Ultrassonografia de Alta Resolução na Análise de Tumores Ortotópicos ATC em Modelo de Camundongo Geneticamente Modificado
Summary
O presente protocolo descreve a ultrassonografia de alta frequência para visualização de toda a glândula tireoide de camundongos e monitoramento do crescimento do carcinoma anaplásico de tireoide.
Abstract
O carcinoma anaplásico de tireoide (CTA) está associado a um prognóstico ruim e curto tempo médio de sobrevida, mas nenhum tratamento efetivo melhora significativamente os desfechos. Modelos murinos geneticamente modificados que imitam a progressão do ATC podem ajudar os pesquisadores a estudar tratamentos para essa doença. Cruzamento de três genótipos diferentes de camundongos, um TPO-cre/ERT2; BrafCA/wt; O modelo de ATC transgênico Trp53Δex2-10/Δex2-10 foi desenvolvido. O modelo murino ATC foi induzido por uma injeção intraperitoneal de tamoxifeno com superexpressão de BrafV600E e deleção de Trp53, e os tumores foram gerados em cerca de 1 mês. A ultrassonografia de alta resolução foi aplicada para investigar a iniciação e progressão do tumor, e a curva dinâmica de crescimento foi obtida medindo-se o tamanho do tumor. Comparada à ressonância magnética (RM) e à tomografia computadorizada, a ultrassonografia apresenta vantagens na observação do modelo murino ATC, como ser não invasiva, portátil, em tempo real e sem exposição à radiação. O ultrassom de alta resolução é adequado para medições dinâmicas e múltiplas. No entanto, o exame ultrassonográfico da tireoide em camundongos requer conhecimento anatômico e experiência relevantes. Este artigo fornece um procedimento detalhado para a utilização de ultrassom de alta resolução para varrer tumores no modelo ATC transgênico. Enquanto isso, o ajuste de parâmetros ultrassônicos, habilidades de varredura de ultrassom, anestesia e recuperação dos animais e outros elementos que precisam de atenção durante o processo são listados.
Introduction
Embora o carcinoma anaplásico de tireoide (ATC) seja responsável por menos de 2% dos cânceres de tireoide, ele causa mais de 50% das mortes relacionadas ao câncer de tireoide anualmente. O tempo mediano de sobrevida após o diagnóstico de ATC é de apenas cerca de 6 meses, e não há tratamentos disponíveis que melhorem significativamente a sobrevida 1,2.
A raridade do ATC tem dificultado a pesquisa que estuda como a doença começa e progride agressivamente. Recentemente, foram disponibilizados modelos de camundongos geneticamente modificados que mimetizam a doença, os quais fornecem informações sobre a doença e suas respostas a possíveis tratamentos 3,4,5. Tais estudos requerem imagens tumorais precisas para medidas e monitoramento, que geralmente são realizados por ressonância magnética, tomografia computadorizada ou ultrassonografia de alta resolução 6,7. A ultrassonografia tem sido amplamente utilizada em órgãos de camundongos. Tem vantagens sobre a ressonância magnética e a tomografia computadorizada, pois pode ser realizada em tempo real, não expõe o indivíduo à radiação, e o equipamento necessário é pequeno o suficiente para serportátil8,9. No entanto, estudos sobre o monitoramento contínuo do crescimento de ATC usando ultrassom são raros; Portanto, este trabalho explora a utilidade do ultrassom nesse contexto.
Aqui, um protocolo para o uso de ultrassonografia de alta resolução para escanear, monitorar e medir tumores com precisão em um modelo de ATC em camundongos é apresentado.
Protocol
Representative Results
Discussion
Este protocolo utiliza ultrassonografia de alta resolução para analisar tumores ATC ortotópicos em um modelo de camundongo geneticamente modificado. O modelo transgênico, com genótipo TPO-cre/ERT2; BrafCA/wt; Trp53 Δex2-10/Δex2-10, foi desenvolvido em nosso laboratório. Os animais superexpressam BrafV600E e não têm Trp53; A injeção intraperitoneal de tamoxifeno nos animais leva ao crescimento tumoral após aproximadamente 1 mês10. Os …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta pesquisa não recebeu nenhuma bolsa específica de agências de fomento públicas, comerciais ou sem fins lucrativos.
Materials
| Adhesive tape | Winner | ||
| Anesthesia system | RWDlifescience | ||
| Brafflox/wt mice | Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| Chamber for anesthesia induction | RWDlifescience | ||
| Cotton swabs | Winner | ||
| Depilatory cream | Veet | ||
| Electric heating blanket | Petbee | ||
| Isoflurane vaporizer | RWDlifescience | ||
| Medical gloves | Winner | ||
| Paper towels | Breeze | B914JY | |
| TPO-cre/ERT2 mice | Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| Trp53flox/wt mice | Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| Ultrasound gel | Keppler | KL-250 | |
| Ultrasound machine | VisualSonics | Vevo 3100 |
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