Bu makale, küçük bir kesi ile farelerde akut iskemi kurmak için etkili bir cerrahi yaklaşım göstermektedir. Bu yaklaşım, laboratuvar yükseltmesi yapılmadan çoğu araştırma grubu tarafından uygulanabilir.
Bu çalışmanın amacı, çoğu hayvan laboratuvarında uygulanabilen farelerde akut iskemiyi teşvik etmek için modifiye edilmiş bir cerrahi yaklaşım tanıtmak ve değerlendirmektir. Femoral arterin (DLFA) çift ligasyonu için konvansiyonel yaklaşımın aksine, DLFA yapmak için proksimal femoral arteri (FA) ortaya çıkarmak için sağ kasık bölgesinde daha küçük bir kesi yapıldı. Daha sonra 7-0’lık bir dikiş kullanılarak kesi diz bölgesine sürüklenerek distal FA’yı ortaya çıkardı. Ameliyattan 0, 1, 3, 5 ve 7 gün sonra, arka uzuvların fonksiyonel iyileşmesi tarlov ölçeği kullanılarak görsel olarak değerlendirildi ve derecelendirildi. Histolojik değerlendirme, DLFA’dan 7 gün sonra hayvanlara ötenazi yapıldıktan sonra yapıldı. İşlemler on ApoE-/- farede sağ bacakta başarıyla gerçekleştirildi ve sonraki gözlem sırasında hiçbir fare ölmedi. 10 farenin tamamında kesi boyutları 5 mm’den (4,2 ± 0,63 mm) azdı. MR sonuçları iskemik taraftaki SK kan akışının açıkça tıkandığını gösterdi. Tarlov ölçeği sonuçları, işlemden sonra arka eks uzuv fonksiyonlarının önemli ölçüde azaldığını ve takip eden 7 gün boyunca yavaşça iyileştiğini göstermiştir. Histolojik değerlendirmede iskemik tarafta anlamlı bir inflamatuar yanıt ve iskemik arka ektremitede mikrovasküler yoğunlukta azalma saptadı. Sonuç olarak, bu çalışma DLFA kullanarak arka ekstrepsiyon iskemisini (HLI) gerçekleştirmek için minyatür bir kesi kullanarak değiştirilmiş bir teknik tanıtmaktadır.
Periferik arter hastalığı (PAD) gibi damar hastalıklarında araştırma için klinik öncesi hayvan modellerinin karşılanmamış bir ihtiyacı vardır. Tanı ve tedavideki ileri gelişmelere rağmen, 2018’de 200 milyondan fazla PAD hastası vardı1ve sayıları sürekli artmaktadır. Çeşitli yeni terapötik yaklaşımlar2,3,4,5,6,7 tanımlanmış olsada,bu terapötik yöntemlerin klinik uygulamaya başarılı bir şekilde çevrilmeleri göz korkutucu bir görev olmaya devam etmektedir. Bu nedenle, pad6,7tedavi etmek için bu yeni terapötik yaklaşımların potansiyel mekanizmasını ve verimliliğini araştırmak için insan hastalığı durumunu simüle eden güvenilir ve ilgili in vivo deneysel modeller gereklidir.
Hiperlipidemi ve ateroskleroz (AS) PAD gelişimi için başlıca risk faktörleridir. ApoE-/- fareler (yüksek yağlı bir diyette) anormal yağ metabolizması ve hiperlipidemi gösterir ve daha sonra klinik olarak ilgili PAD’i simüle etmek için en iyi seçim olarak ApoE-/- fareleri işleyen aterosklerotik plaklar geliştirir. Preklinik HLI hayvan modelleri, tüm dünyadaki laboratuvarlarda en yaygın kullanılan yaklaşım olan femoral arterin (DLFA) çift ligasyonu yoluyla üretilir8, 9,10,11,12,13,14,15 akut-kronik iskemiyi simüle etmek için. Bununla birlikte, bu yaklaşım genellikle nispeten büyük ve invaziv bir kesi gerektirir. Ayrıca, kaçınılmaz olarak hayvanlara (özellikle farelere) artan ağrı yaralanması ve iltihaplanmadan muzdariptir, bu da sonraki deneysel sonuçları etkiler 5,6,16,17. Bu makalede, APOE-/- farelerde akut-kronik HLI modeli çok küçük bir kesi kullanılarak açıklanmaktadır.
Bu çalışma, gerekli laboratuvar yükseltmeleri yapılmadan 3-4 mm’lik bir kesi yoluyla SK’nın proksimal ve distal bölgelerinde çift ligasyon kullanarak ApoE-/- farelerde HLI modeli oluşturmak için modifiye edilmiş, basitleştirilmiş ve cerrahi olarak verimli bir yaklaşım bildirmektedir. Bu yöntemin temel özelliği, fare HLI modellerini açıklayan daha önce bildirilen çalışmalara kıyasla kesiğin daha küçük boyutudur 8 ,9,10<…
The authors have nothing to disclose.
Yazarlar Viktoria Skude, Alexander Schlund ve Felix Hörner’e mükemmel teknik destek için teşekkür ediyor.
10x Phosphate buffer saline | Roth | 9143.1 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
30% H2O2 | Roth | 9681.2 | Used for immunohistochemistry stain |
6-0 absorbable sutures | PROLENE | 8776H | Used for stitching the skin |
6-0 absroable suture | PROLENE | EP8706 | Used in Surgery |
7-0 absorbable sutures | PROLENE | EH8021E | Used for ligating the artery |
7-0 absroable suture | PROLENE | EP8755 | Used in Surgery |
Acetic acid | Roth | 6755.1 | Used for haematoxylin and eosin stain |
Albumin Fraktion V | Roth | 8076.2 | Used for immunohistochemistry stain |
Autoclave | Systec GmbH | Systec VX-150 | Used for the sterilisation of the surgical instruments |
Axio vert A1 microscope | Carl Zeiss | ZEISS Axio Vert.A1 | Used for viewing and taking the pictures from haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
Bruker BioSpec 94/20 AVIII | Bruker Biospin MRI GmbH | N/A | Scan the femoral artery blockage |
Buprenovet Sine 0,3mg/ml | Bayer AG | 2542 (WDT) | Used in post operative pain-management. Dose – 0.1 mg/kg body weight every 8 hours for 48 h after operation |
CD31 antibody | Abcam | ab28364 | Used for immunohistochemistry stain |
Eosin Y solution 0.5 % in water | Roth | X883.1 | Used for haematoxylin and eosin stain |
Epitope Retrieval Solution pH 6 | Leica Biosystems | 6046945 | Used for immunohistochemistry stain |
Ethanol ≥ 99,5 % | Roth | 5054.1 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
Fentanyl | Cayman Chemical | 437-38-7 | Used for anesthesia |
Fine point forceps | Medixplus | 93-4505S | Used for separating the artery from nerve and vein |
Glass bead sterilisator | Simon Keller | Type 250 | Used for sterilisation of the surgical instruments |
Graefe iris forceps curved | VUBU | VUBU-02-72207 | Used for blunt separation of skin and subcutaneous tissue |
Hair Remover cream, Veet (with aloe vera) | Reckitt Benckiser | 108972 | Remove hair from mice hind limbs |
Heating plate | STÖRK-TRONIC | 7042092 | Keep the satble temperature of mice |
Hematoxylin | Roth | T865.2 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
Leica surgical microscope | Leica | M651 | Enlarge the field of view to facilitate the operation |
Liquid DAB+Substrate Chromogen System | Dako | K3468 | Used for immunohistochemistry stain |
Male ApoE-/- mice | Charles River Laboratories | N/A | Used for establish the Peripheral artery disease mice model |
Medetomidine | Cayman Chemical | 128366-50-7 | Used for anesthesia |
Micro Needle Holder | Black & Black Surgical | B3B-18-8 | Holding the needle |
Micro suture tying forceps | Life Saver Surgical Industries | PS-MSF-145 | Used to assist in knotting during surgery |
Microtome | Biobase | Bk-Mt268m | Used for tissue sectioning |
Midazolam | Ratiopharm | 44856.01.00 | Used for anesthesia |
MR-compatible Small Animal Monitoring and Gating System Model 1025 | SA Instruments | N/a | monitoring vital signs of animal during MRI scan |
Octeniderm farblos | Schülke & Mayr GmbH | 180212 | used for disinfection of the skin |
Ointment for the eyes and nose | Bayer AG | 1578675 | Keep the eyes wet under the anesthesia |
Paraformaldehyde | Roth | 0335.1 | Used for fixation of the tissue |
Pentobarbital | Nembutal | 76-74-4 | Used for anesthesia |
Saline | DeltaSelect | 1299.99.99 | Used for anesthesia |
Spring handle scissors with fine, sharp tips | Black & Black Surgical | B66167 | Used for cutting the artery |
SuperCut Scissors | Black & Black Surgical | B55992 | Used for cutting the skin |
Triton X-100 | Roth | 9002-93-1 | Used for immunohistochemistry stain |
Western diet, 1.25% Cholesterol | ssniff Spezialdiäten GmbH | E15723-34 | Diet for the mice |
Xylene | Roth | 4436.3 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |