010 | |
| 0.45 μm filter unit | Millipore | SLHA033SS | |
| 10 mL serological pipettes | Olympus plastics | 12-104 | |
| 15mL sterile centrifuge tubes | Olympus plastics | 28-103 | |
| 1 mL pipette tip | ART molecular bioproducts | 2779-RI | |
| 2 mL aspirating pipet | Falcon | 357558 | |
| 24-well plate | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| 4x lysis buffer | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| 5 μm Transwell insert | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| 75cm2 flask | Corning | 430641U | |
| Accutase | Innovative cell technologies | AT-104 | |
| B27 | Gibco | 12587-010 | |
| CyQuant Dye | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| DMEM | Gibco | 11965-092 | |
| DMEM:F12 | Gibco | 10565-018 | |
| EGF | Peprotech | AF-100-15 | |
| FBS | Gibco | 26140 | |
| FGF | Peprotech | 100-18B | |
| IMDM | Gibco | 12440-053 | |
| PBS | Gibco | 14190-144 | |
| Pen Strep | Gibco | 15140-122 | |
| Trypan blue | Biorad | 1450021 |
References
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