Modelo crônico da dor da Borne-Isquemia para a síndrome regional complexa da dor tipo-I nos ratos

Summary

Fornecido aqui é um protocolo que detalha etapas para estabelecer um modelo animal da dor crônica do borne-isquemia (CPIP). Este é um modelo bem reconhecido imitando a síndrome da dor regional complexa humana tipo I. As hipersensibilidades mecânicas e térmicas são avaliadas, bem como comportamentos nocifensivos induzidos por capsaicina observados no modelo de ratazana CPIP.

Abstract

A síndrome regional complexa da dor tipo I (CRPS-I) é uma doença neurológica que cause a dor severa entre pacientes e permaneça uma condição médica não resolvida. No entanto, os mecanismos subjacentes do CRPS-I ainda não foram revelados. Sabe-se que a isquemia/reperfusão é um dos principais fatores que causa crps-i. Por meio de isquemia prolongada e reperfusão do membro traseiro, o modelo crônico de dor pós-isquemia (CPIP) foi estabelecido para imitar crps-i. O modelo CPIP tornou-se um modelo animal bem reconhecido para estudar os mecanismos de CRPS-I. Este protocolo descreve os procedimentos detalhados envolvidos no estabelecimento do modelo de rato da CPIP, incluindo anestesia, seguido de isquemia/reperfusão do membro traseiro. As características do modelo cpip de rato são avaliadas medindo as hipersensibilidades mecânicas e térmicas do membro traseiro, bem como as respostas nocifensivas à injeção aguda de capsaicina. O modelo cpip rato exibe várias crps-i-como manifestações, incluindo edema dos membros traseiros e hiperemia no estágio inicial após o estabelecimento, persistentes hipersensibilidades térmicas e mecânicas, e aumento das respostas nocifensivas à injeção aguda de capsaicina. Estas características tornam-no um modelo animal adequado para uma investigação mais aprofundada dos mecanismos envolvidos na CRPS-I.

Introduction

A síndrome regional complexa da dor (CRPS) reprents os sintomas complexos e crônicos da dor resultando das fraturas, do traumatismo, da cirurgia, da isquemia ou do ferimento de nervo^1,2,3. Crps é classificado em 2 subcategorias: CRPS tipo-I e tipo-II (CRPS-I e CRPS-II)⁴. Estudos epidemiológicos revelaram que a prevalência de CRPS foi de aproximadamente 1:2000^5. Crps-I, que não mostra nenhum dano nervoso óbvio, pode resultar em dor crônica e afeta drasticamente a qualidade de vida dos pacientes. Os tratamentos atuais disponíveis mostram efeitos terapêuticos inadequados. Portanto, crps-i ainda continua a ser um problema clínico importante e desafiador que precisa ser resolvido.

Estabelecer um modelo animal pré-clínico imitando CRPS-I é crucial para explorar os mecanismos subjacentes CRPS-I. A fim de resolver esta questão, Coderre et al. projetou um modelo de rato aplicando isquemia prolongada e refusão para o membro traseiro para recapitular CRPS-I⁶. Sabe-se que a isquemia/lesão em reperfusão está entre uma das principais causas do CRPS-I^7. O modelo cpip rato exibe muitos crps-i-como sintomas, que incluem edema dos membros traseiros e hiperemia no estágio inicial após o estabelecimento do modelo, seguido com persistentes hipersensibilidades térmicas e mecânicas⁶. Com o auxílio deste modelo, propõe-se que a sensibilização central da dor, a ativação periférica do canal TRPA1 e a geração reativa de espécies de oxigênio, etc. contribuam para o CRPS-I^8,9,10. Recentemente, estabelecemos com sucesso o modelo de rato CPIP e realizamos o sequenciamento de RNA dos gânglios radiadores dorsais (DRGs) que internam a pata traseira afetada¹¹. Descobrimos alguns mecanismos potenciais que possivelmente estão envolvidos na mediação das hipersensibilidades da dor do CRPS-I¹¹. Ainda identificamos o canal de vaniloides potenciais do receptor transitório 1 (TRPV1) em neurônios DRG como um importante contribuinte para as hipersensibilidades mecânicas e térmicas do CRPS-I¹².

Neste estudo, descrevimos os procedimentos detalhados envolvidos na criação do modelo de rato da CPIP. Também avaliamos o modelo cpip de rato medindo as hipersensibilidades mecânicas e térmicas, bem como sua capacidade de resposta ao desafio agudo da capsaicina. Propomos que o modelo cpip rato pode ser um modelo animal confiável para uma investigação mais aprofundada dos mecanismos envolvidos no CRPS-I.

Protocol

Os protocolos animais foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Universidade Médica Chinesa de Zhejiang. 1. Animais Obtenha ratos machos Sprague-Dawley (SD) (280-320 g, 8-10 semanas de idade) do Shanghai Laboratory Animal Center. Abrigar os animais em Zhejiang Chinese Medical University Laboratory Animal Center. Observe que as condições de reprodução devem incluir 12 h/ 2h ciclos claros / escuros e manter a temperatura constante em 24 °C. Fornecer água e comida ad l…

Representative Results

Depois de colocar o Anel O no tornozelo, a pele da pata traseira ipsilateral mostrou cianose, uma indicação de hipóxia de tecido (Figura 1A). Depois de cortar o Anel O, a pata traseira ipsilateral começou a se encher de sangue e mostrou inchaço robusto, o que demonstrou um sinal intenso de hiperemia (Figura 1A). O inchaço da pata diminuiu gradualmente e voltou ao normal 48 h após o procedimento isquêmico/reperfusional (A…

Discussion

Este protocolo descreve os métodos detalhados para estabelecer um modelo de CPIP de rato aplicando isquemia/reperfusão aos membros traseiros dos ratos. Envolve a avaliação da aparência do membro traseiro, edema, hipersensibilidades mecânicas/térmicas e comportamentos nocifensivos agudos em resposta à injeção de capsaicina.

A isquemia/reperfusão dos membros é um fator comum que contribui para a CRPS-I em pacientes humanos^12. Este protocolo descreve como estab…

Materials

1.5 ml Eppendorf tube	Eppendorf	22431021
DMSO	Sigma-Aldrich	D1435
Capsaicin	APEXBIO	A3278
Digital caliper	Meinaite	NA
O-ring	O-Rings West	Nitrile 70 Durometer	7/32 in. internal diameter
Plantar Test Apparatus	UGO Basile, Italy	37370
von Frey filaments	UGO Basile, Italy	NC12775