الخلايا الجذعية الورم الدبقي (GSCs) هي جزء صغير من الخلايا السرطانية التي تلعب أدوارا أساسية في بدء الورم، وتولد الأوعية، ومقاومة الأدوية في الورم الأرومي الدبقي (GBM)، ورم الدماغ الأولي الأكثر انتشارا وتدميرا. وجود GSCs يجعل GBM الحرارية جدا لمعظم العوامل الفردية المستهدفة، لذلك هناك حاجة إلى طرق فحص عالية الإنتاجية لتحديد العلاجات مزيج فعالة محتملة. يصف البروتوكول سير عمل بسيط لتمكين الفحص السريع للعلاج المركب المحتمل مع التفاعل التآزري. الخطوات العامة لسير العمل هذا تتكون من إنشاء GSCs لوسيفيراز الموسومة، وإعداد لوحات المغلفة matrigel، الجمع بين فحص المخدرات، وتحليل، والتحقق من صحة النتائج.
الخلايا الجذعية الورم الدبقي (GSCs) هي جزء صغير من الخلايا السرطانية التي تلعب أدوارا أساسية في بدء الورم، وتولد الأوعية، ومقاومة الأدوية في الورم الأرومي الدبقي (GBM)، ورم الدماغ الأولي الأكثر انتشارا وتدميرا. وجود GSCs يجعل GBM الحرارية جدا لمعظم العوامل الفردية المستهدفة، لذلك هناك حاجة إلى طرق فحص عالية الإنتاجية لتحديد العلاجات مزيج فعالة محتملة. يصف البروتوكول سير عمل بسيط لتمكين الفحص السريع للعلاج المركب المحتمل مع التفاعل التآزري. الخطوات العامة لسير العمل هذا تتكون من إنشاء GSCs لوسيفيراز الموسومة، وإعداد لوحات المغلفة matrigel، الجمع بين فحص المخدرات، وتحليل، والتحقق من صحة النتائج.
الورم الأرومي الدبقي (GBM) هو النوع الأكثر شيوعا وعدوانية من ورم الدماغ الأساسي. وفي الوقت الحالي، لا يزال البقاء العام لمرضى GBM الذين تلقوا أقصى قدر من العلاج (مزيج من الجراحة والعلاج الكيميائي والعلاج الإشعاعي) أقصر من 15 شهرا؛ لذلك هناك حاجة ماسة إلى علاجات جديدة وفعالة لGBM.
وجود الخلايا الجذعية الورم الدبقي (GSCs) في GBM يشكل تحديا كبيرا للعلاج التقليدي لأن هذه الخلايا الجذعية مثل تلعب أدوارا محورية في الحفاظ على البيئة الدقيقة الورم, مقاومة الأدوية, وتكرار الورم1. ولذلك، فإن استهداف المركبات العالمية استراتيجية واعدة لعلاج GBM2. ومع ذلك ، فإن العيب الرئيسي لفعالية الدواء في GBM هو طبيعته غير المتجانسة ، بما في ذلك على سبيل المثال لا الحصر الفرق في الطفرات الجينية ، والأنواع الفرعية المختلطة ، والتنظيم اللاجيني ، والبيئة الدقيقة للورم مما يجعلها انكسارية للغاية للعلاج. بعد فشل العديد من التجارب السريرية، أدرك العلماء والباحثون السريريون أن العلاج المستهدف بعامل واحد ربما يكون غير قادر على التحكم الكامل في تطور السرطانات غير المتجانسة للغاية مثل GBM. وحيث أنه تمت الموافقة على تركيبات أدوية مختارة بعناية لفاعلية هذه العقاقير من خلال تعزيز تأثير بعضها البعض بشكل تآزري، مما يوفر حلا واعدا لعلاج GBM.
على الرغم من أن هناك العديد من الطرق لتقييم التفاعلات بين المخدرات والمخدرات من مزيج المخدرات, مثل CI (مؤشر الجمع), HSA (أعلى عامل واحد), وقيم بليس, الخ3,4, وعادة ما تستند هذه الأساليب الحسابية على تركيبات تركيز متعددة. والواقع أن هذه الأساليب يمكن أن توفر تقييما إيجابيا للتفاعل بين المخدرات والمخدرات، ولكنها يمكن أن تكون شاقة للغاية إذا طبقت في الفحص عالي الإنتاجية. لتبسيط العملية ، تم تطوير سير عمل فحص للتعرف بسرعة على مجموعات الأدوية المحتملة التي تمنع نمو GSCs من الخزعات الجراحية للمريض GBM. تم إدخال مؤشر الحساسية (SI) الذي يعكس الفرق بين التأثير المشترك المتوقع والتأثير المشترك الملاحظ في هذه الطريقة لتحديد تأثير التآزر لكل دواء ، بحيث يمكن تحديد المرشحين المحتملين بسهولة من خلال تصنيف SI. وفي الوقت نفسه، يوضح هذا البروتوكول شاشة مثال لتحديد المرشحين المحتملين (المرشحين) الذين يمكنهم تآزر تأثير مضاد للورم الدبقي مع تيموزولوميد، وهو العلاج الكيميائي من الخط الأول لعلاج GBM، من بين 20 مثبطا جزيئيا صغيرا.
في هذه الدراسة، تم وصف بروتوكول يمكن تطبيقه لتحديد العلاج المركب المحتمل ل GBM باستخدام GSCs المشتقة من المريض. وخلافا لنموذج القياس القياسي التآزر / الإضافة مثل Loewe، BLISS، أو HSA الأساليب، تم استخدام سير عمل بسيط وسريع لا يتطلب زوج المخدرات ليتم دمجها بتركيزات متعددة بطريقة عاملية كاملة كأسالي?…
The authors have nothing to disclose.
نشكر المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81672962)، ومؤسسة برنامج فريق الابتكار في مقاطعة جيانغسو، ومؤسسة المشروع الرئيسي المشترك لجامعة جنوب شرق وجامعة نانجينغ الطبية على دعمهم.
B-27 | Gibco | 17504-044 | 50X |
EGF | Gibco | PHG0313 | 20 ng/ml |
FGF | Gibco | PHG0263 | 20 ng/ml |
Gluta Max | Gibco | 35050061 | 100X |
Neurobasal | Gibco | 21103049 | 1X |
Penicillin-Streptomycin | HyClone | SV30010 | P: 10,000 units/ml S: 10,000 ug/ml |
Sodium Pyruvate | Gibco | 2088876 | 100 mM |
Table 1. The formulation of GSC complete culture medium. | |||
ABT-737 | MCE | Selective and BH3 mimetic Bcl-2, Bcl-xL and Bcl-w inhibitor | |
Adavosertib (MK-1775) | MCE | Wee1 inhibitor | |
Axitinib | MCE | Multi-targeted tyrosine kinase inhibitor | |
AZD5991 | MCE | Mcl-1 inhibitor | |
A 83-01 | MCE | Potent inhibitor of TGF-β type I receptor ALK5 kinase | |
CGP57380 | Selleck | Potent MNK1 inhibitor | |
Dactolisib (BEZ235) | Selleck | Dual ATP-competitive PI3K and mTOR inhibitor | |
Dasatinib | MCE | Dual Bcr-Abl and Src family tyrosine kinase inhibitor | |
Erlotinib | MCE | EGFR tyrosine kinase inhibitor | |
Gefitinib | MCE | EGFR tyrosine kinase inhibitor | |
Linifanib | MCE | Multi-target inhibitor of VEGFR and PDGFR family | |
Masitinib | MCE | Inhibitor of c-Kit | |
ML141 | Selleck | Non-competitive inhibitor of Cdc42 GTPase | |
OSI-930 | MCE | Multi-target inhibitor of Kit, KDR and CSF-1R | |
Palbociclib | MCE | Selective CDK4 and CDK6 inhibitor | |
SB 202190 | MCE | Selective p38 MAP kinase inhibitor | |
Sepantronium bromide (YM-155) | MCE | Survivin inhibitor | |
TCS 359 | Selleck | Potent FLT3 inhibitor | |
UMI-77 | MCE | Selective Mcl-1 inhibitor | |
4-Hydroxytamoxifen(Afimoxifene) | Selleck | Selective estrogen receptor (ER) modulator | |
Table 2. The information of 20 targeted agents used in the test screen. All of these are target selective small molecular inhibitors. The provider, name, and targets were given in the table. |