फेफड़ों के कैंसर सेल लाइन्स में कैंसर स्टेम सेल की रेडियो संवेदनशीलता
Summary
कैंसर स्टेम कोशिकाओं की उपस्थिति रेडियोथेरेपी के बाद पतन या गरीब परिणामों के साथ जुड़ा हुआ है। इस पांडुलिपि फेफड़ों के कैंसर सेल लाइनों में कैंसर स्टेम कोशिकाओं की रेडियो संवेदनशीलता का अध्ययन करने के तरीकों का वर्णन करता है।
Abstract
कैंसर स्टेम सेल (सीएससी) की उपस्थिति रेडियोथेरेपी के बाद पतन या गरीब परिणामों के साथ जुड़ा हुआ है। रेडियो प्रतिरोधी सीएससी का अध्ययन रेडियो प्रतिरोध पर काबू पाने के लिए सुराग प्रदान कर सकते हैं. गैर-छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर (एनएससीएलसी) सेल लाइनों में रेडियो प्रतिरोधी सीएससी के लिए एक मार्कर के रूप में वोल्टेज-गेट्ड कैल्शियम चैनल [2] 1 उपइकाई समरूप 5 की सूचना दी गई है। एक सीएससी मार्कर के एक उदाहरण के रूप में कैल्शियम चैनल $2 $ 1 उपइकाई का उपयोग करते हुए, एनएससीएलसी सेल लाइनों में सीएससी की रेडियो संवेदनशीलता का अध्ययन करने के लिए तरीके प्रस्तुत किए जाते हैं। सीएससी प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा putative मार्करों के साथ हल कर रहे हैं, और हल कोशिकाओं के आत्म नवीनीकरण क्षमता क्षेत्र गठन परख द्वारा मूल्यांकन किया जाता है। कॉलोनी गठन परख, जो निर्धारित करता है कि कितने कोशिकाओं विकिरण की एक निश्चित खुराक के बाद कॉलोनी बनाने के वंशज उत्पन्न करने की क्षमता खो देते हैं, तो हल कोशिकाओं की रेडियो संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए किया जाता है। यह पांडुलिपि सीएससी की विकिरण संवेदनशीलता का अध्ययन करने के लिए प्रारंभिक कदम प्रदान करती है, जो अंतर्निहित तंत्र की आगे समझने के लिए आधार स्थापित करती है।
Introduction
रेडियोथेरेपी कैंसर के इलाज में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। तथापि, रेडियो प्रतिरोधी कैंसर स्टेम सेल (सीएससी) के अस्तित्व रेडियोथेरेपी1,2के बाद पतन या खराब परिणाम के लिए नेतृत्व कर सकते हैं। सीएससी उनके आत्म नवीनीकरण क्षमता और विषमजात कैंसर कोशिकाओं3उत्पन्न करने की क्षमता की विशेषता है। एक अधिक कुशल डीएनए क्षति की मरम्मत क्षमता या मुक्त मूल अपमार्जन प्रणाली या अन्य तंत्र के उच्च स्तर के साथ बख़्तरबंद, सीएससी अपेक्षाकृत रेडियोथेरेपी4केलिए प्रतिरोधी रहे हैं ,5,6,7 , 8. सीएससी मार्करों की पहचान करना और उनके तंत्र की खोज करने से उन दवाओं के विकास में मदद मिलेगी जो सामान्य ऊतक क्षति को बढ़ाए बिना रेडियो प्रतिरोध को दूर करेंगी।
एनएससीएलसी सेल लाइनों9में रेडियो प्रतिरोधी सीएससी के लिए एक मार्कर के रूप में वोल्टेज-गेट्ड कैल्शियम चैनल $2 ]1 उपइकाई समरूप 5 की सूचना दी गई है। [2] 1 मूल रूप से hepatotocellular कार्सिनोमा (एचसीसी)10के लिए एक सीएससी मार्कर के रूप में पहचान की गई थी। एक ही रोगी में प्राथमिक और आवर्तक ट्यूमर से व्युत्पन्न एचसीसी सेल लाइनों की एक जोड़ी के साथ subtractive प्रतिरक्षण का उपयोग करना, एक एंटीबॉडी नाम 1B50-1 विशेष रूप से आवर्तक एचसीसी कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए पहचान की गई थी। 1B50-1-सकारात्मक कोशिकाओं विवो में इन विट्रो और उच्च tumorigenicity में उच्च क्षेत्र गठन दक्षता से पता चला. इसका प्रतिजन मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा पहचाना गया था, के रूप में कैल्शियम चैनल $2 ] 1 subunit isoform 5. [2] 1 विशेष रूप से CSCs में व्यक्त करता है और सबसे सामान्य ऊतकों में undetectable है, यह CS10को लक्षित करने के लिए एक संभावित उम्मीदवार बना रही है. यह एनएससीएलसी सेल लाइनों के लिए सीएससी मार्कर के रूप में भी कार्य कर सकता है, और विकिरण9के प्रत्युत्तर में डीएनए क्षति मरम्मत की दक्षता को बढ़ाकर आंशिक रूप से एनएससीएलसी कोशिकाओं को रेडियो प्रतिरोध प्रदान करने के लिए दिखाया गया है।
रेडियो प्रतिरोधी सीएससी का अध्ययन रेडियो प्रतिरोध पर काबू पाने के लिए सुराग प्रदान कर सकते हैं. एनएससीएलसी में एक उदाहरण के रूप में 2$1 का उपयोग करते हुए सीएससी की रेडियो संवेदनशीलता का अध्ययन करने के लिए प्रमुख विधियाँ प्रस्तुत की जाती हैं। आमतौर पर, CS एक putative सतह मार्कर के साथ अलग कर रहे हैं, और स्टेम सेल विशेषताओं और सकारात्मक और नकारात्मक सेल आबादी के radiosensitivity तुलना कर रहे हैं. एक सीरम मुक्त माध्यम में क्षेत्र गठन विकास कारकों है कि आत्म नवीनीकरण का समर्थन के साथ पूरक इन विट्रो में कोशिकाओं के स्टेमनेस का मूल्यांकन करने के लिए एक उपयोगी परख है. उच्च क्षेत्र निर्माण क्षमता वाले कोशिकाओं में प्रतिरक्षाविहीन चूहों10,11,12में इंजेक्ट किए जाने पर उच्च ट्यूमरीनिकता दिखाई देने की संभावना है . कॉलोनी गठन परख तो कोशिकाओं की रेडियो संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए प्रयोग किया जाता है, जो निर्धारित करता है कि कितने विकिरण13की एक खुराक के बाद कॉलोनी बनाने के वंशज उत्पन्न करने की क्षमता खो दिया है.
Protocol
Representative Results
Discussion
यह प्रोटोकॉल इन विट्रो में कैंसर सेल लाइनों में सीएससी की विकिरण संवेदनशीलता का अध्ययन करने के तरीकों का वर्णन करता है। इस अध्ययन में, एनएससीएलसी सेल लाइनों में $2$1 की अभिव्यक्ति निरंतर है। इसलिए, gating एक …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (81402535 और 81672969) और राष्ट्रीय कुंजी अनुसंधान और विकास परियोजना (2016YFC0904703) द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| 0.5% Trypsin-EDTA (10X), no phenol red | Thermo Fisher | 15400054 | Dilute in to 0.05% (1X) with autoclaved distilled water |
| 1B50-1 | This antibody is produced and friendly supplied by Laboratory of Carcinogenesis and Translational Reseach (Ministry of Education/Beijing), Department of Cell Biology, Peking University Cancer Hospital and Institute. See reference 10. Alternatively, commercial antibody of calcium channel α2δ1 subunit can be used (ABCAM, ab2864) (Yu, et al., Am J Cancer Res, 2016; 6(9): 2088-2097) | ||
| 4% formaldehyde solution | Solarbio | G2160 | |
| A549 | ATCC | RRID: CVCL_0023 | |
| B27 | Thermo Fisher | 17504044 | |
| Biological Safety Cabinet | Thermo Fisher | 1336 | |
| Centrifuge | Eppendorf | 5910R | |
| DMEM/F-12 | Thermo Fisher | 12500062 | |
| EGF Recombinant Human Protein | Thermo Fisher | PHG0311 | |
| Fetal bovine serum | Thermo Fisher | 16140071 | |
| FGF-Basic (AA 1-155) Recombinant Human Protein | Thermo Fisher | PHG0261 | |
| Flow cytometer/cell sorter | BD | FACSARIA III | |
| H1299 | ATCC | RRID: CVCL_0060 | |
| H1975 | ATCC | RRID: CVCL_1511 | |
| Lightning-Link Fluorescein Kit | Innova Biosciences | 310-0010 | |
| linear accelerator | VARIAN | CLINAC 600C/D | |
| Methyl cellulose | Sigma Aldrich | M7027 | |
| Penicillin-Streptomycin, Liquid | Thermo Fisher | 15140122 | |
| Phosphate buffered saline | Solarbio | P1020 | |
| RPMI-1640 | Thermo Fisher | 11875093 | |
| SYBRGREEN | TOYOBO | QPK-201 | |
| TRIzol | Thermo Fisher | 15596026 | |
| Violet crystal staining solution | Solarbio | G1062 |
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