Summary

Un modello modificato di occlusione dell'arteria cerebrale media transcranica per studiare gli esiti dell'ictus nei topi anziani

Published: May 05, 2023
doi:

Summary

Questo protocollo dimostra un modello unico di ictus del topo con un infarto di medie dimensioni e un eccellente tasso di sopravvivenza. Questo modello consente ai ricercatori preclinici sull’ictus di estendere la durata dell’ischemia, utilizzare topi anziani e valutare gli esiti funzionali a lungo termine.

Abstract

Nella ricerca sperimentale sull’ictus, l’occlusione dell’arteria cerebrale media (MCAO) con un filamento intraluminale è ampiamente utilizzata per modellare l’ictus ischemico nei topi. Il modello MCAO a filamento mostra tipicamente un infarto cerebrale massiccio nei topi C57Bl/6 che a volte include tessuto cerebrale nel territorio fornito dall’arteria cerebrale posteriore, che è in gran parte dovuta a un’elevata incidenza di atresia dell’arteria comunicante posteriore. Questo fenomeno è considerato uno dei principali fattori che contribuiscono all’alto tasso di mortalità osservato nei topi C57Bl/6 durante il recupero a lungo termine dell’ictus dopo il filamento MCAO. Pertanto, molti studi sull’ictus cronico sfruttano i modelli MCAO distali. Tuttavia, questi modelli di solito producono infarto solo nell’area della corteccia e, di conseguenza, la valutazione dei deficit neurologici post-ictus potrebbe essere una sfida. Questo studio ha stabilito un modello MCAO transcranico modificato in cui l’MCA al tronco è parzialmente occluso in modo permanente o transitorio attraverso una piccola finestra cranica. Poiché la posizione dell’occlusione è relativamente prossimale all’origine dell’MCA, questo modello genera danni cerebrali sia nella corteccia che nello striato. L’ampia caratterizzazione di questo modello ha dimostrato un eccellente tasso di sopravvivenza a lungo termine, anche nei topi anziani, nonché deficit neurologici facilmente rilevabili. Pertanto, il modello murino MCAO qui descritto rappresenta uno strumento prezioso per la ricerca sperimentale sull’ictus.

Introduction

Quasi 800.000 persone subiscono un ictus negli Stati Uniti ogni anno e la maggior parte di questi ictus sonodi natura ischemica. Il ripristino tempestivo del flusso sanguigno cerebrale con attivatore tissutale del plasminogeno (tPA) e/o trombectomia è attualmente il trattamento più efficace per i pazienti colpiti da ictus; Tuttavia, il pieno recupero delle funzioni neurologiche a lungo termine è raro 2,3. Pertanto, la ricerca di una nuova terapia per l’ictus che miri al miglioramento funzionale è un’intensa area di ricerca che richiede modelli animali clinicamente rilevanti di ictus.

Il modello di ictus ischemico più comune nei roditori utilizza l’occlusione intraluminale dell’arteria cerebrale media (MCAO) per indurre l’ictus. In questo modello, inizialmente sviluppato da Zea Longa nel 1989, un filamento di nylon viene introdotto nell’arteria carotide interna (ICA) per bloccare il flusso sanguigno all’arteria cerebrale media (MCA)4. Tuttavia, questo modello presenta delle limitazioni. In primo luogo, quando il filamento viene inserito nell’ICA, anche il flusso sanguigno all’arteria cerebrale posteriore (PCA) potrebbe essere parzialmente bloccato, specialmente nei topi. Criticamente, l’arteria comunicante posteriore (PcomA), una piccola arteria che collega la circolazione cerebrale anteriore e posteriore, è spesso sottosviluppata in alcuni ceppi di topo, come C57Bl/6, il ceppo prevalentemente utilizzato nella ricerca sperimentale sull’ictus. Si ritiene che questa pervietà del PcomA contribuisca alla variabilità delle dimensioni della lesione nei topi dopo l’ictus5. Infatti, quando il flusso sanguigno al PCA scende precipitosamente durante l’MCAO e il PcomA non è in grado di fornire un flusso sanguigno collaterale sufficiente, l’infarto dell’ictus può espandersi nel territorio del PCA. Inoltre, in questo modello, una lunga durata dell’ischemia porta a una maggiore probabilità di mortalità nei topi. Di conseguenza, una breve durata MCAO di 30-60 minuti è tipicamente utilizzata nei topi. Tuttavia, la maggior parte dei pazienti colpiti da ictus sperimenta alcune ore di ischemia prima del trattamento di riperfusione. Pertanto, un modello di ictus murino con una durata estesa dell’ischemia è di elevata rilevanza clinica.

L’obiettivo generale di questa procedura è quello di modellare l’ictus ischemico in topi che hanno un infarto di medie dimensioni e un eccellente tasso di sopravvivenza. Questo modello transcranico MCAO affronta gli attributi critici dell’ictus clinico, poiché è possibile eseguire un’ischemia prolungata e i topi anziani tollerano bene questo modello, consentendo la valutazione a lungo termine del recupero funzionale.

Protocol

Tutte le procedure descritte in questo lavoro sono condotte in conformità con le linee guida NIH per la cura e l’uso degli animali nella ricerca e il protocollo è stato approvato dal Comitato per la cura e l’uso degli animali del Duke Institute (IACUC). Per il presente studio sono stati utilizzati topi maschi C57Bl/6 giovani (8-10 settimane) e anziani (22 mesi). Una panoramica di questo protocollo è illustrata nella Figura 1. 1. Preparazione chirurgica</s…

Representative Results

Con una visione diretta al microscopio operatorio, è possibile confermare visivamente che il flusso sanguigno MCA è bloccato durante l’ischemia. Il nostro studio precedente ha mostrato una riduzione del flusso sanguigno dell’>80% nell’area ischemica utilizzando un monitor laser Doppler6. Al fine di determinare le variazioni del flusso sanguigno post-MCAO, LSCI può essere utilizzato per confermare ulteriormente l’insulto ischemico e la riperfusione (Figura 1). Infat…

Discussion

Il primo modello di occlusione transcranica MCA è stato stabilito nei ratti nel 1981 11,12 e sostituito dal modello MCAO senza craniectomia nel1989 4. L’occlusione transcranica iniziale dell’MCA aveva un ampio campo chirurgico, tale che l’intera arcata zigomatica veniva rimossa e i muscoli tirati lateralmente. I tessuti locali si sono gonfiati dopo l’intervento chirurgico, causando stress e diminuzione dell’assunzione di cibo per gli anim…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Gli autori ringraziano Kathy Gage per il suo supporto editoriale. Le figure dello schema sono state create con BioRender.com. Questo studio è stato sostenuto da fondi del Dipartimento di Anestesiologia (Duke University Medical Center) e da sovvenzioni NIH (NS099590, HL157354, NS117973 e NS127163).

Materials

0.25% bupivacaine Hospira NDC 0409-1159-18
0.9% sodium chloride ICU Medical NDC 0990-7983-03
2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride (TTC)  Sigma or any available vendor
20 G IV catheter BD 381534 20 GA 1.6 IN
30 G needle BD 305106
4-0 silk suture Look SP116 Black braided silk
8-0 suture with needle  Ethilon 2822G
Alcohol swabs BD 326895
Anesthesia induction box Any suitable vendor Pexiglass make 
Electrical grinder JSDA JD 700
High temperature cautery loop tip Bovie AA03
Isoflurane Covetrus NDC 11695-6777-2
Laser doppler perfusion monitor Moor Instruments moorVMS-LDF1
Lubricant eye ointment Bausch + Lomb 339081
Mouse rectal probe Physitemp RET-3
Nitrous Oxide Airgas UN1070
Otoscope Welchallyn 728 2.5 mm Speculum
Oxygen Airgas UN1072
Povidone-iodine CVS 955338
Recovery box Brinsea  TLC eco
Rimadyl (carprofen) Zoetis 6100701 Injectable 50 mg/mL
Rodent ventilator Harvard Model 683
Temperature controller Physitemp TCAT-2DF 
Triple antibioric & pain relief CVS NDC 59770-823-56
Vaporizer RWD R583S

References

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Cite This Article
Sheng, H., Dang, L., Li, X., Yang, Z., Yang, W. A Modified Transcranial Middle Cerebral Artery Occlusion Model to Study Stroke Outcomes in Aged Mice. J. Vis. Exp. (195), e65345, doi:10.3791/65345 (2023).

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